【摘要】 目的：提取桃叶鸦葱根中多糖并测定多糖的含量。方法：采用煎煮法提取桃叶鸦葱根中多糖，采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量。结果：煎煮法提取桃叶鸦葱根中多糖的提取率为13.9%。葡萄糖在所试浓度范围(0.03～0.08mg·mL-1)内线性关系良好，r=0.999 2。平均回收率为101.7%，RSD=0.61%。桃叶鸦葱根中多糖平均含量96.64 mg·g-1，RSD=0.10%。结论：苯酚-硫酸法测定桃叶鸦葱根中多糖含量方法稳定可行，简便。
【关键词】 桃叶鸦葱;多糖类;分光光度法
【ABSTRACT】Objective:To extract Polysaccharides from Scorzonera sinensis Lipsch，Et Krasch and determine the content of polysaccharides.Methods:To extract Polysaccharides with decoction method.The contents of the Polysaccharides in Scorzonera sinensis Lipsch，Et Krasch were determined by Phenol-sulfurie acid method.Results:The extraction yield of Polysaccharides was 13.9%，and the standard curve was excellent liner in the concentration range of 0.03～0.08 mg·mL-1 with correlation coefficient of r=0.999 2.The recovery rates was 101.7%，RSD=0.61%.The content of polysacharides from Scorzonera sinensis Lipsch，Et Krasch was 96.64mg·g-1，RSD=0.10%.Conclusion:The method is proved to be stable，feasible and simple.
【KEY WORDS】Scorzonera sinensis，Polysaccharides，Spectrophotometry
桃叶鸦葱是菊科植物桃叶鸦葱(Scorzonera sinensis Lipsch，Et Krasch)的干燥全草。广泛分布于河北、内蒙、山东等地。民间有蜥蜴喂食烟袋油(主要成分为烟碱)后，用桃叶鸦葱的乳汁可瞬间解毒的报道。近来证实鸦葱属植物有保肝[1]及抗肿瘤[2]的作用。文献报道其化学成分主要为苯丙素、木脂素及其苷、倍半萜及其苷、三萜及其苷和黄酮类化合物[3-6]。作者在前期研究发现，桃叶鸦葱中含有大量多糖类成分。多糖广泛存在于生物体中，是维持生命活动正常运转基本物质之一。近年来，植物多糖在抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗炎及提高免疫功能等方面的药理作用受到了人们的高度关注[7-9]。本试验采用水提醇析的方法提取桃叶鸦葱中多糖，采用苯酚-浓硫酸法[10]测定桃叶鸦葱多糖的含量，为桃叶鸦葱的开发应用提供理论依据，也为其药理作用的进一步研究提供物质基础。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1仪器UV-2100紫外可见分光光度计(北京莱伯泰科仪器有限公司);微量分析天平(TG-322A上海天平仪器厂);CS66-2电热恒温干燥箱(上海神模电器有限公司) 。
1.1.2药品、试剂
葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所)，桃叶鸦葱(采自河北省赤城县)，其他试剂均为国产分析纯。
1.2方法
1.2.1多糖的提取
取适量桃叶鸦葱根粉碎，粉末经95%乙醇浸提3次，药渣置室温干燥。称取药渣25g，加入250mL的蒸馏水，煎煮2h，滤过，加入4倍体积的无水乙醇，搅匀，静置过夜，抽滤，所得沉淀依次用适量无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，置干燥箱中干燥，称重，计算提取率。
1.2.2桃叶鸦葱中多糖含量的测定
1.2.2.1葡萄糖标准溶液的配制
精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，置100mL的容量瓶中，加水溶解定容，摇匀，配成含葡萄糖100mg·mL-1的溶液备用。
1.2.2.2多糖供试品溶液的配制
精密称取桃叶鸦葱多糖样品6.0mg，置100mL容量中，加水溶解定容，摇匀备用。
1.2.2.3苯酚试液的配制
取苯酚100g，加热蒸馏，收集馏分。精密称取该馏分3g，置50mL棕色容量瓶中，加水溶解定容，摇匀，避光密封备用。
1.2.2.4检测波长的确定
精密吸取葡萄糖标准溶液1.0mL，置锥形瓶中，加入1.0mL苯酚试液摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，立即摇匀，室温放置30min，平行空白，显色后，从300nm到550nm扫描，确定最大吸收波长。
1.2.2.5标准曲线的制备
精密量取葡萄糖标准溶液适量，分别加水稀释制成0.03mg·mL-1、0.04mg·mL-1、0.05mg·mL-1、0.06mg·mL-1、0.07mg·mL-1、0.08mg·mL-1的溶液，摇匀。分别精密吸取上述不同浓度溶液1.0mL，置锥形瓶中，加入1.0mL苯酚溶液，摇匀，迅速加入浓硫酸5.0mL，立即摇匀，室温放置30min，平行空白，在490nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，葡萄糖的浓度为横坐标，绘制标准曲线。
1.2.2.6精密度试验
精密称取桃叶鸦葱多糖样品6.0mg，置100mL容量中，加水溶解定容，摇匀，按“2.2.5标准曲线”项下操作，平行5份，测定记录吸光度A，计算其RSD。
1.2.2.7稳定性试验
精密称取桃叶鸦葱多糖样品6.0mg，置100mL容量中，加水溶解定容，摇匀，按“2.2.5标准曲线”项下操作，分别于20、40、60、80、100、120、140、160min测定吸光度，计算其RSD，考察供试品稳定性。
1.2.2.8重现性试验
取同一批药材粉末5份，分别按上述方法制备供试液，按“2.2.5标准曲线”项下操作，测定吸光度(A)，计算其RSD。
1.2.2.9回收率试验
精密称取桃叶鸦葱多糖样品5份各6.0mg，加水溶解后，定容至100mL容量瓶中，摇匀，精密吸取1mL，分别精密加入葡萄糖标准品0.2mg，按“2.2.5标准曲线”项下操作，测定吸光度，计算回收率。
1.2.2.10含量分析
精密称取桃叶鸦葱多糖样品3份各6.0mg，加水溶解后，定容至100mL容量瓶中，摇匀精密吸取供试品溶液1mL，置锥形瓶中，按“2.2.5标准曲线”项下操作，根据标准曲线计算含量。
2结果
2.1多糖的提取 选定条件提取桃叶鸦葱多糖的得率为13.9%。
2.2桃叶鸦葱中多糖含量的测定
2.2.1检测波长的确定
由图1可见葡萄糖标准溶液在490nm处有较大吸收，故选定490nm为检测波长。图1葡萄糖标准溶液紫外光谱
2.2.2标准曲线的制备
在490nm波长下测定吸光度，标准曲线方程为A=9.957 1C+0.069 1，r=0.999 2。结果表明，葡萄糖标准溶液在0.03～0.08mg·mL-1范围内与吸光度值呈良好的线性关系。
2.2.3精密度试验
实验结果平均吸光度为0.520 0，RSD=0.07%;浓度的平均值为0.045 3mg·mL-1，RSD=0.10%，表明实验精密度良好。
2.2.4稳定性试验
实验结果平均吸光度为 0.517 8，RSD=0.23%;浓度的平均值为0.045 1mg·mL-1，RSD=0.28%，表明该供试液稳定性良好。
2.2.5重现性试验
实验结果平均吸光度为0.515 2，RSD=0.09%;浓度的平均值为0.044 8mg·mL-1，RSD=0.24%。
2.2.6回收率试验
结果表明，此操作方法平均回收率为101.7%，RSD=0.61%，符合实验要求。
2.2.7含量测定
实验结果表明桃叶鸦葱多糖供试液中以葡萄糖计的多糖平均浓度为0.045 3mg·mL-1，桃叶鸦葱中多糖的平均含量为96.64mg·g-1，RSD=0.10%。结果见表1。表1多糖的含量
3讨论
苯酚-硫酸法是多糖含量测定的常用方法之一，其测定的原理是：先利用硫酸将多糖水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛，糖醛与苯酚缩合形成有色化合物，紫外吸收值与糖含量呈线性关系，在490nm波长处有特征吸收而测定的。本方法操作简单、显色稳定、准确度高，所需仪器和药品价格低廉，可作为桃叶鸦葱多糖的常规检测方法。
参考文献
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