作者：何涛 赵紫罡 张明鸣 伍晓汀
【摘要】 目的：探讨胰岛素样生长因子结合蛋白2（IGFBP-2）在胃癌腹膜转移组织中的表达。方法：对35例外科切除胃癌标本的正常黏膜、肿瘤原发灶和腹膜转移灶进行IGFBP-2蛋白的免疫组化染色，并用计算机图像分析软件测定其积分光密度。结果：肿瘤原发灶中IGFBP-2蛋白表达水平比正常黏膜明显增高(P＜0.05)，腹膜转移灶中IGFBP-2蛋白表达较原发灶显著下调(P＜0.05)；正常黏膜与腹膜转移灶中IGFBP-2蛋白表达水平之间差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：IGFBP-2蛋白表达水平与胃癌细胞的生长呈正相关，而与腹膜转移程度呈负相关。
【关键词】 IGFBP-2；胃癌；腹膜转移；免疫组化
Abstract Objective：To study the expression of IGFBP-2 protein in gastric cancer peritoneal metastasis tissues.Methods： The immunohistochemical expression of IGFBP-2 protein was measured by image analysis in 35 surgically resected specimens of gastric cancer(include normal mucosa， primary tumors and peritoneal metastases).Results： The expression of IGFBP-2 protein in gastric primary tumor tissues was significantly higher than that in normal mucosa (P＜0.05).The significantly down-regulation was observed in the peritoneal metastases， compared with primary tumors (P＜0.05).No statistical difference was observed between normal mucosa and the expression of IGFBP-2 in gastric carcinoma peritoneal metastases (P＞0.05).Conclusion： The expression of IGFBP-2 protein was positively correlated with invasion， progression of gastric cancer cell， but negatively correlated with peritoneal metastasis of gastric cancer.
Key words IGFBP-2;Gastric cancer;Peritoneal metastasis;Immunohistochemistry
作为消化系统最常见的恶性肿瘤之一，胃癌的预后目前仍不理想。胃癌的腹膜转移是造成患者预后差的主要原因，约60%的晚期胃癌患者死于这种转移方式。对胃癌与腹膜转移病因的研究将有助于加深我们对胃癌生物学行为的认识。胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)基因在所有的胃癌细胞株均有表达，而IGFBP其它亚型仅在部分胃癌细胞株中表达，提示IGFBP-2在胃癌的发生机制中起着独特的作用［1］。Hippo等［2］对高度倾向于腹膜转移胃癌细胞株OCUM-2MD3的研究发现，该细胞株的IGFBP-2基因表达明显下调，说明IGFBP-2可能与胃癌的腹膜转移具有极大的相关性。目前关于IGFBP-2与胃癌关系的研究报道较少，具体机理尚未阐明。本实验采用了免疫组化技术检测了35例胃癌发生腹膜转移患者的正常黏膜、原发灶、腹膜转移灶标本中IGFBP-2蛋白的表达，以期找出IGFBP-2在胃癌生长和腹膜转移中的作用规律，为胃癌的临床诊治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 标本采集 于2003年11月至2004年5月间从华西医院普外科病房入院患者手术中采集新鲜胃癌标本35例。每例包括距癌边缘5cm以上的正常黏膜、原发灶、腹膜转移灶标本。病例为随机收集，凡术中诊断胃癌腹膜转移者均可纳入，其中男女之比为3∶1，年龄30～78岁，平均年龄52岁。标本用4%甲醛固定，常规石蜡包埋备用。同时切取部分标本行病理切片HE染色以确定胃癌的组织学分型，并证实正常黏膜无癌累及，腹膜转移灶为癌累及结节，以保证所取标本合格。
1.2 免疫组化染色 所有标本行4μｍ厚连续切片，免疫组化采用SP法。羊抗人IGFBP-2(C-18)由Santa Cruz Biotech公司提供，工作浓度为1∶1 000。SP-9003试剂盒购于中山生物技术公司。IGFBP-2蛋白染色主要出现在胞浆内，肿瘤细胞胞浆内出现棕黄色颗粒即为阳性，反之为阴性。根据着色深浅、结合着色细胞数目初步判断阳性程度。
1.3 图像分析和统计方法 每张切片均取5个高倍视野摄片，采用美国Image-Pro Plus专业图像分析软件对IGFBP-2蛋白染色阳性的正常黏膜、原发灶、腹膜转移灶分别进行积分光密度测量，以均数±标准差表示。应用SPSS10.0软件包进行方差分析，以P＜0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 免疫组化结果 原发灶组IGFBP-2蛋白阳性程度高于正常黏膜组，腹膜转移灶组IGFBP-2蛋白阳性程度低于原发灶组。IGFBP-2蛋白染色主要出现在正常黏膜腺体和肿瘤细胞的胞浆内，以下为各组免疫组化图示。详见图1～图3。
2.2 图像分析结果 IGFBP-2蛋白表达水平以积分光密度表示。原发灶组IGFBP-2蛋白的积分光密度显著高于正常黏膜组和腹膜转移灶组，差异有统计学意义(P＜0.01)，而正常黏膜组和腹膜转移灶组相比较差异无统计学意义(P＞0.05)。详见表1。
图1 正常黏膜(IHC，×200)（略）
图2 原发灶(IHC，×200)（略）
图3 腹膜转移灶(IHC，×200)（略）
表1 正常黏膜组、原发灶组和腹膜转移灶组IGFBP-2蛋白表达水平的比较（略）
3 讨论
研究显示通过体外实验观察到IGFBP-2结合于尤文氏肉瘤细胞株A673和乳腺癌细胞株Hs578T细胞表面，诱导粘附激酶的脱磷酸化作用，从而抑制细胞间的粘附力和增加细胞的移动性，并且这种结合过程也依赖IGFBP-2的蛋白产物中一个RGD序列(Gly-Arg-Asp)RGD三肽序列［3］。有学者认为IGFBP-2蛋白的RGD序列，能够与肿瘤细胞膜的α5β1整合素特异地结合，从而减少细胞间的粘附［4］。
我们的研究结果表明原发灶中IGFBP-2蛋白表达水平显著高于正常黏膜。在纳入的35例发生了腹膜转移的病例中，病理类型主要是低分化癌，易于向周围侵袭。我们考虑在造成胃癌增殖侵袭中，IGFBP-2以RGD序列与胃癌细胞膜α5β1整合素结合，降低胃癌细胞间的粘附，增加其活动性，有利于在胃壁组织中发生侵袭性生长。另外我们的资料也显示出腹膜转移灶IGFBP-2蛋白水平比原发灶明显降低，与前面Hippo等［2］报告的倾向于腹膜转移细胞株的IGFBP-2基因表达明显下调相一致。这说明IGFBP-2表达水平下调有利于腹膜的种植转移。IGFBP-2表达水平升高能够减少细胞间的粘附，其表达水平降低是否增加了胃癌细胞对腹膜的粘附，或者存在其它作用机制，还有待于进一步探讨。由此可见，IGFBP-2能促进胃癌细胞的侵袭生长，在胃癌侵袭、腹膜转移中发挥着重要作用。能否通过检测IGFBP-2血清水平或腹腔冲洗液水平来预测胃癌的腹膜转移，为临床诊治提供新途径，值得进一步思索。
参考文献
［1］ Yi HK， Hwang PH， Yang DH，et al.Expression of the insulin-like growth factors (IGFs) and the IGF-binding proteins (IGFBPs) in human gastric cancer cells［J］.Eur J Cancer，2001，37(17):2257-2263.
［2］ Hippo Y， Yashiro M， Ishii M，et al.Differential gene expression profiles of scirrhous gastric cancer cells with high metastatic potential to peritoneum or lymph nodes［J］.Cancer Res，2001，61(3):889-895.
［3］ Schütt BS， Langkamp M， Ranke MB，et al.Intracellular signalling of insulin-like growth factor binding protein-2［J］.Growth Horm IGF Res，2000，10: 29.
［4］ Schutt BS， Langkamp M， Rauschnabel U，et al.Integrin-mediated action of insulin-like growth factor binding protein-2 in tumor cells［J］.J Mol Endocrinol，2004，32(3):859-868.