环氧合酶2和微血管密度与胃癌淋巴结转移及临床分期的关系

【摘要】 目的 观察胃癌组织中环氧合酶(COX2)的表达及微血管密度与患者淋巴结转移之间的关系。方法 检测COX2在胃癌细胞中的表达、计算肿瘤组织中微血管密度值，观察它们与患者临床分期、淋巴结转移的关系。结果 COX2的表达主要分布在胞浆，I期胃癌细胞均未表达COX2，随淋巴结转移站别的增高，阳性级别增加。随淋巴结转移站别的增高，胃癌组织中微血管密度明显增加，组间比较差异有统计学意义(P&<0.01);随胃癌TNM分期的增高， COX2表达增多，微血管密度明显增加，组间比较差异有统计学意义(P&<0.01或0.05)。结论 胃癌组织中COX2的表达及微血管密度与患者淋巴结转移之间有密切的关系。随淋巴结转移站别的增高，COX2表达增多，微血管密度明显增加。

【关键词】 COX2;微血管密度;胃癌;转移

Abstract：Objective To observe the associations of cyclooxygenase2 (COX2) and microvessel density (MVD) with lymph node metastasis and clinical staging in gastric cancer. Methods COX2 expression in gastric carcinoma cells was detected and MVD value in tumor tissue was calculated. The association of COX2 and MVD with lymph node metastasis and TNM staging in gastric cancer was analyzed. Results COX2 mainly expressed in cytoplasm and could not be detected in gastric cancer cells of TNM stage I. The positive expression strength of COX2 was increasing as the lymph node metastasis increased. The MVD value in cancer tissue obviously increased as the lymph node metastasis increased， with a significant difference among the groups (P&<0.01). Both COX2 expression and MVD value increased as the TNM stage progressed， with a significant difference among the groups (P&<0.01 or 0.05). Conclusion The COX2 expression and the MVD value are associated with lymph node metastasis and TNM stage in gastric carcinoma.

　　Key word: COX2; MVD; gastric cancer; metastasis

　　肿瘤恶性生物学行为最为重要的是癌细胞的无限增殖和转移，而肿瘤血管形成又是癌细胞增殖和转移的基础，近来研究显示环氧合酶2(eyelooxygenase2，COX2)高表达可促进肿瘤的血管生成与转移，在肿瘤新生血管形成中起到重要作用。为此，我们分析70例胃癌患者癌组织中微血管密度(MVD)和COX2的情况，了解它们在胃癌临床分期、淋巴结转移及其它部位远处转移的的关系。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　选择本院2000-2008年胃肠外科手术治疗的胃癌标本70例，其中男44例，女26例;年龄18.5～75.6岁，平均(46.4±11.8)岁，手术方式包括根治性胃癌切除术52例，非根治性手术18例，患者术前均未进行过任何放疗或化疗。根据国际抗癌联盟(UICC)胃癌TNM分期进行临床分期：I期12例，Ⅱ期18例，Ⅲ期22例，Ⅳ期l8例。转移情况：无局部淋巴转移者15例，发生第1站淋巴结转移者18例，第2站淋巴结转移者20例，第3站淋巴结转移者12例，发生远处转移5例，其中肝转移2例、腹膜广泛转移2例和卵巢转移1例。

　　1.2 实验方法

　　COX2：采用ABC法免疫组化染色(试剂盒购自美国Vector公司)，组织切片经二甲苯脱蜡、酒精水化后，浸入3 mL/L的过氧化氢中30 min，以阻断内源性过氧化酶的活性，然后将玻片置入0.01 mol/L，pH 6.0的柠檬酸缓冲液中加热煮沸30 min，以充分暴露抗原，滴加兔抗人COX2多抗(北京中山生物技术公司)，4℃ 孵育过夜，再滴加二抗，室温下反应20 min，过氧化酶反应15 min，随后经二氨基联苯胺四盐酸盐显色5 min，再经苏木素复染，脱水、透明、封片。每次染色均以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。结果在细胞胞浆中出现棕黄色颗粒且着色明显高于背景或背景不着色而细胞着色者即为阳性细胞，每张切片根据阳性细胞染色强度及阳性细胞百分数的多少进行分级：染色强度(未着色、弱、中、强)及阳性细胞百分数(0%、1～25%、26～50%、&>50%)，分别积分为0、1、2、3分，根据这2项指标和积分数之和分为4级，即2项分数之和为0分者，计为COX2表达阴性(-)，1～2分者为弱阳性(+)，3～4分者为阳性()，5～6分者为强阳性()，并根据TNM分期计算其平均分，即每组阳性积分总值除以每组例数。

　　胃癌病变组织微血管的计算：于40倍光镜下选取被CD34染成棕色的肿瘤微血管分布的最高区域，再在200倍视野下计数5个视野的微血管数目，取其平均值作为肿瘤组织的MVD值，只要它们和邻近的微血管、肿瘤细胞或其他结缔组织分开，就把它们作为一个微血管，但肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞直径的血管不计数。用北航CMIAS图像分析系统对染色阳性血管进行密度定标，由计算机自动求和并取平均值。

　　1.3 统计学处理

　　数据以均数±标准差表示。采用SPSS 11.5软件包行统计学处理，组间均数比较采用单因素方差分析及q检验，分布之间的比较采用秩和检验。

　　2 结果

　　2.1 COX2的表达

　　胃癌细胞浆中出现大小不等的棕黄色颗粒，以位于靠近基底膜方向的胞浆分布较为密集。无淋巴结转移的患者胃癌细胞未表达COX2蛋白;其它组患者胃癌细胞中随淋巴结转移站级别的增高，COX2阳性表达增加(P&<0.01)。见表1。表1 COX2表达与淋巴结转移站别的关系Hc=55.201， P&<0.01。

　　2.2 MVD与淋巴结转移站别的关系

　　随淋巴结转移站别的增高， MVD明显增加，组间比较差异有统计学意义(P&<0.01)，见表2。表2 淋巴结转移站别的MVD差异情况组间两两比较：均P&<0.01。

　　2.3 胃癌TNM分期与COX2蛋白表达和MVD的关系

　　随胃癌TNM分期的增高，COX2蛋白表达增多，MVD明显增加，两者间上升趋势一致，组间比较差异有统计学意义(P&<0.01或0.05)，见表3。表3 胃癌TNM分期与COX2蛋白表达和MVD的关系组间两两比较：vsP&<0.05，其余P&<0.01。

　　3 讨论

　　转移是恶性肿瘤的基本生物学行为，也是临床肿瘤治疗失败的主要原因，因此对肿瘤转移机制的研究在肿瘤的防治方面具有极其重要的意义。大量的研究表明血管生成在原发肿瘤的生长与侵袭中至关重要[1]，肿瘤向外浸润生长过程中，血管生成是同步进行的，肿瘤性新生血管结构异常、排列紊乱、基底膜不完整，癌细胞可经内皮细胞间隙、血管幼芽开放末端等途径造成肿瘤的远处转移[2]。所以本研究使用MVD作为观察胃癌远处转移的重要指标。本研究结果显示，有淋巴结转移者MVD值大于淋巴结转移阴性者;随着淋巴结转移站级别越高，MVD值越大，本研究中不同淋巴结转移站级别的MVD值比较差异有统计学意义(P&<0.01)。

　　环氧合酶是花生四烯酸转化为前列腺素的限速酶，有COX1和COX2两种同工酶。其中COX2为诱生型，在正常组织中无表达或弱表达，当受到各种细胞因子刺激后可大量表达，其中在炎症和肿瘤组织中均有高度表达[34]。本研究发现，原位癌的细胞未表达或仅微量表达COX2，而进展期癌细胞内大量表达COX2，并且随患者淋巴结转移站级别的提高，COX2阳性表达增加(P&<0.01)，这说明COX2与胃癌组织的临床分期及淋巴结转移密切相关。本研究同时发现，COX2高表达组与MVD高表达组重合，即随患者临床分期的提高，COX2阳性级别与MVD同时增加，组间差异有统计学意义(P&<0.01或0.05)。其原因可能在于COX2的过表达可促进肿瘤细胞增殖，抑制凋亡发生，促进细胞黏附;COX2过表达与肿瘤新生血管形成有关，可促进血管内皮生长因子、血管内皮细胞迁移和管状结构的形成[5]。所以通过本研究我们认为肿瘤细胞中COX2的高表达及MVD值可以作为评估胃癌患者临床分期、淋巴结转移及其它部位远处转移的重要指标。

参考文献

1] 胡关漪.胃癌组织中VEGF和CD34的表达及MVD的临床病理意义[J].中国厂矿医学， 2005， 18(2):9799.

　　[2] 涂毅， 姚峰， 魏文，等. 胃癌中微血管密度及VEGF、NOS表达与肿瘤浸润、转移的相关性[J]. 武汉大学学报(医学版)， 2006， 27(6):764766.

　　[3] 肖炜明， 施瑞华， 丁岩冰， 等. 胃癌组织中EGFR和COX2表达的意义及其相关性[J]. 世界华人消化杂志， 2007， 15(2):123128.

　　[4] 毛鑫礼，叶丽萍，陈霞. 胃癌原发灶和转移灶中COX2表达水平的比较研究[J]. 浙江医学， 2007，29(5):428430.

　　[5] Prakono P， Tazawa R M. Gene transfer of thromoboxane A2 synthase prosta glandin 12 synase antithetically altered tumor angionegesis tumor growth[J]. Cancer Res， 2002，62(1):6366.