作者：肖红燕， 马爱玲， 张宁妹， 徐远义
【摘要】 目的 探讨Ki-67、C- erbB-2及GST-π在乳腺癌组织中表达的意义。方法 采用免疫组化法检测104例乳腺癌组织中Ki-67、C-erbB-2及GST-π的表达。结果 104例乳腺癌组织中Ki-67、C-erbB-2及GST-π的阳性表达率分别为73.07%、76.92%和42.31%；Ki-67 、GST-π、C-erbB-2与腋窝淋巴结转移呈正相关（P＜0.05）。结论 Ki-67、C- erbB- 2及GST-π可作为反映乳腺癌恶性程度的细胞生物学因子，联合检测若均表达提示乳腺癌恶性程度较高。
【关键词】 乳腺癌；基因表达；免疫组化；Ki-67；C-erbB-2；GST-π
乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，在西方国家其发病率和死亡率均居女性恶性肿瘤之首。目前我国女性乳腺癌的发病率逐年上升，发病年龄有提早趋势，其预后的判断更为人所关注，而有淋巴结转移是公认的恶性程度高的指标。本文对104例乳腺癌组织进行细胞核增殖抗原（如Ki-67）、原癌基因（如C- erbB- 2）、谷胱甘肽- s转移酶(如GST-π)检测，研究三个基因在乳腺癌组织中的表达情况，分析它们之间的相互关系，结合淋巴结转移和肿瘤大小分析它们在乳腺癌组织中表达的意义。
1 材料与方法
1.1 材料 收集宁夏医科大学附属医院2005年1月—2008年4月保存的104例乳腺癌患者癌组织标本，患者均为女性，年龄27～81 岁，平均年龄47岁。患者术前均未接受化疗、放疗等抗癌治疗，全部病例均常规行胸部X线片、腹部盆腔B超等检查，明确分期并排除其他肿瘤者。按照国际抗癌联盟(UICC) 2002TNM分期标准：I期11例，II期76例，III期15例。按照WHO 乳腺癌肿瘤组织学分类标准：浸润性导管癌93例，浸润性小叶癌5例，黏液性腺癌4例，浸润性小管癌2例。
1.2 免疫组化试剂及方法 鼠抗人GST-π单克隆抗体，兔抗人C-erbB-2、Ki-67单克隆抗体，均购自福州迈新公司，按免疫组化（SP）法操作规程进行。本实验用已知的乳腺癌切片作阳性对照，用PBS 代替一抗作阴性对照。
1.3 判断标准 Ki-67为胞核着色；C-erbB-2为胞膜及胞浆着色；GST-π为胞浆着色。在镜下观察阳性细胞比例及阳性着色强度，按Shimizu方法［1］评分标准进行半定量积判断结果。阳性细胞数按无着色、阳性细胞数＜1/3、1/3～2/3和＞2/3分别判为0、1、2、3分；每张切片阳性细胞的着色强度按无着色、黄色、棕黄色和棕褐色分别判为0、1、2、3分，根据两项打分之和判断其结果，≥3分为阳性。
1.4 统计学方法 应用SPSS 11.5统计软件对实验数据进行χ2 检验，非参数Spearman相关分析。
2 结果
2.1 乳腺癌组织中Ki-67、C-erbB-2及GST-π表达情况 Ki-67、C-erbB-2及GST-π在乳腺癌组织中的表达，Ki-67阳性表达率为73.08%（76/104），C-erbB-2阳性表达率为76.92%（80/104），GST-π阳性表达率为42.31%（44/104），三者在乳腺癌组织中都呈高表达(图1，见封2)。
2.2 乳腺癌组织中Ki-67、C-erbB-2及GST-π的表达与肿瘤大小的关系 C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达与肿瘤大小有相关性（P＜0.01）；Ki-67和GST-π在乳腺癌组织中的表达与肿瘤大小无明显关系（P＞0.05），见表1。表1 Ki-67、C-erbB-2及GST-π的表达与肿瘤大小的关系
2.3 乳腺癌组织中Ki-67、C-erbB-2及GST-π的表达与淋巴结转移的关系
Ki-67、C-erbB-2及GST-π在腋窝淋巴结转移组的表达高于腋窝淋巴结无转移组，三者与淋巴结转移有明显相关性，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。表2 Ki-67、C-erbB-2及GST-π的表达与淋巴结转移的关系
淋巴结转移nKi-67阳性例数阳性率（%）C-erbB-2阳性例数阳性率（%）GST-π阳性例数阳性率（%）有605286.875286.873253.3无442454.552863.641227.2χ2值13.3127.5847.063P值＜0.01＜0.05＜0.052.4 乳腺癌组织中Ki-67及GST -π的表达与C-erbB-2的关系Ki-67、GST-π在C-erbB-2 阳性病例组中的表达率高于在C-erbB-2阴性病例组中的表达率，三者呈明显正相关性，差别具有统计学意义( P＜0.01)，见表3。 表3 104例乳腺癌Ki-67及GST-π的表达
3 讨论
Ki-67抗原是1983年由Gerdes等［2］发现的在增殖细胞中表达的一种核抗原，也是目前较为肯定的核增殖标记物。它开始表达于细胞周期的G1期，在S期及G2期表达增加，至M期达高峰，在细胞分裂晚期很快消失。由于其半衰期短，故已成为检测肿瘤细胞增殖活性最可靠的指标［3］。研究表明Ki-67表达能可靠而迅速地反映恶性肿瘤增殖率，与多种恶性肿瘤的发展、转移及预后有关［4-5］。Ki-67表达的高低对评价细胞的增殖状态、研究肿瘤的生物学行为、判断其预后具有重要意义。本研究结果显示，Ki-67在乳腺癌组织中阳性表达率为73.08%，这与Bhatavdekar 等［6］报道的Ki-67在乳腺癌组织中阳性表达率78.0%相近。NiewiadomskaH 等［7］报道Ki-67的表达与乳腺癌肿瘤淋巴结转移之间存在着密切相关性，即Ki-67表达阳性的乳腺肿瘤细胞的恶性程度大，细胞增殖活跃，因此肿瘤转移的机会高。本研究结果Ki-67在淋巴结有转移组的阳性表达率为86.87%明显高于Ki-67在淋巴结无转移组的阳性表达率54.55%，与报道相符。表明Ki-67在乳腺癌组织中呈高表达状态，其又与淋巴结转移有相关性，可以作为乳腺癌恶性程度的临床评判指标。
C-erbB-2是一种细胞来源的癌基因，正常情况下处于非激活状态，参与细胞生长、分化的调节，当受到体内外某些因素作用而被激活时，具有肿瘤转化活性。目前C-erbB-2 已被公认为是与乳腺癌发生发展密切相关的癌基因，参与调控细胞生长、增殖及分化，其产物过度表达常提示恶性程度高，预后差。本实验研究显示C-erbB-2在乳腺癌组织中阳性表达率为76.92%，其阳性表达者中腋淋巴结转移率为86.87%，可以说明C-erbB-2与淋巴结转移有相关性，其阳性表达率越高者，淋巴结转移率越高，这与Learn的报道［8］相同。同时结果还显示了C-erbB-2与肿瘤大小有明显相关性。随着肿瘤的增大C-erbB-2在乳腺癌组织中的阳性表达率越高。
GST-π存在于人体与动物细胞胞浆，具有保护、储存、结合、转运等生理功能，其中π类同工酶与肿瘤关系最密切［9］。GST-π定位于人第11号染色体上，组织特异性较强，主要分布于胎盘、肺、肾、红细胞中，乳腺正常组织胞浆几乎无表达，与组织分化发育有关［10］。许多外源性诱导剂或损伤剂均可使细胞内GST-π异常表达，近年发现广泛存在于人体肿瘤组织中，尤其对人体上皮来源的恶性肿瘤表达率比较高，同时，该酶与肿瘤的耐药性也有一定的关系，也是肿瘤耐药的相关因素之一。当人体细胞受到毒性物质和致癌物质攻击时，GST-π增高，催化体内有毒物质与谷胱甘肽结合，将体内有毒物质和致癌物质排出体外。故认为GST-π在肿瘤的发生、发展、转归和预后有重要意义。本研究结果显示GST -π在乳腺癌组织中呈高表达，与肿瘤大小无明显相关性，与腋窝淋巴结转移有明显相关性，在淋巴结转移组中GST -π阳性表达率高于淋巴结无转移组。可以说明GST -π可以作为判断乳腺癌恶性程度的一个指标。
综上所述，Ki-67、GST -π、C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达与淋巴结转移有关，可作为临床上判断乳腺癌恶性程度的指标，且三者的表达呈正相关，若联合检测对综合判断乳腺癌恶性程度具有较高的临床价值。
参考文献
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