摘 要：目的：探讨乙型肝炎大蛋白检测与e抗原阴性慢性乙型肝炎患儿关系。方法：225名乙型肝炎病毒表面抗原阳性患儿分别使用PCR法测定HBV DNA的含量，乙型肝炎病毒Dane颗粒抗原诊断检测LHBs。结果：225例样本中，检出乙型肝炎大三阳75例，在大三阳中，LHBs的阳性率与HBV DNA的阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；检出乙型肝炎小三阳160例，在小三阳中，LHBs的阳性率与HBV DNA的阳性率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：LHBs和HBV DNA有较高的符合率，同时反应了慢性乙型肝炎患儿体内HBV的复制水平，其检测有助于提高HBV感染者的血清学诊断的准确性。
关键词：乙型肝炎大蛋白；e抗原；慢性乙型肝炎
有关调查显示，全球约有3.6亿慢性乙型肝炎病毒（HBV）携带者，我国乙型肝炎病毒表面抗原（HbsAg，e抗原）阳性率为约10%，每年死于乙型肝炎相关疾病者约27万多人[1]。不过目前临床上使用的检测乙型肝炎病毒e抗原复制的实验室指标各有各的临床意义，但是，他们或缺乏特异性，或较难在基层医院中普及、推广。随着分子生物学技术的迅速发展，乙型肝炎病毒外膜大蛋白（乙型肝炎大蛋白，LHBs），已经逐渐应用于实验室诊断中[2]。本实验通过大量的临床样本验证了乙型肝炎大蛋白检测与e抗原阴性慢性乙型肝炎患儿关系，旨在为我国同趋严峻的乙型肝炎防治工作的改善奠定理论和实验基础。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取2008年4月～2010年12月期间在我院检验科门诊体检HbsAg阳性群体225例，抽取静脉血当日离心血清，置于－20℃冰箱保存。其中男125例，女100例，年龄2～10岁，平均6.5岁。符合HBV感染的临床诊断标准，且无合并感染。
1.2 实验方法：①HBV DNA检测：通过PCR法测定上述乙型肝炎患儿的血清中HBV DNA的含量；②LHBs检测：采用乙型肝炎病毒Dane颗粒抗原诊断（ELISA）检测LHBs。
1.3 统计学处理：采用SPSS 17.5软件进行统计学处理，分别对大、小三阳乙型肝炎患儿的HBV DNA阳性率和LHBs阳性率进行χ2检验，了解两种检测方法阳性符合率的差异性，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大三阳的LHBs与HBV DNA关系：225例样本中，检出乙型肝炎大三阳75例，在该75例患儿中LHBs检出阳性率为96.0%（72/75）；HBV DNA的检出率为93.3%（70/75）。LHBs的阳性率与HBV DNA的阳性率经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。
2.2 小三阳的LHBs与HBV DNA关系：225例样本中，检出乙型肝炎小三阳160例，在该160例患儿中HBV DNA的阳性检出率为50.0%（80/160）；LHBs的阳性检出率为56.3%（90/160），在HBeAg阴性的小三阳乙型肝炎患儿中HBV DNA和LHBs的检出经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。
乙型病毒性肝炎的病情由病毒、肝细胞和宿主免疫系统相互作用决定。病毒方面，HBV是不完全闭合环状双链DNA分子，基因组全长约3.2 kb，但却具有许多启动子、增强子和4个不同的相互重叠的开放读码框架（ORF），它对基因组信息的利用效率在自然界中是罕见的[3]。HBV在复制过程中需经过RNA中间体的逆转录，而逆转录酶又缺乏有效的碱基校对功能，因而随病程积累和宿主免疫压力的共同作用下，病毒基因组可发生一个或多个核苷酸的变异，变异的病毒可发生某些生物学特性的改变，进而影响宿主的免疫反应，导致HBV感染及病程预后的变化[4]。
随着科学技术的不断发展，许多新技术，新方法越来越多地应用于检验学科中，医学检验也逐渐转变为检验医学，为临床提供快速、准确、有效的捡验数据也是检验医学发展的重大课题[5]。检测乙型肝炎标志物的常用方法主要有放射免疫分析（RIA），酶联免疫吸附试验（ELISA），电化学发光技术（ECLIA）等。RIA服然具有高灵敏度的优点，但是其不可排除的放射性对医务工作者的身体是有害的。ELISA能极早检测出HBsAg，确证乙型肝炎病毒感染，提高了方法的可靠性。
乙型肝炎病毒大蛋白（Hepatitis B Virus Large Surface Protein，LHBs）在HBV包膜形成过程中发挥着关键作用。该蛋白存在于Dane颗粒和亚病毒管状颗粒中，是病毒形成完整外膜的重要标志，其具有双重跨膜拓扑结构[5]。LHBs能反式激活HBV复制，调节病毒颗粒从细胞内释放，并与肝细胞表面特异蛋白结合介导乙型肝炎病毒进入肝细胞。
本实验结果显示LHBs和HBV DNA有较高的符合率，同时反应了乙型肝炎患儿体内HBV的复制水平，而且LHBs是反应低水平HBV DNA乙型肝炎患儿病毒复制、肝细胞损伤、疾病进程、疗效与预后判断的新的敏感检测指标，其检测有助于提高HBV感染者的血清学诊断的准确性。
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参考文献
[1] Doitsh G，Shaul Y.Enhancer predominance in hepatitis B virus gene expression[J].Mol Cell Biol，2004，24(9):1799.
[2] 中华医学会肝病学分会.慢性乙型肝炎防治指南[J].中华肝脏病杂志，2005，22(7):1307.
[3] 毛远丽，李伯安，马洪滨，等.乙型肝炎患者外膜蛋白血清学检测及对于判定HBV DNA复制的意义[J].中华病毒和临床实验学杂志，2006，20(3):276.
[4] 戴利成，王翠妮，何建方，等.血清乙型肝炎病毒外膜人蛋白检测及其与病毒复制的关系[J].中华实验和临床病毒学杂志，2006，20(3):235.
[5] 李俊茜，庄 辉，杜 晰，等.乙型肝炎e抗原阴性慢性乙型肝炎和肝硬化患者病毒基因型及丙氨酸氨基转移酶水平分析[J].中华肝脏病杂志，2005，13(7):491.