关于益智仁水提取物对运动训练小鼠肝组织自由基代谢和超微结构的影响

【摘要】 目的：观察益智仁水提取物(AOF)对运动小鼠血清ALT，肝脏SOD，MDA及超微结构的影响. 方法：雄性ICR小鼠90只随机分为6组：安静对照组、安静益智仁组、训练即刻组、训练即刻益智仁组、训练恢复24 h组和训练恢复24 h益智仁组，每组15只. 经过6 wk游泳耐力训练后进行1次力竭性游泳，测定各组小鼠血清ALT、肝脏SOD、MDA等指标，肝脏细胞超微结构进行电镜观察. 结果：各组ALT除安静对照组与相应益智仁组和训练即刻组与训练恢复组间无统计学差异 (P&>0.05) 外， 其余各组间均有统计学差异(P&<0.05)；SOD除安静对照组与相应益智仁组，训练即刻益智仁组与训练恢复益智仁组间无统计学差异外(P&>0.05)，其余各组间均有统计学差异(P&<0.05);MDA除训练即刻组与相应益智仁组及恢复组间无统计学差异(P&>0.05) 外，其余各组间均有统计学差异(P&<0.05)；益智仁组肝脏细胞中线粒体、肌浆网、肌丝等结构均比相应对照组完整，病变程度比对照组轻. 结论：益智仁水提取物能改善运动对肝脏细胞的损伤，提高肝脏组织抗自由基氧化的能力，同时还对肝脏细胞超微结构具有明显保护作用.
【关键词】 益智仁 植物提取物 丙氨酸氨基转移酶 超氧化物歧化酶 丙二醛 超微结构 ICR小鼠 肝
　　 0引言
　　益智仁为姜科植物益智Alp in ia Oxyp hy llaM iq. 的干燥成熟果实，含挥发油、益智仁酮、维生素B1，B2，C，E及多种氨基酸、脂肪酸等［1-2］. 临床上，益智仁煎剂具有健胃、抗利尿、减少唾液分泌的作用. 其水提取物有抑制腹水型肉瘤S180细胞增长的作用. 其水提取物和乙醇提取物有抑制回肠收缩的作用，其甲醇提取物有增强左心房收缩力、抑制氯化钾引起的免主动脉收缩和抑制前列腺素合成酶的活性等作用［3-5］. 但益智仁水提取物对运动训练大鼠肝脏组织的作用尚未见报道， 我们采用小鼠运动疲劳模型， 观察益智仁水提物对运动训练小鼠肝细胞的影响.
　　1材料和方法
　　1.1材料雄性ICR(Swiss Hauschka)小鼠90只，7 wk龄，体质量20～22 g，由陕西省中医研究院实验动物中心购入，按实验组分笼饲养，同时购买基础饲料，适应性饲养1 wk后进行实验. 益智仁水提取物由陕西华旬沙棘实业有限公司沙棘制药厂生产.
　　1.2方法小鼠随机分成安静对照组（A）、安静益智仁组（B）、训练即刻组（C）、训练即刻益智仁组（D）、训练恢复24 h组（E）和训练恢复24 h益智仁组（F）. 小鼠自由摄入水和食物，动物房内室温22~27℃，湿度40%~65%，照明时间随同自然变化. 对照组服用基础饲料，益智仁水提取物组每日灌胃益智仁水提取物2 mL(含益智仁水提取物0.08 mg)，基础饲料饲养. 训练组进行6 wk游泳训练 (下午训练)，水温(30±2)℃，水深35 cm，每周训练6 d，每周一、四称体质量. 第1周每天游泳30 min，然后每周加10 min，至第5周每天游泳70 min， 第6周每天游80 min. 在处死前，进行最后一次无负重的力竭性游泳，力竭判断的标准为：小鼠沉入水中超过10 s，且放在平面时无法完成翻正反射［6］. 力竭运动后训练组分为运动后即刻和运后恢复24 h组，运动后即刻组在力竭运动后立刻处死，运动后恢复24 h组力竭运动后经24 h恢复处死. 血清ALT， SOD活性和MDA含量测定均采用试剂盒测定，测定方法按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书进行. 断髓处死后迅速取各组肝组织1 mm×1 mm×1 mm放入15 g/L戊二醛中，进行电镜样品的前固定和10 g/L四氧化锇进行后固定；脱水剂为丙酮，浸透液为环氧丙烷和EPON812混合液；包埋与聚合：包埋剂为EPON812，将包埋好的样品放入干燥的自动控温的烤箱中，通过调节温度完成聚合；用瑞典产LKBNOVA型热胀式超薄切片机切片. 采用醋酸双氧铀和柠檬酸铅双染法. 用日本产JEM2000EX透射电子显微镜进行观察.
　　统计学处理： 用SPSS软件对所测实验数据进行统计学处理， 实验结果以x±s表示， 两组间比较用t检验， 多组间比较用方差分析， 两两比较用LSDt检验.
　　2结果
　　各组小鼠在6 wk内体质量增长无统计学差异（P&>0.05），生长良好，说明益智仁水提取物对小鼠食欲、生长无不良影响.
　　2.1小鼠血清ALT活性服用益智仁水提取物各组（B，D，F组）ALT活性均低于相应的对照组，尤其是C组和D组比较，D组ALT活性下降27.3%；E组和F组比较，F组ALT活性下降19.3%. 除E与F间无统计学差异外(P&>0.05)，A与B，C与D，A与C，B与D，A与E，B与F，C与E及D与F间均有统计学差异(P&<0.05，表1）.表1益智仁水提取物对小鼠血清ALT、肝脏SOD活性及MDA含量的影响
　　2.2血清SOD活性和MDA含量服用益智仁水提取物B组、D组SOD活性均高于相应的对照组，C组和D组比较，D组SOD活性上升10.8%. 服用益智仁水提取物各组（B组、D组、F组）MDA含量均低于相应的对照组，C组和D组比较，D组MDA含量下降2.7%； E组和F组比较， F组MDA含量下降21.2%（表1）.
　　2.3肝组织超微结构的变化A组肌节分布均Z线清晰，肌纤维排列整齐，线粒体、肌浆网结构正常. B组上述结构与A组相似，未见差异完整. C组肌节长短不等Z线扭曲增粗，肌原纤维排列紊乱，局部肌丝消失，线粒体增大，部分膜嵴断裂溶解肌浆网扩张. D组出现了与C组相似的结构变化，但损伤程度较轻. E组经过24 h恢复上述结构得到了不同程度的恢复. F组上述结构的恢复优于E组(图1).
　　A: 安静对照； B: 安静益智仁水提取物； C: 训练即刻； D: 训练即刻益智仁水提取物； E: 训练恢复24 h； F: 训练恢复24 h益智仁水提取物.
　　图1益智仁水提取物对小鼠肝脏组织超微结构的影响TEM ×15 000
　　2.4小鼠游泳至力竭的时间C组游泳至力竭时间为(215±23) min，D组游泳至力竭时间为(258±33) min，力竭时间延长有统计学差异（P&<0.05），延缓率为20.1%.
　　3讨论
　　在安静状态下，益智仁水提取物组小鼠血清ALT活性低于对照组，说明益智仁水提取物具有明显的保肝作用；训练即刻组内，对照组ALT活性高于益智仁水提取物组，也说明了益智仁水提取物的保肝作用；安静组与训练即刻组相比，训练即刻组ALT活性高于相应的安静组，说明力竭性游泳破坏了肝细胞膜的完整性，使ALT溢出细胞进入血液；恢复24 h后，各组ALT活性均有所下降，但仍高于安静组. 安静组内益智仁组与对照组相比，SOD活性稍有上升，但无统计学意义；MDA有下降趋势，且与对照组有统计学差异(P&<0.05). 不少学者研究证实［7-11］，耐力运动后机体脂质过氧化较安静时加强，MDA含量升高，这与本实验的结果一致.

转贴于 本研究显示，经过耐力训练一次力竭性游泳后，训练即刻益智仁组小鼠肝脏中SOD活性升高(P&<0.05)，在运动即刻组内，益智仁组SOD活性高于对照组(P&<0.05)；MDA含量益智仁组与对照组比较降低(P&<0.05)，说明益智仁水提取物可能促使内源性SOD活性升高，提高机体抗氧化能力，降低脂质过氧化程度，减少MDA的生成. 经24 h恢复后，肝脏SOD活性，恢复对照组甚至还低于安静对照组，而益智仁组有上升趋势，但与运动即刻组间无统计学差异；MDA含量恢复组均高于相应安静组而低于运动即刻组，有统计学差异(P&<0.05)，恢复组内益智仁组与对照组无统计学差异. 本实验研究结果表明，补充益智仁水提取物对小鼠质量增长无不良影响. 补充益智仁水提取物对肝脏细胞超微结构有明显保护作用，表现为益智仁水提取物组线粒体、粗面内质网、肌丝等结构比相应对照组完整，损伤程度比相应对照组轻；益智仁水提取物可促进肝糖原合成，肝细胞中糖原颗粒增加；补充益智仁水提取物能提高游泳小鼠达到力竭的时间，具有较明显的抗疲劳作用.

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