【摘要】 目的 建立了珠子肝泰分散片中鞣云实精的HPLC测定方法。方法 色谱柱为反相C-18柱，流动相为甲醇-0.4%醋酸水溶液（22:78），检测波长为268 nm，流速为1.0 mL/min。进样量为20 μL。对测定方法进行了方法学考察。结果 三批样品的鞣云实精的含量分别为5.31、5.24、5.20 mg/片。结论 该方法可行，便于操作。
【关键词】 珠子肝泰 分散片 高效液相色谱法 含量测定
Abstract：Objective To establish the HPLC methods for determination of corilagin contents. Methods The determination of corilagin was performed on a RP-C18 column using methol-0.4% acetic acid as mobile phase. The wavelength was 268 nm， and the flow rate was 1.0 mL/min， and sample size was 20 μL.Results The proposed methods are simple， reproducible and sensitive. Conclusions The content of corilagin of three batch products is 5.31 mg， 5.24 mg， 5.20 mg per tablet respectively.
Key words：zhuzigantai；dispersible tablets; HPLC; contents determination
珠子肝泰分散片是从已有国家标准剂型珠子肝泰胶囊中改变剂型而来的，处方由珠子草（1 000 g）、青叶胆（200 g）、黄芪（200 g）和甘草（200 g）四味药组成。用于治疗脾虚湿热所致的胸胁胀痛，倦怠无力，便溏；乙型肝炎见上述证候者。珠子肝泰分散片中，以珠子草为主药，文献研究表明［1，2］，珠子草含有多种抗病毒活性成分，如原儿茶酸、没食子酸、阿魏酸、鞣云实精、老鹤草素、去氢柯子酸甲酯、短叶苏木素、叶下珠素等，它们都属于多酚类化合物。其中鞣云实精含量最高，为抗病毒主要活性成分。珠子肝泰胶囊的质量标准中没有主药珠子草的含量控制项目，为了更好的控制产品质量，通过研究，建立了主要有效成分鞣云实精的HPLC含量测定方法。
1 试验材料与仪器
1.1 试验仪器
高效液相色谱仪（Agilent 1100型）；分析天平（AE240 METTLER-TOLEDO）。
1.2 试验材料
珠子肝泰分散片自制；鞣云实精（批号：20051019）自制，纯度99.2%。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(C18 4.6 mm×250 mm，5 μm)的色谱柱，甲醇：0.4%醋酸水溶液（22∶78）为流动相，检测波长268 nm，流速1.0 mL/min。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的配制 取本品10片，研碎，混匀，精密称定细粉末适量（相当于2片），置100 mL量瓶中，加入甲醇20 mL，超声10 min，用流动相稀释至刻度，用0.45 μm滤膜滤过，即得。
2.2.2 对照品溶液的配制 取鞣云实精对照品10 mg，精密称定，用甲醇溶解并用流动相定容到100 mL，作为对照品溶液（每1 mL含鞣云实精0.1 mg）。
测定法：分别精密吸取上述溶液20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
2.3 专属性
称取处方量的辅料，用流动相超声30 min，滤过，取续滤液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图（图1）。所得图谱与供含量测定用图谱比较。
试验结果显示辅料及药材阴性空白对照对鞣云实精的含量测定没有影响。陈晓北：HPLC法测定珠子肝泰分散片中鞣云实精的含量辽宁医学院学报 2008年2月，29(1)图1 鞣云实精对照品HPLC图谱
2.4 线性范围
精密称取鞣云实精对照品约50 mg，用流动相制成一系列浓度的溶液。分别精密吸取各对照品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积对浓度做回归曲线，计算回归方程及相关系数。
结果显示，在21～500 μg/mL浓度范围内，峰面积与浓度线性关系良好，回归方程为：y=31634 x-386.94，r＝0.9999。表1 鞣云实精线性范围考察称样量(mg)稀释倍数浓度(mg/mL)峰面积
2.5 精密度
取供试品溶液20 μL，照上述色谱条件连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积的RSD。
试验结果表明精密度良好，RSD为0.2%。
表2 鞣云实精精密度考察编号123456RSD（%）峰面积3275.6913273.8233270.3773278.0123269.6383283.9530.2
2.6 准确度
取研碎的片适量（约相当1片），精密称定，置100 mL容量瓶中，再向瓶中分别加入鞣云实精对照品3、5、7 mg，用甲醇10 mL溶解，超声5 min，并用流动相稀释至刻度，混匀，用0.45 μm的滤膜过滤后作为供试品溶液。
取鞣云实精对照品10 mg，精密称定，用甲醇溶解并用流动相定容到100 mL，作为对照品溶液（每毫升含鞣云实精0.1 mg）。
分别取20 μL进样，记录色谱图，计算加样回收率。
试验结果表明，本实验回收率在98.5%～100.5%之间，平均回收率为99.2%，准确度良好。
表3 鞣云实精准确度考察浓度范围样品中的量
2.7 溶液稳定性
取供试品溶液，室温放置8 h，分别于0、1、2、3、6、8 h进样，记录色谱图，计算峰面积的RSD。
溶液的稳定性试验结果表明，含量测定溶液在8 h内基本稳定。
表4 供试品溶液稳定性考察时间0 h1 h3 h3 h6 h8 hRSD（%）峰面积3201.2053238.4283243.6703216.1323222.0703209.7910.5
2.8 重现性
取供试品，研细，平行称取6份，依含量测定法，记录色谱图，分别测定鞣云实精的含量。
结果显示，用本方法测定鞣云实精含量，重现性良好。
表5 供试品溶液重现性考察编号123456RSD（%）鞣云实精(mg)5.305.385.285.275.295.340.79
2.9 样品含量测定
分别取各批供试品，依前述色谱条件及溶液配制方法分别测定含量。
依照前述方法进行含量测定，三批珠子肝泰分散片中的鞣云实精的含量基本接近，分别为5.31、5.24、5.20 mg/片，测定方法简便、可行，测定结果准确。
3 结 论
在本方中，珠子草是主药，由于早期国内对其化学成分的研究不很全面，没有很好的质量控制方法。研究文献［1，2］结果表明珠子草主要含有多酚类化合物，如没食子酸、鞣云实精等，其中鞣云实精的含量最高，是其所含的主要活性成分。本实验在进行系统的方法学研究的基础上，增加了HPLC测定鞣云实精含量的质量控制方法，该方法专属性强，精密度、准确度、稳定性、线性范围等都符合试验要求，通过对三批样品的含量测定表明，该方法便于操作，重现性好，和甘草酸胺含量测定方法联合起来，可以更有效的控制产品质量。
参考文献
［1］ L Yeap Foo，Herbert Wong. Phyllanthusiin D，an unusual hydrolysable tannin from Phyllanthus amarus［J］. Phytochemistry， 1992，31(2):711-713.
［2］ L Yeap Foo. Amariinic acid and related ellagitannins from Phyllanthus amarus［J］. Phytochemistry， 1995，29(1):217-224 .