急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞水平检测及临床意义

　　 作者：吴朝阳， 吴雅荣， 王法春， 陈巧云， 季勇慧 钱震 杨小飞 盛晓静 张永宁， 钱军

【摘要】 目的： 研究急性白血病患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞水平变化及临床意义。方法： 采用流式细胞仪对32例急性白血病患者 (急性髓细胞性白血病23例、急性淋巴细胞性白血病9例)及18例正常人外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞水平进行检测。结果： 初治急性白血病组与正常对照组比较，CD3+细胞、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值及NK细胞下降（P&<0.05），CD8+细胞略升高（P&>0.05）。化疗后12例取得完全缓解，再次检测上述指标接近正常对照组（P&>0.05）。初诊急性淋巴细胞性白血病组CD4+细胞及CD4+/CD8+比值低于初诊急性髓细胞性白血病组（P&<0.05）。结论： 急性白血病患者细胞免疫功能明显异常。与急性髓细胞性白血病相比，急性淋巴细胞性白血病细胞免疫功能更为低下。T细胞亚群及NK细胞水平检测在评价急性白血病疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。

【关键词】 急性白血病； T细胞亚群； NK细胞

　　［Abstract］ Objective: To study the changes of T lymphocyte subsets，NK cells in peripheral blood of patients with acute leukemia and its clinical significance.Methods： The different level of peripheral blood T lymphocyte subsets， NK cells of 32 acute leukemia patients and 18 normal controls were detected with flow cytometry. Results： Compared with the normal controls， the number of CD3+ T cell， CD4+T cell， NK cell and CD4+/CD8+ ratio reduced in newly diagnosed acute leukemia group(P&<0.05)， while those of CD8+ T cell slightly increased(P&>0.05).Twelve of 32 patients achieved complete remission after chemotherapy.Their level of T lymphocyte subsets，NK cells near those of normal controls（P&>0.05）.The number of CD3+ T cell and CD4+/CD8+ ratio in newly diagnosed acute lymphoblastic leukemia group were lower than those in newly diagnosed acute myelogenous leukemia group(P&<0.05). Conclusion： Cellular immune function is significantly abnormal in patients with acute leukemia.Compared with acute myelogenous leukemia， patients with acute lymphoblastic leukemia had more poor cellular immune function.Detection of T lymphocyte subsets，NK cells are clinically value on evaluation of therapeutic effect and prognosis of acute leukemia.

　　［Key words］ acute leukemia; T lymphocyte subsets; NK cell

　　急性白血病（acute leukemia，AL）是造血干细胞的恶性克隆性疾病，其发生及发展与机体免疫紊乱有着密切的关系。在抗肿瘤免疫效应中，细胞免疫比体液免疫起着更为重要的作用。T淋巴细胞和NK细胞执行细胞免疫功能，是机体抗肿瘤免疫的重要活性细胞。本文采用流式细胞术（flowcytometry，FCM）检测急性白血病患者及健康人群外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的水平，并探讨其临床意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材 料

　　32例急性白血病（AL）外周血标本均来自我院住院患者。其中男14例，女18例，年龄15～72岁，中位年龄41岁；急性髓细胞性白血病(acute myelogenous leukemia，AML)23例，急性淋巴细胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)9例。初诊患者分别于化疗前、完全缓解后采集外周静脉血2 ml，枸橼酸钠抗凝。18例正常对照外周血标本采自健康体检者。

　　1.2 方 法

　　取100 μl上述抗凝血分别加入4个试管中，每管加入抗CD45PerCP 10 μl。各管再依次加入抗CD3-FITC+CD19-PE、抗CD3-FITC+CD4-PE、抗CD3-FITC+CD8-PE、抗CD3-FITC+CD16CD56-PE各10 μl，避光室温充分结合20 min后，每管加入溶血素2 m1，避光放置至透明后1 000 r/min 离心5 min，弃去上清液体，加入2 m1 PBS在混合器上使试管底部的细胞与PBS溶液混匀，1 000 r/min离心5 min，最后加入0.4 ml PBS溶液混匀直接上流式细胞仪（美国BD公司）检测。

　　1.3 统计学处理

　　应用SPSS12.0处理数据，结果以±s表示，用t检验方法比较各组间差异。

2 结 果

　　32例急性白血病患者T淋巴细胞亚群及NK细胞的水平变化见表1。由表1可见: 与缓解AL组相比较，初诊AL组外周血CD3+细胞、CD4+细胞、CD16+CD56+细胞及CD4+/CD8+比值降低，差异有统计学意义(P&<0.05)；CD8+细胞略升高，但无显著差异(P&>0.05)。初诊AL组与对照组相比较有类似的结果。而缓解AL组外周血CD3+细胞，CD4+细胞，CD8+细胞、CD4+/CD8+比值及CD16+CD56+细胞与对照组相比较差异无统计学意义(P&>0.05)。初治ALL组与AML组相比较，ALL组CD4+细胞及CD4+/CD8+比值低于AML组，两者间差异有统计学意义(P&<0.05)。两组CD3+细胞，CD8+及CD16+CD56+细胞间差异无统计学意义 (P&>0.05)。表1 急性白血病患者及正常对照组外周血T细胞亚群及NK细胞水平

3 讨 论

　　机体的细胞免疫异常可使肿瘤细胞逃避宿主的免疫监视，最终发生肿瘤。CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞在体内抗肿瘤免疫中具有重要的作用。

　　CD4+细胞能辅助T细胞、B细胞活化，后两者活化释放的大量细胞因子能促进CD8+T细胞及吞噬细胞的活性，并影响B细胞抗体的产生，从多方面调节和增强抗肿瘤效应。CD8+细胞常在免疫应答后期增多，除可对靶细胞产生细胞介导的细胞毒作用（ADCC）外，还能识别可溶性抗原，分泌抑制因子，减弱或抑制免疫应答，对CD4+细胞有调节性抑制作用。CD4+/CD8+比例平衡是维持免疫内环境稳定的一个中心环节，是机体免疫网络调控的重要枢纽，反映了机体免疫反应的调节能力［1］。这种免疫平衡紊乱时，可引起继发性免疫缺陷。本组资料分析了32例不同类型急性白血病患者的T淋巴细胞亚群，发现初治AL患者CD3+、CD4+细胞以及CD4+ /CD8+比值明显降低。其他恶性血液病如非霍奇金氏淋巴瘤中有类似的变化［2，3］，在儿童急性白血病中也有类似报道［4，5］。这些提示白血病患者辅助性T细胞数量或功能低下，机体识别和杀伤白血病细胞的能力下降，与白血病的发生发展有一定的关系。本组资料还提示，化疗后缓解的患者，T淋巴细胞各亚群抗原表达接近正常，细胞免疫功能得到一定程度恢复。通过分析我们还发现，与AML比较，ALL患者CD4+细胞、CD4+/CD8+比值降低程度更显著，提示原发于淋巴系统肿瘤的细胞免疫功能更低下。

　　CD16+CD56+是自然杀伤细胞（NK细胞）的标志物，表达的量可能与NK细胞的数量或功能有关。NK是重要的天然免疫细胞， 起源于CD34+造血细胞，在骨髓微环境内发育，形成具有免疫活性的成熟型细胞。它不需预先致敏，无MHC限制性，即可自发地杀伤MHC1类分子缺陷或低表达的肿瘤细胞， 具有广谱的抗肿瘤、抗感染、免疫调节等作用，在机体免疫监视过程中发挥重要功能。分析本组资料发现AL患者化疗前CD16+CD56+细胞明显降低，与楼瑾［6］等的研究结果相似，而化疗后完全缓解者CD16+CD56+细胞又恢复到正常水平，进一步说明初发急性白血病NK细胞免疫功能明显受损。

　　由于初治AL与缓解AL的T淋巴细胞亚群及NK细胞的水平有明显差异，检测T淋巴细胞亚群和NK细胞水平在评价AL疗效及判断预后方面具有一定的临床价值。其临床意义还有待积累更多病例进行深入研究。

参考文献

［1］ Yasutomo K. The cellular and molecular mechanism of CD4/CD8 lineage commitment［J］. J Med Invest， 2002，49(1/2):1-6.

［2］ 赵成艳，马 荣，王忠利，等. 非霍奇金淋巴瘤患者T细胞亚群、NK细胞检测的临床意义［J］.中国免疫学杂志，2006，22(2):180-185.

［3］ 庄万传，李秀梅，韩秀华. 恶性血液病患者化疗前后淋巴细胞亚群测定及其意义［J］. 白血病·淋巴瘤，2006，15（6）:442-443.

［4］ 王菊香，李 原，阮积晨，等. 急性白血病患儿外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞水平测定及临床意义［J］.中国小儿血液，2003，8（4）：148-149.

［5］ 顾绍庆，曹巧云，张希云，等.B系急性淋巴细胞性白血病患儿外周血中CD4+，CD8+，CD19+细胞的观察［J］.江苏大学学报：医学版，2002，12（1）：35-36.

［6］ 楼 瑾， 汪明春， 李 明，等.急性非淋巴细胞白血病患者NK细胞亚群及其NCR受体测定［J］.中国病理生理杂志，2007， 23 (10) : 2063-2064.