作者：张利霞 安建钢 罗绥兰
【摘要】 目的：探讨绿葛沙解酒饮对小鼠急性酒精(乙醇)性肝损伤的保护作用。方法：采用酒精(乙醇)肝损伤模型小鼠，以海王金樽片为阳性对照组，观察绿葛沙解酒饮低中高剂量组对模型小鼠肝脏中MDA、GSH、TG的影响。结果：绿葛沙解酒饮低、中、高剂量组均有抑制乙醇诱导的肝脏中MDA、TG含量的升高和提高肝脏中GSH活力的作用。结论：绿葛沙解酒饮对急性酒精性肝损伤具有一定的保护作用。
【关键词】 绿葛沙解酒饮;酒精性肝损伤;实验研究
医学研究证明，适量饮酒可以加速血液循环、消除疲劳、强心提神，而过量饮酒则可以致醉、伤人，并可造成肝脏不同程度的损害，因此，探讨解酒护肝的保健食品已成为国内外医学和营养学界共同关注的课题。根据醒酒保肝产品的需求及现状，本课题组研制出以绿豆、葛根、沙棘为原料配方的复方解酒制剂绿葛沙解酒饮。虽然关于葛根的解酒护肝作用有很多的报道，它也是常用的解酒药、保健食品配方原料之一，但与绿豆、沙棘配伍后对酒精性肝损伤的保护作用却未曾见报道。本研究通过乙醇肝损伤模型小鼠，测试绿葛沙解酒饮对急性酒精性肝损伤的保护作用，以期为酒类消费者提供新型保健饮品。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 绿葛沙解酒饮 绿葛沙解酒饮由本课题组研制，主要原料为绿豆、葛根、沙棘。海王金樽片(每片1.0 g，深圳海王健康科技发展有限公司)灌胃给药时用蒸馏水配成0.1 g/mL。无水乙醇用时以蒸馏水稀释至50 %备用。丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总蛋白检测试剂盒购于南京建成生物工程公司。甘油三酯(TG)检测试剂盒购于浙江东瓯生物工程有限公司。
1.1.2 实验动物 雄性昆明种小白鼠，体重18～22 g，由内蒙古大学实验动物中心提供，标准环境喂养。
1.2 方法 小鼠72只，以小鼠标准饲料喂养，自由饮水，适应性喂养3 d后进入实验。按体重随机分为6组，即阴性对照组、乙醇损伤模型组、阳性对照组和绿葛沙解酒饮低、中、高3个剂量组，每组12只。以经口灌胃的方式，低、中、高剂量组每日给予绿葛沙解酒饮，剂量分别为15 mL/kgBW、30 mL/kgBW、60 mL/kgBW;阴性对照组和模型组均给予蒸馏水20 mL/kgBW;阳性对照组给予海王牌金樽片的供试液15 mL/kgBW(折合海王牌金樽片的剂量为1.5 g/kgBW)。动物每周称重2次，按体重调整解酒饮、蒸馏水、海王金樽的灌胃量，实验时间为30 d。实验结束时，低中高剂量组、模型组及阳性对照组一次灌胃给予50 %乙醇14 mL/kgBW(折合乙醇的剂量为7 g/kgBW)，阴性对照组给予蒸馏水20 mL/kgBW，禁食16 h颈椎脱臼处死小鼠，剥离肝脏[1]。
肝脏预处理：迅速剖取肝脏，冰生理盐水冲洗，滤纸吸湿后，称取0.5 g肝脏，加入预冷的生理盐水4.5 mL，冰水浴中制成10 %肝匀浆，3 000 r/min离心15 min，提取上清液，按试剂盒提供的方法测定匀浆上清中MDA、TG、GSH和蛋白含量。
1.3 数据处理 采用SPSS 11.5软件进行统计学处理，对数据进行方差齐性检验，对方差齐的资料用单因素方差分析(ANOVA)进行统计，对P&<0.05的数据用SNK-q检验法进行阴性对照组、模型组、阳性对照组、实验组两两之间的比较。
2 结果
阴性对照组的MDA、TG含量明显低于乙醇损伤模型组(P&<0.01)，GSH含量明显高于乙醇损伤模型组(P&<0.01)，说明模型制备成功。绿葛沙解酒饮的低、中、高剂量组与乙醇损伤模型组比较，MDA、TG含量均明显降低(P&<0.01)，GSH含量则明显升高(P&<0.01);低、中、高剂量组与阳性对照组比较，MDA、TG、GSH间差异均无统计学意义(P&>0.05)。比较3个剂量组对MDA、TG、GSH含量的影响，发现随着剂量的增加，MDA、TG有逐渐降低的趋势，但差异无统计学意义(P&>0.05);GSH有逐渐升高的趋势，且高剂量组的GSH含量明显高于低剂量组，差异有统计学意义(P&<0.05)。见表1。表1 绿葛沙解酒饮对小鼠肝组织MDA、TG、GSH水平的影响(
3 讨论
酒的主要成分是乙醇，乙醇进入体内后通过胃肠道吸收，90 %在肝脏内氧化，很少在肝外代谢。在生理条件下经乙醇脱氢酶系统代谢为乙醛，再经乙醛脱氢酶(ALDH)作用生成乙酸，再合成为乙酰CoA纳入三羧酸(TCA)循环。此外，肝脏中还存在微粒体氧化酶系(MEOS)等代谢系统，主要在摄取高剂量乙醇时发挥作用。
酒精(乙醇)是常见的肝脏毒剂。机体大量摄入乙醇后，内质网的微粒体乙醇氧化酶系(MEOS)被诱导，进一步促进乙醇氧化成乙醛，从而导致肝细胞内有害的中间代谢产物乙醛浓度大大提高。乙醛是高毒性的物质，能显著损害肝脏利用氧的能力，对肝脏有直接毒性。同时在此代谢途径中有大量活性氧生成，使肝细胞的抗氧化物质消耗增加，GSH水平下降，同时乙醛能与GSH的巯基及抗氧化酶蛋白结合，加速细胞内清道夫分子GSH耗竭，使机体内源性抗氧化能力减弱，难以清除过多的自由基，当生成的活性氧量超过了GSH等抗氧化因子的清除能力时，肝细胞膜发生脂质过氧化反应，导致肝细胞损伤。MDA是脂质过氧化反应的终产物，其含量反应了体内脂质过氧化的水平。此外，乙醇代谢过程消耗氧化型辅酶(NAD+)而使还原型辅酶(NADH)增加，使NAD+/NADH比值相应减小而失衡，改变了细胞氧化还原状态，严重干扰细胞新陈代谢，使三羧酸循环受到抑制，脂肪酸氧化减弱，导致肝细胞内脂肪沉积[2-3]。
本研究通过乙醇致小鼠肝损伤模型，观测到小鼠灌胃乙醇16 h后，肝脂质过氧化反应增强，使肝匀浆中脂质过氧化产物MDA含量明显升高，还原性物质GSH含量明显降低，且肝组织脂肪酸代谢障碍，甘油三酯合成增加，TG含量明显升高。而绿葛沙解酒饮低、中、高剂量组均可逆转上述改变，与乙醇损伤模型组比较，MDA、TG明显降低，GSH明显升高，差异有统计学意义，而与阳性对照组相比，差异均无统计学意义。说明绿葛沙解酒饮低、中、高剂量组均可抑制乙醇诱导的肝脏中MDA、TG含量的升高，并可提高肝脏中GSH的活力。研究结果提示绿葛沙解酒饮具有保护小鼠乙醇性肝损伤的作用，且与海王金樽的作用相近。其作用机理可能是通过清除氧自由基和抗脂质过氧化所致。解酒饮中所含葛根能有效拮抗酒精引起的肝脂质过氧化损害，提高肝细胞浆中谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性水平，有利于机体解毒功能的发挥，保护肝细胞免受自由基、亲电子化合物和毒物的损害，从而减轻乙醇的毒性[4-5]。绿葛沙解酒饮所含沙棘果汁富含维生素E、维生素C、必须氨基酸和黄酮类，曾用于治疗高血脂、冠心病，对CCl4肝损伤亦有明显保护作用，且有明显的抗脂质过氧化作用，可延缓衰老[6-7];所含绿豆富含黄酮类化合物，为高效抗氧化成分，抗氧化能力很强[8]。我们在观察各剂量组对GSH的影响时发现，随着剂量的增加，GSH有逐渐升高的趋势，且高剂量组的GSH含量明显高于低剂量组，差异有统计学意义，说明随着剂量的增加，保护作用在增强。绿葛沙解酒饮的具体作用机制还有待于进一步研究。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范(2003年)[S].2003:14-15.
[2] Jordao AA Jr，Chiarello PG，Arantes MR，et al.Effect of an acute dose of ethanol on lipid peroxidation in rats:action of vitamin E[J].Food Chem Toxicol，2004，42(3):459-464.
[3] 邓源，班春林，武晓琼.乙醇诱导肝损伤作用机制的研究进展[J].华北国防医药，2005，17(4)：242-244.
[4] 钟飞，王晓春，林丽.葛根体外清除氧自由基作用的研究[J].湖南中医学院学报，2004，24(2):17.
[5] 唐春红，陈琪.国内外葛根营养保健功能的研究与开发现状[J].中国食品添加剂，2002，6：56-58.
[6] 托木斯克(丘德明译).实验性CCL4肝炎背景下浓缩沙棘果汁的保肝作用[J].沙棘，1999，12(1)：42-43.
[7] 何智勇，夏文水.沙棘果汁营养成分及保健作用[J].食品科技，2002，(7)：63-71.
[8] 汪少芸，叶秀云，饶平凡.绿豆生物活性物质及功能的研究进展[J].中国食品学报，2004，4(1)：98-102.