作者：石海矾，李伟，陈益平，汪洪姣，张桂莲，金胜鑫
【摘要】 目的?：研究流行性乙型脑炎(乙脑)患儿脑脊液、血清白介素1β(IL-1β)与神经元特异性烯醇酶(NSE)的变化及其临床意义。方法：50例乙脑患儿为观察组，按Glasgow评分分正常组17例，轻度组20例，重度组13例。检测极期、恢复期脑脊液及血清IL-1β、NSE含量，并与20例非中枢神经系统疾病患儿进行对照。IL-1β采用双抗体夹心酶联免疫法检测，NSE采用电化学发光法测定。结果：乙脑患儿脑脊液、血清中IL-1β及NSE含量在极期、恢复期皆比对照组显著增高(P均&<0.01)，且增高程度与病情严重程度相平行(P?&<0.01)。脑脊液与血清IL-1β含量及脑脊液与血清NSE含量分别呈正相关(P?&<0.01)，脑脊液IL-1β与NSE含量及血清IL-1β与NSE含量亦分别呈正相关(P?&<0.01)。结论：脑脊液及血清IL-1β，NSE含量测定对乙脑患儿脑损伤程度及临床病情的判断有重要参考价值。
【关键词】 白介素-1β;神经元特异性烯醇酶;流行性乙型脑炎;脑脊液;血清
Abstract: ? Objective: To study the changes of interleukin-1β(IL-1β) and neuron-specific enolase (NSE) both in cerebrospinal fluid (CSF) and serum in children with Japanese encephalitis and the clinical significance of the changes. Methods:?Fifty cases of children with Japanese encepha-litis were observed，which were pided into three groups according to Glasgow score:?normal group (17 cases)， general group?(20 cases)?and severe group?(13 cases). IL-1β and NSE were detected both in CSF and serum in the very and recovery period in 50 cases， and at the same time 20 cases of children without central nervous system disease were selected as control. IL-1β was determined with enzyme-linked immunosorbent assay?(ELISA)，NSE was determined with electrochemiluminescence. Results:?The levels of IL-1β and NSE in CSF and serum in children with Japanese encephalitis in very and recovery period were both significantly higher than those of the control (P?&<0.01)， and the degree was parallel to the severity of the disease (P?&<0.01). The levels of IL-1β?in CSF and serum were positively correlated (P?&<0.01)，so were the levels of NSE in CSF and serum?(P?&<0.01).?Simultaneously，the levels of IL-1β and NSE in CSF were positively correlated (P?&<0.01)，?so were the levels in serum (P?&<0.01). Conclusion:?To detect the IL-1β and NSE in CSF and serum is helpful for our judgement of the degree of children’brain injured and assessment of clinical condition of children with Japanese encephalitis.
Key words: ? interleukin-1β;neuron-specific enolase;Japanese encephalitis;cerebrospinal fluid;serum
白介素1β(IL-1β)与神经元特异性烯醇酶(NSE)是敏感、特异性反映脑损伤的量化指标，在脑损伤中反映病情严重程度、判断预后的作用已越来越受到人们的关注[1-2]。但关于流行性乙型脑炎(乙脑)患儿脑脊液及血清IL-1β、NSE含量变化、与病情及预后的关系及两者相关性，国内外尚鲜见报道，我们对此进行研究，报告如下。
1??材料和方法
1.1??对象??我院儿童感染科2005年6月-2007年10月住院乙脑患儿，男31例，女19例;年龄1～13岁，平均年龄5.6岁。均符合彭文伟主编的《传染病学》(第六版)诊断标准[3]，血清乙脑病毒特异性IgM抗体均为阳性。根据患儿入院时神志情况，按Glasgow评分标准，15分为正常，共17例;14～12分为轻度，共20例;11～8分为重度，共13例。所有患儿均无乙脑疫苗接种史。对照组为儿外科20例非神经系统疾病手术患儿，男13例，女7例;年龄2～11.5岁，平均年龄5.3岁。两组性别、年龄差异无显著性(P均&>0.05)。
1.2??方法
1.2.1??标本采集：50例患儿于极期(入院当天)、47例(重度组有3例放弃治疗)于恢复期(入院后2到3周)采集脑脊液(CSF)。腰穿采取CSF标本后立即送检常规、生化，另留取1 mL于无热源和内毒素试管中，-70 ℃冰箱内保存待检。同时采血2 mL置于无热源和内毒素的试管中，剔除溶血标本，静置5～10 min后，3?000 r/min离心10 min，分离血清，置于Eppendorf管中，-20 ℃冰箱内保存待检。
1.2.2??标本检测：IL-1β采用双抗体夹心ELISA法检测，试剂由上海晶美公司提供。NSE采用电化学发光法，试剂盒购自罗氏公司，按说明书由专人负责统一检测。
1.3??统计学处理方法??组间比较采用单因素方差分析，两两比较方差齐者采用LSD法，方差不齐采用Dunnett’s T3法，相关分析采用Pearson积差相关分析法。
2??结果
2.1??乙脑患儿极期和恢复期(不同分组)CSF、血清中IL-1β、NSE检测结果，见表1。CSF、血清中IL-1β、NSE各组含量极期&>恢复期&>对照组，均P&<0.01。
2.2??各型乙脑患儿CSF、血清中IL-1β含量，见表2。极期和恢复期CSF、血清中IL-1β含量随病情的严重程度而增高，差异有显著性(均P&<0.01)。
2.3??各型乙脑患儿CSF、血清中NSE含量，见表3。极期和恢复期CSF、血清中NSE含量随病情的严重程度而增高，差异有显著性(均P&<0.01)。
2.4??乙脑患儿脑脊液、血清中IL-1β、NSE含量相关性??乙脑极期患儿CSF IL-1β、NSE水平与血清IL-1β、NSE水平呈正相关(r=0.706，0.747，均P&<0.01)，CSF、血清IL-1β水平与CSF、血清NSE水平呈正相关(r?=0.611，0.708，均P&<0.01)。
3??讨论
流行性乙型脑炎是乙脑病毒引起的以脑实质炎症为主的急性中枢神经系统传染病，可引起神经细胞变性、肿胀及坏死，严重者在脑实质形成坏死软化灶，留有严重的后遗症。因此，早期判断脑损伤程度，评估预后有重要作用。
近年来，白介素1(interleukin-1，IL-1)家族在颅脑损伤中的致炎作用越来越受关注。其中IL-1β为IL-1的主要分泌形式，与颅脑损伤关系最为密切。中枢神经系统自身可产生IL-1β，正常情况下，脑组织中的IL-1β活性极低，但在颅脑创伤、颅内感染等情况时，IL-1β水平及活性则明显增高[4]，加重脑损伤。本研究发现乙脑极期患儿CSF中IL-1β含量比对照组明显升高，与乙脑病变特征相一致。本研究乙脑患儿脑损伤程度根据Glasgow评分，分为正常组、轻度组和重度组(标本采集时间段中未收治极重型乙脑)，极期时CSF中IL-1β含量随Glasgow评分分值减少而升高，说明CSF中IL-1β含量反映乙脑患儿的病情轻重及脑损伤程度。IL-1β加重脑损伤的机制可能为：IL-1β升高导致大脑脉管系统白细胞的聚集，增加黏附分子的表达，破坏血脑屏障，导致单核细胞、中性粒细胞的入侵，对脑实质细胞造成损伤[5]。同时IL-1β增加钙离子进入细胞，直接导致神经细胞死亡[6]，还可通过调节脑血流量，加重脑缺血损伤[7]。删(敲)除鼠的IL-1β的编码基因可显著减轻脑的缺血损伤[8]，间接表明IL-1β具有加重脑损伤的作用。研究还发现，血中IL-1β含量亦随病情的严重程度升高而增加，与CSF呈正相关。正常条件下，外周血中IL-1β含量极微。当脑损伤时，血CSF屏障通透性升高，使IL-1β跨过血脑脊液屏障进入血管内，因此，检测血中IL-1β亦有助于判断脑损伤的程度。
NSE是参与醣酵解的关键酶，存在于神经元及神经来源的细胞中。正常条件下，正常体液中含量甚微。在脑损伤情况下，神经元细胞膜完整性被破坏，使NSE从细胞内漏到细胞外，进入CSF中，同时血脑脊液屏障通透性升高，NSE可跨过血脑脊液屏障进入血管内，从而进入外周循环[9]。因此，CSF及血中NSE被认为是胶质细胞和神经元损害时的标志物。研究表明，脑损害患者胶质细胞和神经元的损害及其严重程度，可以通过NSE含量来反映[10]。本研究发现，乙脑患儿CSF、血中NSE含量极期大于恢复期，且乙脑重度组&>轻度组&>正常组，皆有显著差异，并且CSF与血的NSE含量呈正相关，提示随脑实质损害加重，NSE升高。证明NSE能反映乙脑患儿脑实质损害的严重程度，与文献[11]报道一致。
根据研究，我们还发现，随着IL-1β的升高， NSE亦升高，呈正相关，其机制可能是乙脑病毒侵害脑实质时，IL-1β分泌增多，导致神经细胞不同程度破坏，细胞内NSE释放增多。IL-1β变化提示脑实质炎症情况，而NSE反映了神经细胞的损伤程度，两者联合检测，从不同方面反映了脑损伤，但两者是否有协同作用，国内外文献鲜见报道，尚待进一步研究明确。
本研究发现，乙脑患儿病程2到3周，CSF常规恢复正常时，IL-1β及NSE虽然有所下降，但仍高于对照组患儿，是否提示乙脑患儿脑损伤持续时间较长，有待进一步探讨。
参考文献
[1] Oh SH， Lee JG， Na SJ， et al . The effect of initial serumneuron-specific enolase level on clinical outcome in acutecarotid artery territory infarction[J]. Yonsei Med J， 2002，43(3):357-362.
[2] Lu KT， Wang YW， Yang JT， et al. Effect of interleukin-1on traumatic brain injury-induced damage to hippocampalneurons[J]. Neurotrauma，2005，22(8):885-895.
[3] 彭文伟.传染病学[M].6版.北京:人民卫生出版社，2004:247-252.
[4] Felderhoff-Mueser U， Sifringer M， Polley O， et al. Caspase-1-processed interleukins in hyperoxia-induced cell death inthe developing brain[J]. Ann Neurol， 2005， 57(1):50-59.
[5] Ching S， He L， Lai W， et al. IL-1 type I receptor plays a keyrole in mediating the recruitment of leukocytes into thecentral nervous system[J]. Brain Behav Immun，2005，19(2):127-137.
[6] Viviani B， Bartesaghi S， Gardoni F， et al. Interleukin-1betaenhances NMDA receptor-mediated intracellular calciumincrease through activation of the Src family of kinases[J].Neurosci， 2003， 23(25):8692-8700.
[7] Maher CO，Anderson RE，Martin HS， et al. Interleukin-1betaand adverse effects on cerebral blood flow during long-termglobal hypoperfusion[J]. Neurosurg， 2003， 99(5):907-912.
[8] Boutin H， LeFeuvre RA， Horai R，et al. Role of IL-1alphaand IL-1beta in ischemic brain damage[J]. Neurosci， 2001，21(15):5528-5534.
[9] Barone FC， Clark RK， Price WJ， et al . Neuron璼pecificenolase increases in cerebral and systemic circulation fol-lowing focal ischemia[J].Brain Res，1993，623(1):77-82.
[10] Herrmann M， Curio N， Jost S， et al. Release of biochemicalmarkers of damage to neuronal and glial brain tissue is asso-ciated with short and long term neuropsycholigical outcomeafter traumaticbrain injury[J]. J Neurol Neurosurg psychiatry，2000，70(1):95-100.
[11] 陈耀凯，卜瑛，王宇明，?等. 流行性乙型脑炎患者脑脊液中神经元特异性烯醇酶含量的变化[J]. 第三军医大学学报，2001，23(10):10-11.