作者：王书全 ，张立娟，韩艳玲
【摘要】 目的 通过药物敏感性试验筛选对本地区大肠杆菌敏感药物进行治疗。方法 根据临床诊断、微生物学和生化实验诊断大肠杆菌病；采用药敏试验测得的敏感药物阿米卡星、氟苯尼考、硫酸安普霉素、盐酸环丙沙星、硫酸庆大霉素、盐酸多西环素对试验动物进行分组用药。试验鸡700羽，设6个试验组，1个对照组，每组100只。结果 在所选8种药物中，鸡大肠杆菌对硫酸安普霉素、氟苯尼考、阿米卡星、硫酸庆大霉素高度敏感；对盐酸多西环素、盐酸环丙沙星中度敏感，对硫酸链霉素和诺氟沙星耐药。结论 应用筛选的敏感药物治疗锦州地区鸡大肠杆菌病效果良好。
【关键词】 鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验；疗效
Abstract：Objective The objective was to screen sensitive drugs for E. coli in the local area through drug sensitivity test. Methods Colibacillosis was diagnosed by clinical， microbiological diagnosis and biochemical tests， the sensitive drugs got by drug sensitivity tests including amikacin， florfenicol， apramycin sulfate， Ciprofloxacin， gentamicin sulfate， doxycycline hydrochloride were medicated to experimental animals which should be pided into groups. 700 chickens were pided into seven groups， six of which were test ones and one of which was the control group (100 chickens/group). Results Of the eight chosen drugs， E.coli was hypersensitive to amikacin， florfenicol， apramycin sulfate， gentamicin sulfate and medium sensitive to doxycycline hydrochloride and Ciprofloxacin， insensitive to Streptomycin sulfate and Norfloxacin. Conclusions Treating the chicken colibacillosis by applying the sensitive drugs got good effects.
Key words:chicken;E.coli;isolation and identification;drug sensitivity test; curative effect
抗生素在防治鸡的大肠杆菌病方面具有重要作用。但由于滥用抗生素，耐药性菌株越来越多。有的鸡场在治疗鸡的大肠杆菌病时，即使是交替应用多种抗生素，其治疗效果也不佳，这样既耽误了鸡病的治疗，又浪费了药物，造成了极大的经济损失［1］。为了准确有效地治疗鸡的大肠杆菌病，本试验从病死鸡体内分离出的大肠杆菌作药敏试验，从而选用对大肠杆菌具有高度敏感性的药物，为大肠杆菌病的防治提供理论依据。
1 实验材料及方法
1.1 试验材料
1.1.1 病料来源 采自锦州市某鸡场10～20 d有典型气囊炎、肝包膜炎、心包膜炎和败血症的病死鸡的肝脏、脾脏、心血等。
1.1.2 菌种 本试验所用的大肠杆菌，是采取病死鸡肝、脾等病料分离培养所得。选取麦康凯琼脂上长出的红色菌落，做药敏试验［2］。
1.1.3 培养基 普通琼脂平板培养基、麦康凯琼脂培养基
1.1.4 药品
阿米卡星可溶性粉剂，山西新开元动物药业有限公司，批号20070203；氟苯尼考可溶性粉剂，北京康牧药械有限公司，批号20070522；硫酸安普霉素可溶性粉剂，山东庆丰堂生物制药有限公司，批号20070309；硫酸庆大霉素可溶性粉剂，上海宏威兽药有限公司，批号20070502；盐酸环丙沙星可溶性粉剂，哈尔滨绿达生物药业有限公司，批号20070203；盐酸多西环素可溶性粉剂，河北科星药业有限公司，批号20070511；硫酸链霉素粉针，山东新华鲁抗医药有限公司，批号20070509；盐酸诺氟沙星沙星可溶性粉剂，浙江朗博药业有限公司，批号20061111。
1.1.5 药物纸片 上海生化试剂厂生产。
1.1.6 实验动物 13日龄AA肉鸡雏700只，公母混养。
1.2 试验方法
1.2.1 细菌分离培养 无菌采集病、死鸡的肝脏、心血等组织，接种在普通琼脂平板及普通肉汤，37℃培养20 h，抹片，革兰氏染色后镜检。挑取表面光滑，边缘整齐，灰白色半透明的单个小菌落划线接种于麦康凯琼脂平板，于37℃培养18～20 h。
1.2.2 细菌形态学观察 取在麦康凯琼脂平板上培养18～20 h的新鲜菌落，抹片进行革兰氏染色镜检。
1.2.3 生化试验 选取麦康凯琼脂上长出的红色菌落，做MR、V-P、靛基质、三糖铁、明胶液化、氧化酶、过氧化氢酶、尿素酶试验。
1.2.4 药敏试验 用常规纸片法进行。直接挑取已分离出的菌落3铂金耳，置于装有3～4 mL生理盐水中，制成混悬液，再用灭菌的棉花拭子沾取菌液直接涂布于新鲜普通琼脂平板上，将药物纸片均匀贴布于培养基表面，纸片间距不能小于20 mm，37℃培养24 h，观察抑菌结果。测量药物纸片的抑菌圈直径。抑菌圈直径大于20 mm者为高度敏感，抑菌圈直径16～20 mm为中度敏感，抑菌圈直径11～15 mm者为低度敏感，抑菌圈直径小于10 mm者为耐药。
1.2.5 试验分组及用药 将700只13 d AA肉鸡随机分成7组，每组100只， 1～6组为用药组，7组为不用药对照组。试验分组及用药情况见表1。
表1 试验鸡分组、给药情况分组鸡数用药名称用法及用量1100 阿米卡星混饮，250 mg/L，连用3 d2100 氟苯尼考混饮，150 mg//L，连用5 d 3100 硫酸安普霉素混饮，250 mg/L，连饮5 d4100 盐酸环丙沙星混饮，1 000 mg /L，2次/d，连用3 d5100 硫酸庆大霉素混饮，40 mg/L，连用3 d6100 盐酸多西环素混饮，1 000 mg/L，连用3 d7100 对照组饲料或饮水中不加任何药物
2 结果与分析
2.1 病、死鸡的病理剖检变化
病鸡肝脏肿大、质脆，有点状坏死灶，表面覆盖有黄白色的纤维素性渗出物；脾脏肿大，肺充血、淤血，部分鸡肺脏有1～2 mm大小坏死灶；肾脏肿大，有尿酸盐沉积；十二指肠有出血性肠炎变化；盲肠扁桃体肿胀、出血。
2.2 细菌分离
在营养琼脂平板上37℃培养20 h后，形成中等大小，圆形微凸起，表面光滑湿润，浅灰色半透明菌落。在麦康凯琼脂平板上，形成中等大小，表面光滑湿润的粉红色菌落。
2.3 细菌形态学观察
病死鸡肝、肾等组织培养物涂片染色镜检，均可见两端钝圆，多数散在排列，偶尔有2～3个连在一起的革兰氏阴性短杆菌。
2.4 生化试验结果
生化试验结果显示，此次分离的大肠杆菌均对大多数糖类（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、果糖、甘露糖，缓慢发酵庶糖）产酸产气，MR试验阳性、V-P试验阴性、产生靛基质、三糖铁底层产酸、明胶液化试验阴性、氧化酶试验阴性、过氧化氢酶试验阳性、尿素酶试验阴性。此结果符合大肠杆菌的特性。
2.5 药敏试验的结果
表2 药敏实验结果（mm）药品名称抑菌圈直径药品名称抑菌圈直径阿米卡星 由此可见，多数菌株对阿米卡星、氟苯尼考、硫酸安普霉素、硫酸庆大霉素高度敏感；对盐酸多西环素、盐酸环丙沙星中度敏感，对硫酸链霉素和诺氟沙星耐药。
2.6 药物的防治效果
用药后3 d，病情得到控制。用药后3 w内各组成活率见表3。表3 用药后3 w内各组成活率
3 讨 论
3.1 关于鸡大肠杆菌病的诊断
通过对病鸡及病死鸡的病理剖检、细菌分离培养及生化特性鉴定，从30只病鸡中分离出17株病原，具有相同的生化特征，符合大肠杆菌的特性。
3.2 关于药敏试验
从药敏试验的结果来看，多数菌株对硫酸安普霉素、氟苯尼考、阿米卡星、硫酸庆大霉素高度敏感；对盐酸环丙沙星、盐酸多西环素中敏，对硫酸链霉素和诺氟沙星耐药。在选用的6种药物中硫酸安普霉素和氟苯尼考的效果较好，但价格相对较贵，阿米卡星、硫酸庆大霉素效果次之，但价格较硫酸安普霉素和氟苯尼考低廉，而盐酸环丙沙星和盐酸多西环素与安普霉素和氟苯尼考相比效果较差。所以，考虑到药物的价格因素，该场应以阿米卡星为主，并定期与硫酸安普霉素和氟苯尼考轮换来防治大肠杆菌病。但长期应用某一种或几种抗菌药物容易产生耐药性，因此在用药前仍须做药敏试验［3］。
3.3 关于药物的防治效果
从表3成活率的对比中可以看出，第1周各组间成活率差异最明显，第2周、第3周变化很小。这不仅是药物作用的结果，而且也可能是由于雏鸡年龄增大自身抵抗力增强的结果。从用药与不用药组的成活率的对比来看，硫酸安普霉素、氟苯尼考、阿米卡星、硫酸庆大霉素用药组明显高于盐酸环丙沙星、盐酸多西环素给药组和不给药对照组，由此看来，应用敏感药物可有效地预防大肠杆菌病，明显的提高了成活率，这与药敏试验的结果是一致的。本次试验的结果进一步表明：药敏试验指导临床用药的重要性，不仅可以避免药物的浪费，而且可以防止耐药菌株的产生。
参考文献
［1］ 刘吉山，浓志强，李峰，等. 鸡大肠杆菌病病原鉴定及药敏试验［J］.养禽与禽病防治， 2000，(02)：190.
［2］ 邵夕莲. 鸡大肠杆菌药敏试验［J］. 山东畜牧兽医，2004，(06)：41.
［3］ 王扬伟，郭长华. 鸡致病性大肠杆菌14种抗菌药物的药敏试验［J］. 中国禽业导刊， 2006，(24)：25.