作者：付雪艳 董琳 马学琴 丁晓丽
【摘要】 目的 筛选卷柏对胰岛素抵抗治疗作用的活性部位。方法 AB-8大孔树脂柱色谱法制备不同极性的洗脱部位(水洗部分组、50%乙醇洗部分组、95%乙醇洗部分组)及水提液组，以高脂饮食大鼠胰岛素抵抗动物模型，检测血糖、空腹胰岛素，计算胰岛素敏感性指数，进行卷柏活性部位筛选。结果 卷柏水提液及大孔树脂50%乙醇洗脱部分均能降低空腹胰岛素(P＜0.01)，提高ISI(P＜0.05)。结论 卷柏水提液及大孔树脂50%乙醇洗脱部分均对大鼠胰岛素抵抗有明显的缓解作用。
【关键词】 卷柏 胰岛素抵抗 活性部位
卷柏为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring及垫状卷柏S.pulvinata(Hook.et Grev.)Maxim.的全草，该属植物我国约有60～70 种。具有活血通经之功效，用于经闭痛经，症瘕痞块，跌扑损伤；炒炭后可化癖止血，用于吐血、崩漏、便血、脱肛［1］。文献报道［2］卷柏水提液对多果糖餐大鼠胰岛素抵抗动物模型有明显的改善作用，但未见其作用物质基础的相关报道。本实验以活性部位对胰岛素敏感性指数影响为指标，筛选了卷柏治疗胰岛素抵抗的活性部位，为进一步的成分分离及机制研究提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物 清洁级SD大鼠，雄性，体重180～220g，购自宁夏医科大学实验动物中心，动物生产许可证编号：SCXR(宁)2005-001，自由摄食和饮水，室温保持在(20±2)℃，湿度(50±1)%。适应性喂养1周实验。
1.2 药材 卷柏购自毫州药材市场，经宁夏药检所鉴定为卷柏。
1.3 试剂与材料 盐酸二甲双胍片，批号20070915，规格0.5g/片，杭州中美华东制药有限公司生产；血糖试剂盒(葡萄糖氧化酶法)，购自保定长城临床试剂有限公司；胰岛素放射免疫分析试剂盒购自北京普尔伟业生物科技有限公司；AB-8型大孔吸附树脂，购自南开大学化工厂。
1.4 仪器 HH-501二联可调电热器(江苏省丹阳县医疗器械二厂)；RE-52A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；GC-1200γ放射免疫计数器(科大创新有限公司中佳分公司)。
1.5 样品制备 取卷柏2kg，粉碎，水煎煮3次，每次1h，滤过，合并提取液，浓缩得水提液(1mg/mL)。所得水提液经大孔树脂柱层析(树脂与生药质量比为1∶1)，分别经水、50%乙醇、95%乙醇洗脱，得各个洗脱部位，浓缩后备用。
1.6 实验方法 大鼠70只，随机分为7组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、盐酸二甲双胍组(阳性药组)、卷柏水提液组、大孔树脂水洗脱组分(简称水组分)、大孔树脂50%乙醇洗脱组分(简称50%组分)、大孔树脂95%乙醇洗脱组分(简称95%组分)。正常对照组给予普通饲料喂养，其余组给予高热量饲料(饲料组成：猪油15%，花生10%，蛋黄粉及糖、盐等，其余为基础饲料［3］)喂养12周。自10周始，正常对照组和模型组灌胃(ig)给予等体积生理盐水，阳性药物组给予盐酸二甲双胍(0.33g/kg·d)，ig；治疗组分别给予卷柏水提液(0.08g/kg·d)，水组分(0.039 g/kg·d)；50%组分(0.028 g/kg·d)；95%组分(0.012 g/kg·d)，ig，共给药2周(以临床剂量为依据，由人鼠换算公式及提取分离转化率换算而得)。末次给药2h后，大鼠眼眶静脉取血，分离血清，置-20℃冰箱保存，备用。血糖、空腹胰岛素水平测定，按试剂盒说明进行操作。胰岛素敏感性指数，按公式ISI＝Ln［1/(FINS×FBG)］计算［4］。
1.7 统计学方法 采用t检验，实验结果以(±s)表示，数据用SPSS 12.0软件处理。P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 卷柏各组分对胰岛素抵抗大鼠一般状态的影响 与正常对照组比较，模型组体毛松散，行动迟缓。给药后，大鼠精神状态有明显的改善。
2.2 卷柏各组分对胰岛素抵抗大鼠血糖、空腹胰岛素，胰岛素敏感性指数的影晌
2.2.1 对血糖的影响
与正常对照组比较，模型组能够显著升高血糖(P＜0.05)，与模型组比较，阳性药组和卷柏水提液组对血糖有降低作用(P＜0.05)，其余组分无统计学意义(P＞0.05)。
2.2.2 对空腹胰岛素的影响
与正常对照组比较，模型组显著升高空腹胰岛素水平(P＜0.05)；与模型组比较，阳性药组、卷柏水提液组和50%对空腹胰岛素水平有降低作用(P＜0.05)，其余组分差异无统计学意义(P＞0.05)。
2.2.3 对胰岛素敏感性指数的影响
与正常对照组比较，模型组能显著降低胰岛素敏感性指数(P＜0.05)；与模型组比较，阳性药组、卷柏水提液组和50%乙醇组对胰岛素敏感性指数有升高作用(P＜0.05)，其余组分无统计学意义(P＞0.05)。
表1 卷柏对胰岛素抵抗大鼠血清血糖和空腹胰岛素指标的影响（略）
与模型组比较▲P＜0.05；与正常对照组比较★P＜0.05
3 讨论
卷柏始载于《神农本草经》，被列为上品［5］，国内外研究表明，卷柏水煎剂可降低老龄高血糖模型鼠的血糖，对正常大鼠的降血糖作用不明显［6］；卷柏水提液对链脲佐菌素所致的糖尿病大鼠模型具有显著的降低血糖、升高胰岛素水平和降低丙二醛(MDA)含量的作用［7］。胰岛素抵抗是指靶组织对胰岛素的敏感性降低，使正常或超过正常水平的胰岛素只能产生低于正常的生理效应，临床上常出现继发性高胰岛素血症。胰岛素抵抗以及由此引起的代偿性高胰岛素血症与人群中2型糖尿病、肥胖、高血压和冠心病等疾病的高发生率密切相关［8-9］，实验研究表明高脂饮食喂养大鼠可建立胰岛素抵抗动物模型，该模型可使血胰岛素水平及血糖升高［3］。本研究结果表明，卷柏水提液组能够降低血糖，提示其对血糖有一定的调节作用。卷柏水提液和50%组分能够降低血胰岛素水平，并提高胰岛素敏感性指数，说明这两个组分能够改善胰岛素抵抗。
参考文献
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