作者：陈虎，肖旭，王基云，李晓兵，杨卫东
【摘要】 目的 研究老瓜头(Cynanchum komarovii Al. Iljinski)总生物碱(ACKs)对角叉菜胶诱导的大鼠胸膜炎的抑制作用及其作用机制。方法 采用吲哚美辛(10 mg·kg-1)或不同剂量的ACKs(12，6，3 mg·kg-1)于角叉菜胶(0.2mL，10 mg·mL-1)制备大鼠胸膜炎模型前30min腹腔注射给药，在造模后4h处死大鼠，测定胸腔渗出液体积，渗出液中白细胞计数，测定肺组织匀浆中丙二醛（MDA）的含量以及超氧化物歧化酶（SOD）的活性，并做肺组织形态学观察。结果 吲哚美辛和ACKs各剂量均能降低胸腔液体渗出和白细胞浸润，降低肺组织中MDA的含量，升高肺组织中SOD的活性。结论 ACKs对角叉菜胶制备的大鼠胸膜炎有抑制作用并减少白细胞浸润和炎性渗出，其作用机制可能与抑制活性氧对机体的损伤作用有关。
【关键词】 老瓜头总生物碱；胸膜炎；白细胞浸润
Abstract: Objective To explore the anti-inflammatory effects of alkaloids from Cynanchum komarovii Al.Iljinski (ACKs) on rat carrageenin-induced pleurisy and to demonstrate the anti-inflammatory mechanism.Methods Rats were pretreated with an intraperitoneal injection of physical saline，indomethacin (10 mg·kg-1) or ACKs (12，6，3 mg·kg-1).30min later，rats were anaesthetized and irritated with carrageenin (0.2mL，10 mg·kg-1) by pleural injection.And 4h later，rats were sacrificed by exsanguination and opened the pleural cavity carefully，then moved the exudate out and measured its volume and counted the number of leukocytes in it with light microscopy.At last，the levels of MDA and SOD in lung homogenate were measured.Results Both indomethacin and ACKs could reduce the volume of exudate as well as the number of leukocytes in it and so did the levels of MDA and SOD in lung homogenate.Conclusion The anti-inflammatory effects of ACKs on rat carrageenin-induced pleurisy may lie in the infiltration of leukocytes and scavenging of radical free oxygen and oxide.
Key words:ACKs；pleurisy；leukocyte infiltration
老瓜头（Cynanchum komarovii Al. Iljinski），别名牛心朴子草，系萝摩科鹅绒藤属植物。老瓜头在西北地区是一种重要的蜜源植物，并可以作为生物杀虫剂加以开发利用。在医学方面，民间用于镇痛、退烧、止泻和治疗胆囊炎等。近20余年的实验研究表明老瓜头还有止咳、祛痰、平喘和抗炎等药理作用［1-6］。本研究用角叉菜胶诱导的大鼠胸膜炎模型来研究老瓜头总生物碱(ACKs)对急性炎症的抑制作用。
1 材料和方法
1.1 动物
SD大鼠，雄性，体重200～250g，购于宁夏医科大学实验动物中心，动物合格证号：SCXK(宁)2005-0001。
1.2 药物与试剂
老瓜头总生物碱，宁夏回族自治区物理研究所分析测试中心制备，用Tris-HCl液配成浓度为6、3、1.5 mg·mL-1的溶液，调pH值4.5；吲哚美辛，上海第十七制药厂制，批号840303，用NaCO3-NaHCO3缓冲液配成浓度为5 mg·mL-1的水溶液，调pH值7.4；水合氯醛，上海白鹤化工厂制，批号841218，配成7%的水溶液；角叉菜胶，由辽宁药物研究所提供，使用前一天用生理盐水配成1%的溶液，溶解过夜；蛋白定量、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，均购于南京建成生物工程研究所。
1.3 仪器
光学显微镜，日本Olympus公司产；CF16RX高速低温离心机，日立公司；电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司；VIS-7220N可见分光光度计，北京瑞利分析仪器公司。
1.4 方法
大鼠胸膜炎模型的制备、取材和生化指标检测 SD大鼠按体重随机分成6组，每组8只，分别为正常对照组，模型组，吲哚美辛组(10 mg·kg-1)，ACKs高、中、低剂量组(12、 6、3 mg·kg-1)。参照Salvatore Cuzzocrea等人制备大鼠胸膜炎模型的方法［8-10］，分别腹腔注射生理盐水和相应的药物；30min后用水合氯醛（280 mg·kg-1）腹腔注射麻醉大鼠，向胸膜腔注射1%的角叉菜胶溶液0.2mL和生理盐水0.2mL（正常对照组）；致炎4h后再次用水合氯醛麻醉大鼠，沿膈肌边缘打开胸腔，吸出胸腔渗出液，用2mL含肝素(5 U·mL-1)的生理盐水冲洗胸腔，吸出，与胸腔渗出液合并，测定总体积，另外取部分合并液做白细胞计数；取出右肺，用生理盐水洗去表面血液，滤纸蘸干，称取0.5g相同部位的肺组织加入4.5mL的生理盐水，制备成10%肺匀浆溶液，800g离心10min，吸取上清液待测，按丙二醛、超氧化物歧化酶测定试剂盒说明书，测定肺组织中MDA的含量和SOD的活性。另取相同位置的肺组织，10%的甲醛溶液固定1周，脱水，石蜡包埋，切片，苏木精-伊红染料(HE)染色，光学显微镜观察。
1.5 统计学方法
结果以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 11.5统计软件单因素方差分析中的LSD检验方法处理，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 ACKs对大鼠胸膜炎胸腔渗出液量、白细胞计数的影响
角叉菜胶致炎后4h，模型组大鼠胸腔渗出液量和白细胞数显著高于正常对照组；ACKs三个剂量组均能降低大鼠胸腔渗出液量和白细胞数（P＞0.01），见表1。表1 ACKs对大鼠胸膜炎胸腔渗出液量、白细胞计数的影响（略）
2.2 ACKs对大鼠胸膜炎肺组织中MDA和SOD的影响
角叉菜胶致炎后4h，模型组大鼠肺组织中MDA升高，而SOD下降（P＜0.01）；ACKs高、中剂量组能降低大鼠肺组织中MDA（P＜0.01），同时能升高SOD(P＜0.01），见表2。表2 ACKs对大鼠胸膜炎肺组织中MDA和SOD的影响（略）
2.3 肺组织形态学观察
与正常对照组相比，各致炎组大鼠的肺组织出现明显的急性炎症特征，表现为大量炎症细胞浸润、肺被膜增厚等。与模型组相比，吲哚美辛组和ACKs各剂量组大鼠肺组织的炎症有所改善，图1(见封3)。
3 讨论
急性炎症是机体对致炎因子的刺激所发生的立即和早期反应。急性炎症的主要特点是以血管反应为中心的渗出性变化，导致血管内的白细胞和抗体等透过血管壁进入炎症反应部位，消灭病原体，稀释并中和毒素，为炎症修复创造良好的条件。急性炎症起病急骤，持续时间短，以炎症细胞浸润为主。急性炎症反应中的血管扩张、通透性升高和白细胞渗出的发生机制，是炎症发生机制的重要课题。有些致炎因子可直接损伤内皮，引起血管通透性升高，但许多致炎因子并不直接作用于局部组织，而主要是通过内源性化学因子的作用而导致炎症［8-10］。活性氧及其代谢物是内源性化学因子的重要组成成分，对炎症的发生、发展和结局起着重要作用［7］。MDA就是活性氧代谢物之一，它是机体内脂质在脂质过氧化物酶作用下生成的终产物。而SOD是体内清除超氧阴离子的重要酶类，它的活性直接影响体内活性氧的含量，反映机体的抗氧化能力。一般同时测定MDA和SOD更能说明活性氧对机体损伤程度的大小。本研究结果表明，老瓜头总生物碱能减少大鼠胸膜炎的液体渗出、白细胞浸润以及肺组织中MDA的含量，而升高SOD的活性。提示老瓜头总生物碱抑制大鼠胸膜炎的作用机制可能是降低炎症细胞的游走和浸润以及提高机体的抗氧化能力，降低体内活性氧对组织的损伤作用。
参考文献
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