作者：叶晓锋，高平，韩恩善，秦憬
【摘要】 目的检测MMP-2、PTEN在食管鳞癌组织中的表达，探讨其与患者临床病理特征及其相关关系。方法采用免疫组化S-P法检测MMP-2、PTEN在40例食管鳞癌和20例正常食管上皮组织中的表达。结果(1)食管鳞癌组织MMP-2、PTEN表达阳性率分别为80.00%、50.00%，与正常食管上皮组织比较差异均有统计学意义(P&<0.01)。(2)MMP-2、PTEN阳性率在食管癌不同浸润深度、淋巴结有无转移和不同临床分期中均有统计学意义(P&<0.05)。(3)PTEN与MMP-2、阳性率呈负相关(P&<0.05)。结论食管鳞癌组织中MMP-2高表达，PTEN低表达，两者联合检测可能对食管鳞癌浸润转移的预后判断有一定指导意义。
【关键词】 食管鳞癌;基质金属蛋白酶-2;磷酸脂酶基因
[Abstract]ObjectiveTo detect the expression of MMP-2，PTEN and discuss their relationship in esophageal squamous cell carcinoma.MethodsS-P immunohistochemical method was performed to detect expressions of MMP-2 and PTEN in 40 cases of esophageal squamous cell carcinoma and 20 normal subjects.ResultsThe positive rate of MMP-2 and PTEN in esophageal squamous cell carcinoma patients was 80.00% and 50.00%，comparing with normal subjects，there were all significant differences (P&<0.01); The positive rates of MMP-2 and PTEN were significantly correlated with invasion，clinical stage，lymph node metastasis(P&<0.05); There were significantly negative correlations between PTEN and MMP-2 (P&<0.05).ConclusionExpression of MMP-2 is increased and PTEN is decreased in esophageal squamous cell carcinoma，they are correlated with clinical stage. They can be used as molecular biological markers for evaluating invasion and metastasis.
[Key words]Esophageal squamous cell carcinoma; MMP-2; PTEN
食管癌的浸润和转移是一个多步骤、多阶段和多因素参与的复杂过程，是影响患者预后的主要因素。本研究通过检测食管鳞癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、第10号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸脂酶 (PTEN)的表达，探讨MMP-2、PTEN的表达及其与食管鳞癌浸润转移的关系，并依此寻找新的辅助诊断或判断预后的检测指标。
1材料与方法
1. 1标本来源：
选取2007年间我院手术切除并经病理学确诊的原发性食管鳞癌组织40例，患者年龄28-77岁(平均年龄56岁)，所有病例术前均未接受化疗、放疗和其它抗肿瘤治疗。40例标本中病理分级为高分化7例、中分化15例、低分化18例。按照2002年食管癌AJCC分期进行TNM分期：Ⅰ期7 例、Ⅱ期17 例、Ⅲ期12 例、Ⅳ期 4例。有淋巴结转移15例，无淋巴结转移25例。20例HE染色确定为正常食管鳞状上皮组织作为对照。
1.2主要试剂：
①MMP-2、PTEN鼠抗人单克隆抗体。② S-P试剂盒。③ 二氨基联苯胺(DAB)显色剂盒。④ 0.1M的柠檬酸钠(PH 6.0)抗原修复液，10X多聚赖氨酸防脱片剂及PBS粉。试剂来源于北京中杉金桥生物制剂有限公司。
1.3免疫组化方法：
所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色和病理组织学确诊。石蜡包埋组织块切片厚4μm，对石蜡切片进行免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法测定。依常规免疫组化方法，按试剂盒说明书操作，用已知鼠抗人MMP-2单克隆抗体阳性的乳腺癌标本及鼠抗人PTEN单克隆抗体阳性的结肠腺癌标本作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。
1.4结果判定：
MMP-2、PTEN阳性反应均为黄色或棕黄色颗粒，MMP-2主要定位于细胞质， PTEN主要定位于细胞浆。综合染色强度和阳性细胞率判定结果。①阳性着色-无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分;②阳性细胞率-每张切片取5个高倍视野(×400)，计数肿瘤细胞中的阳性细胞百分率，无阳性细胞为0分、阳性细胞数≤10%为1分、11%-25%为2分、26%-50%为3分、&>50%为4分。染色强度×阳性细胞百分比&>3分为阳性，≤3分为阴性。
1.5统计学方法：
应用SPSS 13.0统计软件进行分析，参数的关系应用χ2检验或Fisher精确概率法分析，相关性应用Spearman等级相关分析。
2结果
2.1食管鳞癌组织MMP-2、PTEN的表达：
食管鳞癌组织MMP-2、PTEN表达阳性率分别为80.0%、50.0%，见图1、2(封二)，与对照组比较差异均有统计学意义(P&<0.01)，见表1。表1食管鳞癌组织MMP-2、PTEN的表达
2.2食管鳞癌组织MMP-2、PTEN的表达与患者临床病理特征的关系:
MMP-2阳性率在不同浸润深度、淋巴结有无转移和不同临床分期中有统计学意义(P&<0.05)，在肿瘤分化程度中的表达无差异。PTEN阳性率在肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结有无转移和不同临床分期均有统计学意义(P&<0.05)。表2食管鳞癌组织MMP-2、、PTEN表达与患者临床病理特征的关系
2.3食管鳞癌组织中MMP-2、PTEN表达间的关系：
经相关分析食管鳞癌组织中PTEN与MMP-2表达的阳性率呈负相关(r=-0.500，P=0.001)。
3讨论
肿瘤的浸润和转移具有极其复杂的分子生物学变化过程，细胞外基质是防止恶性肿瘤局部侵袭、远处转移的重要生理屏障。目前研究证实基质金属蛋白酶(MMPs)是降解细胞外基质，破坏基底膜完整性过程中最重要的酶系统，其中MMP-2可特异性降解基底膜主要成分4型胶原独特的螺旋结构，使基底膜丧失完整性，这对瘤细胞穿越基底膜结构和血管内皮细胞侵袭血管周围基质、肿瘤新生血管都非常重要。近年研究发现MMP-2 在促进血管生成，以及肿瘤的生长、浸润和转移等恶性生物学行为中起重要作用[1]。本研究显示食管鳞癌组织中MMP-2在肿瘤的不同浸润深度、有无淋巴结转移、不同临床分期中的表达有统计学意义(P&<0.05)，提示MMP-2与食管癌的浸润和转移密切相关。
PTEN是1997年发现的一种新型抑癌基因，目前研究已表明其表达产物负性调控细胞周期及多种信号途径，抑制细胞黏附迁移，诱导细胞分化及凋亡等多种生理活动[2]。大量研究表明PTEN基因突变或表达下调在肿瘤发生中起重要作用。食管癌组织中也存在PTEN基因的突变缺失[3]和启动子的异常甲基化[4]，沿正常食管组织、肠化生、不典型增生和食管癌的癌变过程，PTEN表达逐渐降低[5]。李劲松等[6]检测60例食管癌组织及癌旁正常食管上皮组织PTEN的表达，结果食管癌组织中PTEN阳性率为65.0%，低于癌旁正常食管上皮组织94.4%的阳性率(P&<0.05)。同时发现PTEN在食管癌高、中、低分化组的阳性率逐渐降低，差异有统计学意义(P&<0.05)。张伟峰等[7]研究表明PTEN mRNA及蛋白表达与食管癌的分化程度高低、浸润深度、淋巴结转移和临床分期显著相关。本实验显示食管鳞癌组织中PTEN阳性率为50.00%，显著低于正常食管鳞状上皮组织85%的阳性率，并随着分化程度降低、浸润深度增加、淋巴结出现转移、临床分期增加，PTEN阳性率下降。与上述文献报道一致。
参考文献
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[6]李劲松，杨琨，王建军.PTEN蛋白在食管癌中的表达及临床意义[J].华中科技大学学报(医学版)，2006，35(5):623-629.
[7]张伟峰，杨维良，王夫景，等.PTEN基因在胃癌中的表达及其意义[J].中华实验外科杂志，2003，20(5):468-469.
[8]Park MJ，Kim MS，Park IC，et al. PTEN suppresses hyalu-ronic acid-induced matrix metalloproteinase-9 expression in U87MG glioblastoma cells through focal adhesion kinase dephos-phorylation [J]. Cancer Res，2002，62(21):6318-6322.
[9]许雪峰，林杰成，蚁义蝉.MMP-2和PTEN在贲门癌中的表达及临床意义(附115例分析)[J].福建医学杂志，2009，31(3)：76-78.