作者：唐烨霞 程志清 姚立 吴玉芙 龚文波
【摘要】 目的：观察心气虚大鼠自由基损伤及心肌超微结构。方法：成年近交系Wistar大鼠26只，雌雄各半，随机分为对照组12只和观察组14只；将观察组动物制成心气虚模型后测定血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，并用透射电镜观察大鼠心肌超微结构。结果：观察组SOD低于对照组(P＜0.01)，MDA高于对照组(P＜0.01)；观察组心肌细胞受到损害，肌纤维排列紊乱，线粒体肿胀，结构模糊，嵴有溶解现象。结论：心肌超微结构受损可能是导致心气虚的原因，而其损伤机制可能与自由基有关。
【关键词】 心气虚；自由基；心肌超微结构
Abstract Objective: To observe the damage to free radical and ultramicrostructure of heart muscle in the rats with deficiency of heart-energy. Methods: 26 adult inbreeding line Wistar rats were pided into the control group (12 rats) and the model group (14 rats). After preparing animal model of deficiency of heart-energy with the rats from the model group. SOD and MDA was measured， and heart muscle ultramicrostructure was observed as well by electron microscope. Results: SOD of swimming model group was lower than that in the control group(P＜0.01). MDA of swimming model group was higher than that in the control group(P＜0.01). ultramicrostructure of heart muscle was damaged in the rats from the model group. Conclusion: The damage to heart muscle ultramicrostructure may be chiefly responsible fro deficiency of heart-energy， and its damaging mechanism seems to be related to free radical.
Key words Deficiency of heart-energy； Free radical; Heart muscle ultramicrostructure
目前，心血管病发病率、病死率居国内第一、二位，如何提高其疗效已成为医学界共同关注的问题。在心血管病系统中，心气虚证为常见证型[1]。因此，对心气虚证研究是中医防治心血管疾病的关键。如果能探寻导致心气虚证的原因，就会为心气虚证的防治带来新的思路和方法。我们在成功制备了不含其它兼证的心气虚证动物模型的基础上，探寻心气虚证与自由基损伤及心肌超微结构的关系，以期寻找导致心气虚证的机理。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 近交系Wistar大鼠（购自中国科学院上海实验动物中心）26只，体重180～200g，雌雄各半，随机分为对照组（14只）和观察组（12只）。
1.1.2 实验试剂 SOD、MDA试剂盒由南京建成生物工程研究所一分所提供；cGMP、cAMP试剂盒由A Beckman Coulter Company(France)生产。
1.1.3 实验仪器 SN-682放射免疫γ计数器（中科院上海原子核研究所日环仪器厂）。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法 详见唐烨霞等[2]的方法。
1.2.2 血清标本制备及指标测定 心气虚动物模型制备成功后，观察组和对照组大鼠摘眼球法取血，所取血液置于试管中，37℃水浴2小时，3 000rpm离心15分钟，吸取血清保存于－20℃冰箱，分光光度法测定血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，放射免疫法测定血清cAMP、cGMP。
1.2.3 心肌标本制备 取心脏，滤纸吸干血迹，置于4%的多聚甲醛溶液中固定，供作病理切片。取大鼠左心室心肌置入3%戊二醛固定，包埋，切片，用于透射电镜对大鼠心肌超微结构进行观察。
1.2.4 统计方法 计量资料数据均用均数±标准差（x±s）表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。
【摘要】 目的：观察心气虚大鼠自由基损伤及心肌超微结构。方法：成年近交系Wistar大鼠26只，雌雄各半，随机分为对照组12只和观察组14只；将观察组动物制成心气虚模型后测定血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，并用透射电镜观察大鼠心肌超微结构。结果：观察组SOD低于对照组(P＜0.01)，MDA高于对照组(P＜0.01)；观察组心肌细胞受到损害，肌纤维排列紊乱，线粒体肿胀，结构模糊，嵴有溶解现象。结论：心肌超微结构受损可能是导致心气虚的原因，而其损伤机制可能与自由基有关。
【关键词】 心气虚；自由基；心肌超微结构
Observation of the Damage to Free Radical and Heart Muscle Ultramicrostructure in
the Rats with Deficiency of Heart-energy
TANG Yexia，CHENG Zhiqing，YAO Li，et al
(Department of Physiology ，Baotou Medical College，Baotou 014060，China)
Abstract Objective: To observe the damage to free radical and ultramicrostructure of heart muscle in the rats with deficiency of heart-energy. Methods: 26 adult inbreeding line Wistar rats were pided into the control group (12 rats) and the model group (14 rats). After preparing animal model of deficiency of heart-energy with the rats from the model group. SOD and MDA was measured， and heart muscle ultramicrostructure was observed as well by electron microscope. Results: SOD of swimming model group was lower than that in the control group(P＜0.01). MDA of swimming model group was higher than that in the control group(P＜0.01). ultramicrostructure of heart muscle was damaged in the rats from the model group. Conclusion: The damage to heart muscle ultramicrostructure may be chiefly responsible fro deficiency of heart-energy， and its damaging mechanism seems to be related to free radical.
Key words Deficiency of heart-energy； Free radical; Heart muscle ultramicrostructure
目前，心血管病发病率、病死率居国内第一、二位，如何提高其疗效已成为医学界共同关注的问题。在心血管病系统中，心气虚证为常见证型[1]。因此，对心气虚证研究是中医防治心血管疾病的关键。如果能探寻导致心气虚证的原因，就会为心气虚证的防治带来新的思路和方法。我们在成功制备了不含其它兼证的心气虚证动物模型的基础上，探寻心气虚证与自由基损伤及心肌超微结构的关系，以期寻找导致心气虚证的机理。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 近交系Wistar大鼠（购自中国科学院上海实验动物中心）26只，体重180～200g，雌雄各半，随机分为对照组（14只）和观察组（12只）。
1.1.2 实验试剂 SOD、MDA试剂盒由南京建成生物工程研究所一分所提供；cGMP、cAMP试剂盒由A Beckman Coulter Company(France)生产。
1.1.3 实验仪器 SN-682放射免疫γ计数器（中科院上海原子核研究所日环仪器厂）。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法 详见唐烨霞等[2]的方法。
1.2.2 血清标本制备及指标测定 心气虚动物模型制备成功后，观察组和对照组大鼠摘眼球法取血，所取血液置于试管中，37℃水浴2小时，3 000rpm离心15分钟，吸取血清保存于－20℃冰箱，分光光度法测定血清超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，放射免疫法测定血清cAMP、cGMP。
1.2.3 心肌标本制备 取心脏，滤纸吸干血迹，置于4%的多聚甲醛溶液中固定，供作病理切片。取大鼠左心室心肌置入3%戊二醛固定，包埋，切片，用于透射电镜对大鼠心肌超微结构进行观察。
1.2.4 统计方法 计量资料数据均用均数±标准差（x±s）表示，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 生化指标 观察组SOD含量低于对照组(P＜0.01)，造模组MDA含量高于对照组(P＜0.01)，观察组cAMP含量低于对照组(P＜0.01)。见表1。表1 Wistar大鼠游泳组生化指与正常组比较*与正常组比较P＜0.05，**与正常组比较P＜0.01
2.2 形态学改变 心肌光镜检查未发现明显的结构变化。电镜结果显示，观察组大鼠心肌细胞肌原纤维排列紊乱，线粒体肿胀，结构模糊，嵴有溶解现象。见图1。
3 讨论
实验中观察组动物血清SOD含量均明显下降(P＜0.01)，MDA含量升高，与临床心气虚患者SOD含量明显低于健康人（P＜0.05）一致。这是由于心气虚证机体抗氧化作用减弱，对脂质过氧化物清除能力减弱，而导致生物体的自由基代谢的动态平衡失调[3]。
环核苷酸信号系统主要由cAMP和才cGMP两个相对独立系统组成，cAMP在细胞外信息分子调节细胞功能的过程中，起着快速跨膜传递和广大信号的作用。cGMP浓度一般比cAMP低，其介导的作用常与cAMP相反[4]。观察组大鼠cAMP含量较对照组明显降低，cAMP浓度降低会使心肌收缩力下降[5]。cAMP浓度降低的原因可能是心肌中兴奋性G-蛋白减少，导致AC活性降低所致。实验结果中观察组cGMP浓度虽比对照组低，但尚无统计学意义，可能是因为本模型动物心气虚程度较轻之故。
电镜结果显示造模组心肌超微结构出现明显变化，包括肌原纤维排列紊乱、线粒体肿胀、嵴溶解等现象，其原因很可能与自由基浓度增高有关。
由此可见，心气虚动物心肌超微结构出现明显改变，血中自由基含量明显增加可能是其原因，并导致cAMP浓度明显降低，致使心功能出现改变。
参考文献
[1] 屈松柏.心脏病心阴虚证候特征探讨[J].湖北中医杂志，1995，17(3)：24-26.
[2] 唐烨霞，程志清，姚立，等.大鼠心气虚模型制备方法［J］.包头医学院学报.2009，25（1）:
[3] 徐红，钱宝庆，张永华，等. 抗氧化合剂对虚症患者抗脂质过氧化损伤的影响[J].浙江中医学院学报，1998，22（3）：38-39.
[4] 胡建鹏，吕磊.气虚血瘀证局灶性脑缺血再灌注大鼠血浆及脑组织cAMP、cGMP含量动态研究[J].安徽中医学院学报，2004，23(1):35-37.
[5] 王伦安.才AMP在疾病过程中的作用［J］.华西医学，2003，18（2）：293-294.