【摘要】 目的 研究活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用。方法 将活性炭加入小牛血清去蛋白提取液中，过滤后检测蛋白含量及吸光度值，呼吸活性及氨基酸的含量。结果 与无活性炭对照比较，加入活性炭后小牛血清去蛋白提取液吸光度值、多肽含量均明显下降;呼吸活性及氨基酸含量没有明显变化。结论 活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽有吸附作用。
【关键词】 活性炭;小牛血清去蛋白提取液;多肽
The Absorption Effect of Active Carbon on the Polypeptide
in Calf Serum Abstract Protein-freeLI Xin，WANG Tie
(Liaoning Ahon Pharmaceuticals Corporation Limited，Jinzhou 121000 China)Abstract：Objective To study the effects of active carbon on the polypeptide in calf serum abstract protein-free. Methods Put active carbon into calf serum abstract protein-free; and determine protein content， absorbance， amino acid content and breath nature after filtration.Result Compared with the group without active carbon， absorbance and protein content decreased ，while breath nature and amino acid content did not decrease.Conclusions Polypeptide was absorbed by active carbon
Key words：active carbon; calf serum abstract protein-free; polypeptide
活性炭是一种多孔径的炭化物，有极丰富的孔隙构造，具有良好的吸附特性，它的吸附作用藉物理及化学的吸咐力而成的，其外观色泽呈黑色。其成份除了主要的炭以外，还包含了少量的氢、氮、氧，其外形似一个六边形，由于不规则的六边形结构，确定了其多体枳及高表面积的特点，每克的活性炭所具有的比表面相当于1 000个平方米之多，其吸附容量大、脱附速度快，耐酸、耐碱、耐高温，无毒、无味、无臭;广泛应用于国防、科研、石化、生化、环保、医药、食品、卫生等领域。几乎所有人工合成和生物制药的原料药，尤其是西药都采用活性炭进行脱色精制[1，2]。活性炭吸附的主要作用是去除杂质、提高纯度和去除热源。我公司产品小牛血去蛋白提取液在生产中采用，活性炭脱色，本文研究其在脱色的同时对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用及其对产品质量的影响。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 活性炭(上海活性炭厂有限公司);小牛血清去蛋白提取液(奥鸿药业提供)。
1.1.2 药品与试剂 血清白蛋白(中国药品生物制品检定所);酚试剂(医学科学院生物制剂中心);碱性铜(奥鸿药业提供)。
1.1.3 仪器 UV-1700紫外分光光度计(岛津苏州仪器制造);BP211D电子天平(北京赛多利斯有限责任公司);微孔滤膜过滤器。
1.1.4 高效液相色谱仪
1.1.5 呼吸活性检测仪
1.2 方法
取小牛血清去蛋白提取液6个批次各1 000 mL，检测吸光度值、蛋白含量、氨基酸含量及呼吸活性(1组)，分别加入活性炭0.15 g，混合均匀后，放置30 min，过滤除炭，检测吸光度、蛋白含量、氨基酸含量及呼吸活性(2组)，再分别继续加入活性炭0.15 g重复上述操作两次，得(3组)、(4组)。4组数据相比较。
1.3 检测方法
1.3.1 吸光度的测定[3]
依据紫外-可见分光光度法(《中国药典》2005年版附录)，在波长420 nm处测定吸光度值。
1.3.2 多肽含量的测定
标准曲线的制备：精密量取标准蛋白溶液(0.1 mg/mL)0mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL，分别于试管中，加水至1 mL，再分别加碱性铜溶液5 mL，混匀于室温放置10 min，再加入酚试剂0.5 mL摇匀，于室温放置30 min，于650 nm波长处用空白管调零，测定各管的吸光度值，以蛋白质含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。李鑫，等：活性炭对小牛血清去蛋白提取液中多肽的吸附作用辽宁医学院学报 2008年8月，29(4)
样品测定：取本品10倍稀释，作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1 mL，于试管中，加碱性铜溶液5 mL，摇匀于室温放置10 min，再加入酚试剂0.5 mL摇匀，于室温放置30 min，于650 nm波长处测定吸光度，从标准曲线中求得样品中蛋白质的含量。
1.3.3 氨基酸含量的测定
将对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，每次2.5 μL，记录色谱图，按内标法以峰面积计算。
计算公式：
游离氨基酸含量(mg/mL)=
(滤样浓度-内标浓度)×58.8内标浓度×1 000
1.3.4 采用呼吸检测仪检测各组样品的呼吸活性测定方法如下：
预先把测压计反应瓶洗净并干燥备用，装好测压液于测压管内，调节液面至150 mm。加10%氢氧化钾溶液0.2 mL于反应瓶小杯中(为了增加氢氧化钾对二氧化碳的吸收面积，在氢氧化钾溶液中插入一小片滤纸)。反应瓶中先加入磷酸盐缓冲液1.1 mL，肝匀浆液1.0 mL，然后加供试品0.2 mL于反应瓶中。
由于肝匀浆本身有耗氧作用，故试验时以磷酸盐缓冲液0.2 mL代替供试品，作空白管。将装好的反应瓶按管号与测压计相连(注意密闭，勿使漏气)置37 ℃恒温水浴中。开动振荡器10 min(120次/分)使反应瓶内外温度一致，将测压计右侧液面调至150 mm，记下左侧液面读数(A)。关闭三向活塞，开始计时，反应30 min将测压计右侧液面调至150 mm，记下左侧液面读数(B)。重复二次，记下读数C和D。实验过程中必须附加一套供校正用的稳压计，在反应瓶中先加与试验液相同体积的磷酸盐缓冲液，使其在与试验管完全相同的条件下，观察压力的变化(△C)，以消除由于温度及大气压的影响而引起的误差。
计算方法
QO2(μlO2/mg·h)={[(A-B)+(C-D)]×K1-△C×K2}/(G·T)
K1：供试品或对照品的反应瓶常数
G ：每mL肝匀浆干重(105 ℃恒重)(mg)
T ：反应时间(小时)
K2：稳压计组反应瓶常数：
ΔC:稳压计组压力变化之和。
刺激指数(SI) = 供试品QO2/空白QO2
本品刺激指数(SI)应不小于3.0。
1.4 统计学处理
实验所得数据以±s表示，应用SPSS统计软件11.5进行单因素方差分析及q检验，P&<0.05具有显著性意义，P&<0.01具有极显著性意义。
2 结 果
2.1 活性炭对小牛血去蛋白注射液吸光度值的影响
标准曲线见图1。
图1 蛋白质含量标准曲线 不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，吸光度值均有明显下降;活性炭的加入量越多，吸光度值下降越明显，第2、3组与第1组相比，P&<0.01，第4组与第3组相比P&>0.05，结果见表1。
2.2 加入活性炭后对小牛血去蛋白注射液多肽含量的影响
不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，多肽含量均有明显下降;活性炭的加入越多，多肽含量下降越明显，第2、3组与第1组相比，P&<0.01，第4组与第3组相比P&>0.05，结果见表1。
2.3 加入活性炭后对小牛血去蛋白注射液氨基酸含量的影响
不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，各组氨基酸含量没有明显变化，无统计学意义。结果见表1。
2.4 加入活性炭后对小牛血去蛋白注射液氨基酸含量的影响
不同量的活性炭加入后，与未加活性炭组相比，各组氨基酸含量没有明显变化，无统计学意义。结果见表1。
表1 活性炭对小牛血去蛋白注射液吸光度值
3 讨 论
活性炭作为一种制药企业中常用的脱色剂及吸附剂，被广泛地应用，以前大家仅关注活性炭可以吸附有色物质，使吸光度值下降。我们的实验发现：活性炭加入到小牛血清去蛋白提取液中后，不仅使提取液颜色变浅，吸光度值下降，起到脱色作用，同时吸附了小牛血清去蛋白提取液中多肽，使其蛋白质含量下降。但并未影响其氨基酸的含量及呼吸活性。因此，通过本实验建议在使用活性炭进行脱色时，也应选择合适的浓度，否则可能会引起蛋白质含量的降低。
参考文献
[1] 国家执业药师资格考试应试指南. 药剂学[M].北京：中国医药科技出版社，2000：107.
[2] 沈曾民，张文辉，张学军，等.活性炭的制备与应用[M].北京：化学工业出版社，2006：314.
[3] 国家药典委员会.药典中国药典2005年版附录[M].北京：化学工业出版社，2005:1