作者：丛芳圆 崔洁 刘新兰 陈萍
【摘要】 目的 探讨P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和肺耐药蛋白 (LRP)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化方法检测126例未经抗肿瘤治疗的原发性乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的表达情况。结果 乳腺癌组织中P-gp、BCRP和LRP均有较高表达， P-gp表达与腋窝淋巴结状况、肿瘤大小和根治术后5年内复发转移呈正相关(P&<0.05) ，BCRP表达与腋窝淋巴结转移呈正相关(P&<0.01) ，LRP表达与各临床病理因素间无相关性(P&>0.05)。结论 乳腺癌组织中P-gp、BCRP的表达与乳腺癌的侵袭转移密切相关，可作为乳腺癌预后评估指标， LRP虽在癌组织中高表达，但不能作为判断乳腺癌生物学行为的指标。
【关键词】 乳腺癌;P-糖蛋白;乳腺癌耐药蛋白;肺耐药蛋白
多药耐药(Multidrug Resistance，MDR)的出现成为乳腺癌化疗失败的重要原因之一，也是困扰肿瘤治疗的关键性难题。人们通过对乳腺癌耐药机制的研究，发现P-糖蛋白(P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)和肺耐药蛋白 (LRP)在乳腺癌组织中的高表达与MDR密切相关。本研究通过对126例乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP表达情况的检测，分析其与乳腺癌临床病理因素间的关系，为乳腺癌治疗方案的制定和预后的评估提供依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2002年1月-2007年12月于本院经手术治疗、病理证实的女性乳腺癌患者126例，全部患者术前均未行放化疗等抗肿瘤治疗。年龄27～73岁，中位年龄47.5岁。依据WHO乳腺肿瘤组织学分类法：浸润型癌103例，非浸润型癌23例。腋淋巴结转移者66例，无转移者60例。
1.2 方法 所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，进行HE和SP法免疫组化染色。所加一抗分别为鼠抗人P-gp单抗、BCRP单抗和LRP单抗。所用试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司和美国PTGLAB公司。
1.3 结果评定标准 阳性判断用半定量分析，同时对染色强度及阳性细胞所占百分比进行评分。P-gp、BCRP及LRP阳性染色皆为棕色，P-gp及LRP阳性表达定位于胞浆或胞膜，BCRP阳性表达定位于胞核。染色强度按无色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分评分;阳性细胞所占百分比按阴性0分，阳性细胞≤25% 1分， 26%～50% 2分，51%～75% 3分，&>75% 4分评分，染色强度与阳性细胞百分比的积分相加，0～1分为(-)，2～3分为(±)，4～5分为(+)，6～7分为(++);(-)和(±)判为阴性，(+)和(++)判为阳性。
1.4 统计学方法 采用SPSS 11.5统计分析软件进行统计分析，实验数据采用相关分析及logistic多因素回归分析，P&<0.05为差异有统计学意义。
1.5 随访情况 126例患者中42例为2007年1月-2007年12月收集的新鲜标本，随访截止日期至2009年1月，随访84例，失访8例，随访率90.47%。
2 结果
2.1 乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的阳性表达率 126例乳腺癌组织中三者的阳性表达率分别为41.26%(52/126)、38.89%(49/126)、65.87%(83/126)，即LRP的阳性表达率最高。
2.2 乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的表达和临床病理特征的关系
2.2.1 乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的表达和临床病理特征的相关性 P-gp阳性表达与腋窝淋巴结转移及肿瘤大小呈正相关(r分别为0.283、0.187，P均&<0.05) ;BCRP表达与腋窝淋巴结转移呈正相关(r为0.369，P&>0.01);三者表达均与病理类型无相关性(P&>0.05，见表1)。表1 乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的表达和临床病理特征的关系与腋窝淋巴结转移阴性相比*P&>0.05，**P&>0.01
2.2.2 乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的表达与临床病理特征的logistic多因素分析 分别以P-gp、BCRP和LRP为应变量，临床病理指标为自变量，分析结果示，腋窝淋巴结转移与P-gp和BCRP的表达相关(均P&>0.01)，见表2、3。表2 乳腺癌组织中P-gp表达的logistic多因素分析表3 乳腺癌组织中BCRP表达的logistic多因素分析
2.3 乳腺癌组织中P-gp、BCRP、LRP的表达与术后复发转移的关系 随访到的76例患者中可评价患者71例(5例确诊时即为IV期患者)，采用CAF化疗方案治疗后，5年内复发转移者39例，P-gp、BCRP、LRP阳性表达率分别为58.97%(23/39)、35.89%(14/39)和71.79%(28/39)，复发转移和未复发转移者比较，P-gp阳性表达率差异有统计学意义(P&<0.01)，BCRP及LRP阳性表达率在两组中差异无统计学意义(P&>0.05)，见表4。表4 P-gp、BCRP及LRP的表达与复发转移的关系
3 讨论
MDR是指肿瘤细胞一旦对一种抗肿瘤药物产生耐药，就可对非同一类型的多种结构、细胞靶点和作用机理迥然不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性。MDR的产生成为化学治疗失败的一个主要原因[1]。
人多药耐药基因家族包括MDR1和MDR2，由MDR1基因表达的 P-gp是一种能量依赖性药物泵，P-gp在乳腺癌组织中的表达率约为43.29%～89.3%[2-4] ，本研究显示P-gp阳性表达率为41.26%，与Rybarova[2]研究报道相似。同时发现乳腺癌组织中P-gp阳性表达与腋窝淋巴结转移状况及肿瘤大小呈正相关，logistic多因素分析表明腋窝淋巴结转移状况与P-gp的表达呈正相关，即肿瘤体积越大、腋窝淋巴结阳性者多见P-gp阳性表达，而与病理类型无相关性，与王晔等[2，5]报道一致。本研究患者术后采用CAF方案化疗，在随访的71例患者中，5年内出现复发转移者P-gp阳性表达率为58.97%，与5年内未出现复发转移者比较，差异有统计学意义。表明P-gp阳性表达者，腋窝淋巴结转移率增加，预后差，对CAF化疗方案不敏感，更易发生复发转移，提示P-gp的表达水平可以作为乳腺癌侵袭的标志，是乳腺癌患者判定预后的指标。
BCRP是由Doyle等[6] 在1998年首先从乳腺癌细胞中分离出来的一种新的ABC转运蛋白，王蓓[7]研究结果表明BCRP在乳腺癌组织蛋白水平中存在一定量的表达。本实验检测BCRP蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.89%。王麟[8]研究表明BCRP表达与患者病理类型、临床分级及淋巴结转移无关，而本实验结果显示，BCRP表达与腋窝淋巴结转移呈正相关，logistic多因素分析表明腋窝淋巴结转移状况与BCRP的表达相关。腋窝淋巴结转移是目前已确立的乳腺癌患者预后不良的指标，因此表明BCRP的表达可能与肿瘤发生、发展有关，BCRP阳性者侵袭性更强，更易发生淋巴结转移，预后差，可能会成为判断乳腺癌患者预后的指标之一。
LRP由荷兰学者Scheper等[9]于1993年首次报道，发现LRP基因与黏菌和褐鼠中编码穹隆体蛋白(major vault protein，MVP)的基因高度同源，推断LRP即人的MVP。Rybarova[2]研究结果显示87例乳腺癌组织中LRP的阳性表达率为79%。本研究结果显示其阳性表达率为65.87%。但其表达与临床病理特征及5年内复发转移均无相关性，与王文静[10]等研究一致，提示LRP可能为人的MVP，存在于乳腺细胞中，虽有较高的阳性表达率，但不宜作为判断乳腺癌的恶性程度和病情进展程度的指标。
综上所述，乳腺癌组织中P-gp、BCRP的表达与乳腺癌的侵袭转移密切相关，可能成为乳腺癌预后不良的指标，LRP虽在乳腺癌组织中高表达，但不能作为判断乳腺癌生物学行为的指标。因此在临床实践中，我们可以通过测定乳腺癌组织中P-gp、BCRP的表达，制定合理的治疗方案，避免多药耐药性的产生，从而达到理想的治疗效果。
参考文献
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[10] 王文静，王明玉.LRP与MRP在乳腺癌组织中的表达及意义[J]. 山东医药，2007，47(20)：4-6.