作者：孙磊， 陈靖， 王晶， 张立明， 权洪峰， 张彩芳
【摘要】 目的建立丹参酚酸B的HPLC含量测定方法，比较不同品种丹参中丹参酚酸B含量。方法 采用RP-HPLC方法测定丹参酚酸B含量。结果 标准曲线方程y = 981230 x - 342049 (r= 0.999 0)，表明丹参酚酸B在11.96 ～ 29.9 mg·mL-1线性良好，日内精密度小于1%，日间精密度小于2%，重现性试验RSD%为1.95%(n= 3)，平均加样回收率为99.8%。测得不同品种丹参中丹参酚酸B含量分别为：红参3.92%(RSD = 0.49%，n= 3)，一窝团5.52%(RSD = 0.49%，n= 3)，系参7.64%(RSD = 0.49%，n= 3)。结论 RP-HPLC方法测定丹参酚酸B含量简便可靠，可做为微量样本丹参中丹参酚酸B含量的快速测定方法;不同品种丹参中丹参酚酸B含量差异较大，系参含量最高，比红参高了近2倍，具有较高的商业价值。
【关键词】 丹参;丹参酚酸B;HPLC
丹参为唇形科植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎，性微寒，味苦，具有活血化瘀、凉血、宁心等功效，主治月经不调、跌打损伤、经闭痛经等症[1] 。丹参一般使用方法为水煎，故水溶性成分应为丹参发挥疗效的主要成分，丹参酚酸B则是丹参中含量最高的水溶性成分[2-3]，因此丹参酚酸B含量可做为丹参质量的重要考察指标之一。本论文采用RP-HPLC-UV方法，建立了微量样本中丹参酚酸B含量快速测定方法，并比较了三个丹参品种红参、一窝团、系参中丹参酚酸B的含量差异，为提高中药材种植质量提供借鉴。
1 材料与方法
1.1 主要试药
乙腈、甲酸为色谱纯(天津康科德科技有限公司);提取用甲醇为分析纯(天津康科德科技有限公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团)。丹参酚酸B(实验室自制，经HNMR、CNMR、2D-NMR鉴定为丹参酚酸B，纯度98%以上)。
1.2 主要仪器
Laballiance Series Ⅲ高效液相色谱仪(LabAlliance，USA);Laballiance As1000自动进样器(LabAlliance，USA);Laballiance model 500紫外检测器(LabAlliance，USA);HT-230A Colunm Heater(沈阳天美达科学仪器有限公司);Ezchrom Elite Client/server 色谱工作站(USA);FA1004N万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多国际股份有限公司);Hs3120D超声波清洗器(天津恒奥)。
1.3 药材
一窝团、红参、系参新鲜根茎购于河北安国，阴干，粉碎过200目筛，备用。
1.4 实验方法
1.4.1 色谱条件 色谱柱：Scienhome Kromasil-C18(250 mm × 4.6 mm，5 μ);流动相：乙腈-甲酸-水(体积分 数为26∶1∶73)，流速1.0 mL·min-1;检测波长：286 nm;柱温：30℃;进样量：20 μL。
1.4.2 对照品溶液的制备 精确称取丹参酚酸B对照品0.0299 g置于10 mL容量瓶中，流动相定容至刻度，精密移取丹参酚酸B对照品溶液0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 、1.8 和2.0 mL，定容至2 mL容量瓶，备用。
1.4.3 样品溶液的制备 精密称取各品种丹参样品0.3 g，置于三角瓶中，各加流动相10 mL，精密称定，超声提取20 min。分别用溶剂补到原质量，过滤，定容至5 mL容量瓶，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
1.4.4 标准曲线的制备 不同浓度丹参酚酸B对照品溶液置于自动进样器中，分别注入液相色谱仪中，以峰面积积分值(A)对质量浓度(ρ)进行线性回归，得到线性回归方程。
1.4.5 精密度考察 取不同浓度标准品，分别于1、3、5和7h测定丹参酚酸B的峰面积，计算日内精密度;取2个浓度标准品，分别于1、2、3d测定峰面积，计算日间精密度。
1.4.6 重现性实验 精密称取3份丹参样品各0.3g，按1.4.3项下样品溶液配备方法，测定样品中丹参酚酸B含量，计算RSD%。
1.4.7 加样回收率 精密称取5份丹参样品各0.1g，加入等体积丹参酚酸B对照品溶液，按1.4.3项下样品制备方法，测定含量，计算加样回收率(%)。
1.4.8 含量测定 取不同品种丹参样品各0.3g，按1.4.3项下操作，制备样品溶液。随行两个浓度标准品，采用外标两点法计算丹参酚酸B的含量(%)。
2 结果
2.1 标准曲线的绘制 标准品及样品色谱图如图1所示，得到回归方程为y = 981230 x-342049(r= 0.999 0)，表明丹参酚酸B在11.96 ～ 29.9 mg·mL-1范围内线性良好。
2.2 精密度
2.2.1 日内精密度 结果见表 1，RSD%均小于1%。表1 日内精密度
2.2.2 日间精密度 结果见表2，RSD%小于2%。
2.3 重现性实验
计算RSD为1.95%(n=3)。
2.4 加样回收率
结果见表3，加样回收率在95%～105%之间，符合要求。
2.5 含量测定
不同品种丹参样品中丹参酚酸B含量测定结果 见表4。表2 日间精密度表3 加样回收率表 4 不同品种丹参样品中丹参酚酸B含量
3 讨论
不同品种的丹参中丹参酚酸B的含量差别很大，其中以系参的含量最高，可达7%以上。因此，在引种的过程中，快速确定高含量丹参酚酸B的品种来进行栽培，可有效提高药材的栽培质量。
微量样本含量测定方法的建立，为植物生长过程中追踪有效成分含量奠定了基础，方法简便可靠，超声提取时间短，效率高，是一种较为理想的微量样品的快速含量测定方法。
参考文献
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京：化学工业出版社，2005：52.
[2] 李政雄，顾文华，黄彗珠. 丹参中水溶性酚酸成分的研究 [J]. 药学通报，1981，16(9)：24-28.
[3] 杜冠华，张均田. 丹参水溶行有效成分——丹酚酸研究进展[J]. 基础医学与临床， 2000，20(5)：10-14.