作者：樊艳茹，朱新宁，马学琴，董琳，张新慧，付雪艳
【摘要】 目的优化伏毛铁棒锤中总生物碱的最佳提取工艺条件。方法采用L9(34)正交设计实验优化最佳提取工艺。结果总生物碱最佳提取工艺条件为10倍量0.1%盐酸，提取2次，每次3h。结论本方法适用于伏毛铁棒锤中总生物碱的提取，所得最佳提取工艺高效、可行，测定结果准确可靠。
【关键词】 伏毛铁棒锤;总生物碱;提取工艺;优化
[Abstract]ObjectiveTo optimize extraction process for total alkaloids in the Acontium flavum Hand-Mazz.MethodsThe optimal extraction process was realized by orthogonal experimental design. The Ultraviolet spectrophotometry method was utilized to determinate the total alkaloid content in Acontium flavum Hand-Mazz.ResultsThe optimal extraction method was as follows: 10 times amount of the 0.1% acid，extraction twice and 3 hours every extraction process.ConclusionThe proposed method is suitable for the extraction of total alkaloids in Acontium flavum Hand-Mazz. The optimal extraction process is efficient and feasible，and the determination results were accurate and credible.
[Key words]Acontium flavum Hand-Mazz; Total alkaloid; Extraction process; Optimization
铁棒锤为毛茛科植物铁棒锤(Aconitum pendulum Busch)和伏毛铁棒锤(Acontium flavum Hand-Mazz)的干燥块根，伏毛铁棒锤以其块根入药，味苦辛，性热，有大毒，具活血祛瘀、祛风湿、止痛、消肿败毒、去腐生肌、止血，治疗跌打损伤、风湿性关节炎、腰腿痛、劳伤、恶疮、痈肿、无名肿毒、冻疮、毒蛇咬伤等作用[1]，为陕、甘、宁等地区应用较广的一种民间草药[2]。关于伏毛铁棒锤制备工艺的研究，文献多集中在伏毛铁棒锤生药的炮制工艺上[3-5]，只有少数研究报道了提取工艺研究[6]，但工艺考察较简单。本研究通过提取产于宁夏六盘山地区伏毛铁棒锤中生物碱类成分，采用正交设计实验优化确定最佳提取工艺，使提取物通过阳离子交换树脂，得到有效部位中除去杂质后的总生物碱样品溶液，并用紫外分光光度法对伏毛铁棒锤中总生物碱的含量进行测定，为伏毛铁棒锤中总生物碱的提取工艺改进提供准确可靠、可供参考的实验依据。
1材料与方法
1.1仪器：
紫外-可见分光光度计(日本岛津，UV-2550)，电子分析天平( 日本岛津，Libror AEU-210)，中药材粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司，FW100型 )，旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂，RE-52A)，超声波清洗仪(昆明市超声仪器有限公司，KQ-500B )，电热恒温水浴锅(北京长源实验设备厂，HH.SYII-NiZ-C)，循环水式多用真空泵 (郑州长城科工贸有限公司，SH13-Ⅲ)。
1.2材料：
所用试剂与试药均为分析纯，乌头碱购自中国药品生物制品鉴定所。药材伏毛铁棒锤购自宁夏固原市隆德县六盘山区，经宁夏医科大学生药学教研室鉴定为伏毛铁棒锤(Acontium flavum Hand-Mazz)。无水乙醇、95%乙醇、蒸馏水、37%盐酸、25%氨水、甲醇均为分析纯，由宁夏医科大学药学院药学实验中心提供。
1.3方法：
总生物碱的提取，称取20g伏毛铁棒锤(晒干，经粗粉碎后)，置圆底烧瓶中，以正交实验所需工艺条件为依据进行提取。提取液经732型阳离子交换树脂吸附后，用10%-15%的氨水洗脱，再以25%的氨水洗脱，边洗脱边用碘化铋钾溶液检测，至反应呈淡黄色即为洗脱完毕。收集洗脱液，直到所得的提取液近干为止，以甲醇：蒸馏水(1：1)混合溶液溶解并定容在50 ml容量瓶中，即为所得的总生物碱供试品提取溶液。总生物碱含量的测定，即按照紫外-可见分光光度法(2005年版中国药典一部附录ⅤA)，于波长272 nm处测定吸光度，以乌头碱为对照品，用外标法进行总生物碱的定量分析[7]。本实验采用L9(34)正交设计实验法优化最佳提取工艺。
2结果
根据预实验结果，选用0.1% HCl 提取法作为伏毛铁棒锤总生物碱的提取方法。分别考察提取时间1-3h，提取次数1-3次，加0.1% HCl 的量8-12倍对提取总生物碱得率的影响，采用正交设计实验对提取工艺进行优化，利用L9(34)正交表进行实验。因素水平：提取时间分别为1、2、3 h，提取次数分别为1、2、3次，加酸水量分别为8、10、12倍。正交实验结果见表1，提取工艺方差分析见表2。表1正交试验结果 表2提取工艺方差分析由以上方差分析结果表明，提取时间对总生物碱提取量影响最大;其次是提取次数，因素影响顺序为B &> C &>A，结合直观分析结果得最佳工艺条件为A2B3C2，即10倍量0.1%酸水提取2次，每次提取时间为3h。
3讨论
以总生物碱为指标的正交实验结果表明，最优方案为A2B3C2，即10倍量0.1%盐酸酸水提取2次，每次3h。3个因素中影响最大的是时间，其次是提取次数。初步推测其原因可能是由于冷浸提取法需要较长的时间使得有效成分在药材与提取液之间达到浓度平衡所致，因此提取时间越长越好。而随着提取次数的增加，总生物碱的提取量却是先增后减，其原因可能是由于提取次数过多后，酸水的总量太多稀释了全部的总生物碱提取液，在提取液处理的过程中也会导致总生物碱更多的损失。因此，在提取过程中应严格控制提取工艺条件。
本实验对伏毛铁棒锤中总生物碱成分的提取方法和最佳提取工艺进行了考察优化。我们选用0.1% HCl 提取法作为伏毛铁棒锤总生物碱的冷浸提取方法，此法所用仪器及试剂均廉价易得，提取成本低，特别适合于实验条件普通的实验室作业，为目前经济较落后的宁夏南部地区深入广泛利用好伏毛铁棒锤药材提供了工艺基础。本实验结果表明，此方法准确、可靠，为伏毛铁棒锤的质量评价提供了可靠实验依据。
参考文献
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[2]李满，杨浩，康建宏，等. 宁夏濒危药用植物铁棒锤的资源利用与保护[J].宁夏农林科技，2007(1)：43-44.
[3]王毓杰，张静. 民族药铁棒锤炮制减毒原理初步研究[J].中国中药杂志，2010，35(5)：588-592.
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[6]刘世巍，刘立红，杨敏丽，等.正交设计法优化伏毛铁棒锤根中总生物碱的提取工艺[J].安徽农业科学，2008，36(21)：9116-9117.
[7]付雪艳，董琳，权洪峰，等.铁棒锤总生物碱的含量测定[J].科技论坛，2007(8)：476