关于p57kip2和cyclin D2在人脑胶质瘤中的表达和临床意义

【摘要】 　　目的： 探讨p57kip2蛋白和Cyclin D2蛋白在人脑胶质瘤中的表达情况及其临床意义. 方法：　采用免疫组织化学SP法检测p57kip2， Cyclin D2在55例人脑胶质瘤和10例正常脑组织中的表达. 结果： 在55例胶质瘤中，p57kip2蛋白阳性率为38.2%(21/55)，低于正常脑组织(80%，P&<0.05). 低度恶性(I～II级)与高度恶性(III～IV级)间及不同生存时间组间阳性率差异有统计学意义(P&<0.05). Cyclin D2蛋白阳性率为52.7%(29/55)，高于正常脑组织(0%，P&<0.01). 脑胶质瘤不同恶性程度组间阳性率差异有统计学意义(P&<0.05)，不同生存时间组间差异无统计学意义（P&>0.05）. p57kip2蛋白的表达与Cyclin D2蛋白的表达无相关(P&>0.05). 结论： p57kip2蛋白和Cyclin D2蛋白在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用. 且与肿瘤的分化程度，预后相关.
【关键词】 p57kip2蛋白；Cyclin D2蛋白；神经胶质瘤；免疫组织化学
　　【Abstract】 AIM: To investigate the expressions of p57kip2 and cyclin D2 proteins in human glioma and their clinical significances. METHODS: The expressions of p57kip2 and cyclin D2 proteins in glioma tissues from 55 patients and normal brain tissues of 10 subjects were detected with SP immunohistochemical technique. RESULTS: The positive rate of p57kip2 protein in glioma tissues was 38.2% (21/55)， lower than that in normal brain tissues (80%， P&<0.05)， and it was statistically different between low and highgrade malignant gliomas (III vs IIIIV) and between different length of survival time (P&<0.05). The positive rate of cyclin D2 protein was 52.7% (29/55)， higher than that in normal brain tissue (0%， P&<0.01)， and it was significantly correlated with the grade of malignance (P&<0.05)， but not with the twoyear survival time (P&>0.05). The expression of p57kip2 protein was found not related to the expression of cyclin D2 protein (P&>0.05). CONCLUSION: Both p57kip2 and cyclin D2 proteins play important roles in the genesis and development of human glioma. Furthermore， their expressions are correlated with the differentiation and prognosis of the glioma.
　　【Keywords】p57kip2 protein; cyclin D2 protein; glioma; immunohistochemistry
　　0引言
　　近来研究表明，细胞周期调控异常与细胞癌变密切相关. 并有人认为肿瘤可能是细胞周期疾病(Cell cycle diseased)，使细胞周期调控异常与肿瘤的关系成为肿瘤学研究的热点问题［1］. 新近发现的p57kip2是细胞周期G1/S期的重要调控因子，与多种肿瘤的发生、发展有关［2-3］. 但p57kip2蛋白的表达与脑胶质瘤的关系以及p57kip2蛋白与Cyclin D2蛋白在脑胶质瘤发生发展中的关系目前尚不清楚，本文拟应用免疫组织化学技术，探讨蛋白p57kip2， Cyclin D2在脑胶质瘤组织和正常脑组织中以及不同生存期的脑胶质瘤组织中的表达和意义.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　西安交通大学医学院第二附属医院2002/2004手术存档55例脑胶质瘤石蜡标本，均经病理诊断证实. 男28例，女27例，年龄4～71（平均40.1）岁，生存时间&<2年31例，≥2年24例. 根据2000年修改的WHO神经系统肿瘤分类标准，对所有肿瘤进行组织学分类和分级： I级12例，II级17例，III级18例，IV级8例. 另10例正常对照脑组织取自我院因颅脑损伤行内减压术的患者. 所有患者均未经过放化疗. 鼠抗人p57kip2单克隆抗体(NeoMarkers公司，1∶400) ，鼠抗人Cyclin D2 单克隆抗体（Cell signaling公司，1∶50），广谱SP试剂盒购自深圳晶美生物技术有限公司.
1.2方法采用链酶素抗生物素过氧化物酶连接法(SP法)检测蛋白表达. 每次试验以PBS代替一抗作为空白对照，由试剂公司提供阳性对照片. 实验操作按试剂盒说明书进行. p57kip2蛋白以胞核染色为棕褐色颗粒者为阳性反应细胞，Cyclin D2蛋白以胞核或胞浆染色为棕褐色为阳性反应细胞. 400倍显微镜下每张载玻片计数500个细胞，依据染色阳性细胞数，计算阳性细胞所占百分比：阴性：&<10 %（-）；弱阳性：10 %～25 %为(+)；阳性：26 %～50 %为()；强阳性：&>50 %为( ).

　　统计学处理：应用SPSS 11.5统计软件进行分析. 用χ2检验、校正χ2检验，Spearman等级相关分析，P&<0.05有统计学差异.
　　2结果
　　2.1p57kip2，Cyclin D2蛋白在脑胶质瘤中的表达
　　p57kip2在人脑胶质瘤中的蛋白阳性着色主要定位于细胞核，但在胞核和胞浆中均有表达. Cyclin D2在人脑胶质瘤中的蛋白阳性着色主要定位于细胞浆，但在胞核和胞浆中均有表达（图1，表1） .表1p57kip2和Cyclin D2在脑胶质瘤和正常脑组织中的表达(略)
　　2.2p57kip2与Cyclin D2表达之间的关系
　　脑胶质瘤中p57kip2与Cyclin D2的表达无相关性(rs =-0.075， P&>0.05，表2). 表2p57kip2和Cyclin D2在脑胶质瘤中表达（略）
　　3讨论
　　本研究显示，脑胶质瘤中p57kip2表达阳性率低于正常脑组织(P&<0.05)，提示p57kip2蛋白的表达缺失与脑胶质瘤分化程度有关，p57kip2在人脑胶质瘤发生、发展过程中起重要作用，并且其作用强度主要决定于p57kip2蛋白表达水平的改变. 在包括对肝癌的多种肿瘤的研究中发现［4-7］，p57kip2蛋白表达下降与肿瘤患者预后差有关，可作为一独立预后指标，但在人脑胶质瘤中尚未见报道. 本研究中，p57kip2蛋白阳性表达组与p57kip2蛋白阴性表达组患者两年生存率差异有统计学意义(P&<0.05)，提示p57kip2蛋白的表达与脑胶质瘤的预后有关，可能成为预测预后的指标之一.

　　Cyclin D2基因位于人染色体12p13区位，是一类细胞周期正性调节蛋白，其产物Cyclin D2蛋白与CDK4/6形成活性复合物，Cyclin D2/CDK4/6参与G1期和S期的pRb磷酸化作用，能加速S期，对DNA复制的启动十分重要. 现有研究发现，Cyclin D2 在多种肿瘤中被过度表达，其中包括胰腺癌、子宫癌、乳腺癌、胃癌等［8-10］. 赵明等［11］实验发现，正常脑组织中无Cyclin D2 的表达，而各病理等级的脑胶质瘤中均存在cyclin D2 表达，并随肿瘤恶性程度增高而升高，低恶性度胶质瘤(I，II级)和高恶性度胶质瘤(III， IV级)之间广泛存在统计学差异，这提示
cyclin D2在胶质瘤中发挥重要的正性调控作用.
　　细胞增生周期中，p57是一负性调节信号，Cyclin D2是一正性调节信号，二者共同作用于细胞周期G1/S期节点. 本研究提示p57kip2蛋白的表达缺失与Cyclin D2蛋白的过表达可能通过不同的机制分别促进G1/S期的进展，导致脑胶质瘤的发生. 对p57kip2和cyclin D2的生物学功能及其机制不完全清楚，但现有研究结果已经初步显示出其与肿瘤的发生与发展存在着密切联系. 深入研究p57kip2蛋白与Cyclin D2蛋白在脑胶质瘤的发生、发展中的作用机制，不仅能够加深对细胞周期网状调节机制的理解，而且将为脑胶质瘤的治疗提供新的思路.
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