关于胃癌组织ezrin表达的意义

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　　　　　　　　 作者：张俊会　刘斌　邢传平　高自芳　董亮　哈英娣　钱震

【摘要】 　　目的： 研究ezrin基因与胃癌发生发展的关系. 方法： 采用原位杂交和免疫组化法，检测60例胃癌和15例正常及40例不典型增生胃黏膜中ezrin mRNA及蛋白的表达. 结果： 在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中ezrin mRNA及蛋白阳性表达率呈递减趋势. 组间差异性均有统计学意义(P&<0.001); ezrin mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、肿瘤大小和有无淋巴结转移组内表达率的差异性有统计学意义(P&<0.05)， 而在年龄、性别和脉管侵犯组内差异无统计学意义(P&>0.05). Ezrin mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.990， P&<0.01). 结论： Ezrin表达降低与胃癌的发生、发展及浸润转移有密切关系.
【关键词】 胃肿瘤；ezrin基因；原位杂交；免疫组织化学
　　【Abstract】 AIM: To study the relationship between ezrin gene and the generation and development of gastric carcinoma. METHODS: The expressions of ezrin mRNA and protein were respectively detected by immunohistochemistry and in situ hybridization in normal gastric mucosa (n=15)， atypical gastric hyperplasia (n=40) and gastric carcinoma (n=60). RESULTS: The positive rates of ezrin mRNA and protein in normal gastric mucosa， gastric hyperplasia and gastric carcinoma were gradually decreased， and statistical differences among the 3 groups were remarkably significant (P&<0.001). The expressions of ezrin mRNA and protein were related to the malignant progression of gastric carcinoma， tumor diameter and lymph node metastasis (P&<0.05)， but they were not significantly correlated with patients age， gender and vessel invasion (P&>0.05). In addition， the expression of ezrin mRNA was positively correlated with ezrin protein (rs=0.990， P&<0.01). CONCLUSION: The decreased expressions of ezrin mRNA and protein play an important role in the development of gastric carcinoma.
　　【Keywords】 stomach neoplasms; ezrin gene; in situ hybridization; immunohistochemistry
　　0引言
　　Ezrin属于ERM蛋白家族， 其在肿瘤转移过程中是否发挥主要作用， 目前尚不得而知. 但ezrin参与多种肿瘤转移已被大量实验证实［1-2］. 我们用原位杂交和免疫组化技术检测ezrin mRNA及蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中的表达及其相互关系，以探讨ezrin表达的调控层次及其与胃癌发生、发展和浸润转移的关系.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　200503/200602病理科存档石蜡包埋标本.不典型增生胃黏膜40例，包括轻度16例，中度14例， 重度10例. 胃癌60例， 年龄26~75（中位年龄54）岁，其中高分化腺癌12例， 中分化腺癌20例， 低分化腺癌15例， 黏液腺癌13例; 淋巴结转移阳性31例， 阴性29例; 有脉管侵犯10例， 无脉管侵犯50例. 所有标本术前均未行放疗和化疗， 同时取距离肿瘤组织&>5 cm的胃黏膜15例作为正常对照. Ezrin鼠抗人抗体及免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司. Ezrin mRNA寡核苷酸探针:从GenBank中检索ezrin 基因全序列 (Locus: BC_068458， 3083 bp， mRNA)， 选取该序列143~172作为靶位点， 使用Oligo软件设计探针， 由上海生工生物技术服务有限公司合成.
　　1.2方法
　　采用免疫组化SP法， ezrin抗体稀释度为1∶100， DAB显色， 苏木素复染. 以PBS缓冲液代替一抗作空白对照. 阳性信号为棕黄色， 定位于胞膜和胞质. 原位杂交:整个操作均在无RNA酶的环境中按常规进行， 组织切片经二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化， 37℃下蛋白酶消化30 min， 在无水乙醇中脱水10 s， 每张切片上滴加一滴探针溶液， 盖上盖玻片， 37℃过夜. TBS浸泡去掉盖玻片， TBS洗片3×3 min. 加2~3滴地高辛抗体37℃作用30 min. TBS浸泡3 min. DAB显色， 苏木素复染. 杂交阳性信号为棕黄色颗粒， 定位于细胞质. 以TBS缓冲液代探针作阴性对照. Ezrin mRNA阳性表达在胃癌细胞胞质内， DAB显色， 呈棕黄色颗粒， 其蛋白免疫组化染色位于细胞膜与细胞质内， 呈棕黄色. 按染色强度和阳性表达细胞数来判定结果.
　　统计学处理：使用SPSS 10.0统计软件进行统计分析，采用χ2检验及Spearman等级相关分析，P&<0.05认为有统计学意义.
　　2结果
　　2.1胃组织ezrin mRNA和蛋白的表达
　　Ezrin mRNA在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞质中表达信号为阳性(图1A)， 其阳性表达率呈递减趋势， χ2检验组间差异性有统计学意义(χ2=23.599， P&<0.01); 其蛋白在胞膜和胞质中表达阳性(图1B)， 阳性表达率在三组间亦呈递减趋势， 组间差异性有统计学意义(χ2=27.186， P&<0.01， 表1). 表1胃黏膜组织ezrin mRNA和蛋白的表达（略）
　　2.2Ezrin表达与临床生物学行为的关系
　　经χ2检验，ezrin mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、肿瘤大小及有无淋巴结转移组内表达率的差异性有统计学意义(P&<0.05， 表1)， 而在年龄、性别和脉管侵犯组内差异无统计学意义(P&>0.05). Spearman等级相关分析显示ezrin mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.990， P&<0.01).
　　3讨论
　　Ezrin是一种细胞骨架连接蛋白，活化的ezrin C端与肌动蛋白细胞骨架连接， N端与多种跨膜分子结合，从而形成专门的膜区域结构， 调节细胞活动如生存、黏附、迁移等， 这些活动在肿瘤发展和进程中均非常重要. 正常卵巢上皮ezrin强表达，而在卵巢癌组织中ezrin表达下调，且ezrin的无表达和弱表达胃腺癌.

转贴于 　与卵巢癌患者不良预后相关［3-4］. 而Wan等［5］在鼠骨肉瘤模型中发现， 通过转染反义ezrin或siRNA阻断ezrin的表达或转染氨基末端显性负相的ezrin破坏其功能都能显著的减少鼠的肺转移. Shen等［6］在研究食管上皮细胞癌时发现， 能发生转移的细胞系Sheemt与不能发生远处转移的细胞系Sheemt相比，其ezrin表达水平显著高于后者.
　　
　　体外细胞培养表明， ezrin的缺失与肿瘤的运动能力和侵袭性增加有关， 并可影响细胞表面的黏附分子而促进肿瘤的浸润转移［7］. 我们应用原位杂交和免疫组化两种技术对ezrin mRNA与蛋白进行检测， 旨在从转录和翻译水平探讨ezrin基因表达与胃癌发生发展及生物学特征的关系. Ezrin mRNA和蛋白在正常胃黏膜﹑不典型增生胃黏膜﹑胃癌中阳性表达率逐渐降低， 且组间差异性有统计学意义. 在胃癌不同浸润深度、肿瘤大小及有无淋巴结转移组内表达率的差异性亦有统计学意义. 两种检测方法结果一致， 说明在胃癌的发生发展中ezrin基因在转录水平上有ezrin mRNA的低表达， 同时在蛋白水平上ezrin也低表达， 两者呈平行关系. 提示ezrin蛋白表达降低的调控发生在转录水平， 可能有基因的变异存在. 但ezrin mRNA表达阳性率略低于其蛋白的表达，分析其原因可能与组织固定剂及固定时间有关. 本实验结果与Kobel 等［8］报道的ezrin表达水平较低时， 肿瘤细胞的浸润受到抑制不符. 可能的机制是某些涉及ezrin磷酸化激活的机制失调， 导致了ezrin功能增强从而使肿瘤细胞吞噬及转移能力增强， 这也说明ezrin在肿瘤转移过程中的作用机制较为复杂.

参考文献

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　　［2］张俊会，刘斌，邢传平，等. ezrin， cMet及ICAM1在胃癌组织的表达及其意义［J］. 第四军医大学学报， 2007，28(4):303-306.

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　　［5］Wan X， Mendoza A， Khanna C， et al. Rapamycin inhibits ezrinmediated metastatic behavior in a murine model of osteosarcoma ［J］. Cancer Res， 2005， 65(6): 2406-2411.

　　［6］Shen ZY， Xu LY， Chen MH， et al. Upregulated expression of Ezrin and invasive phenotype in malignantly transformed esophageal epithelial cells［J］. World J Gastroenterol， 2003， 9(6):1182-1186.

　　［7］卢航青，郑杰. 埃兹蛋白:生物学特征及其在肿瘤转移中的作用［J］. 细胞生物学杂志，2005，27:257-262.

　　［8］Kobel M， Gradhand E， Zeng K， et al. Ezrin promotes ovarian carcinoma cell invasion and its retained expression predicts poor prognosis in ovarian carcinoma ［J］. Int J Gynecol Pathol， 2006， 25(2):121-130.