关于自发性高血压大鼠下丘脑视上核和室旁核γ adducin表达的增龄改变及高盐摄入的影响

论文代写网： 【摘要】 目的：观察自发性高血压大鼠(SHR)下丘脑视上核和室旁核γadducin表达的增龄变化， 以及高盐摄入的影响. 方法：将60只SHR按年龄分幼年组（5 wk），成年组(25 wk)，老年组(49 wk)，每组20只， 测各年龄组SHR尾动脉收缩压；各年龄组随机分为两亚组，分别给予正常盐饮食和高盐饮食喂养3 wk；复测血压比较各年龄组正常盐 (9 g/L NaCl)和高盐(40 g/L NaCl)喂养后收缩压的变化； SHR大脑灌注取材，应用免疫组化SABC染色检测SHR下丘脑视上核和室旁核γadducin的增龄性表达及高盐喂养的影响. 结果： SHR血压随着年龄增加呈递增趋势(P&<0.01)，高盐喂养能明显升高这种增龄性改变(P&<0.01). 下丘脑视上核和室旁核中γadducin的灰度值均随年龄增长呈递增趋势，即γadducin的表达均随年龄增长呈递减趋势. 各年龄段内高、正常盐亚组间比较，下丘脑视上核和室旁核中γadducin的表达均无统计学差异（P&>0.05）. 结论： SHR血压随着年龄的增长呈逐渐升高趋势，下丘脑视上核和室旁核γadducin表达随年龄增长均呈递减趋势， 高盐干预对大鼠下丘脑视上核和室旁核γadducin表达无明显影响.
【关键词】 自发性高血压大鼠 视上核 室旁核 adducin 增龄性 盐
　　0引言
　　高血压是一种遗传和环境相互作用所致的疾病. Adducin作为一种钙调蛋白结合蛋白，参与细胞膜结构的维持和细胞膜离子转运，特别是细胞膜Na+的转运. 盐与高血压的关系一直是人们关注的焦点，大量研究发现，细胞膜结构及功能改变所导致的离子转运缺陷与信号转导异常可能是高血压病(尤其是盐敏感性高血压)的发病机制之一［1］. 在盐敏感性与高血压之间，adducin可能起着联系环境(盐)与遗传的桥梁作用. 研究证明，中枢神经系统尤其下丘脑视上核（supraoptic nuclei， SON）和室旁核（paraventricular nuclei， PVN）在血压的调控中发挥重要作用［2］. 我们采用免疫组化技术，以不同年龄段的自发性高血压大鼠（SHR）作为动物模型，观察下丘脑SON和PVN中γadducin表达的增龄变化， 以及高盐摄入的影响.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　5， 25， 49 wk龄雄性SHR（第四军医大学实验动物中心提供）各20只，各年龄段随机分为高、正常盐两个亚组，每组10只. 实验期间自由饮水，饲料为西安交通大学医学院动物实验中心提供的混合饲料，高盐组饲料含40 g/L普通加碘盐，正常盐组饲料含9 g/L普通加碘盐， 喂养3 wk. 饲养条件温度18～25℃，相对湿度45%～65%. 兔抗鼠γadducin抗体（SC25733）由美国Santa Cruz Biotechnology公司提供，生物素标记的羊抗兔抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供.
　　1.2方法
　　各年龄组SHR预适应1 wk后应用鼠尾血压计检测尾动脉收缩压（SBP）. 正常或高盐饮食喂养3 wk后， 复测血压比较各年龄组SHR正常盐和高盐喂养后SBP的变化. 各年龄组SHR处死大脑灌注取材，根据大鼠大脑立体定位图谱自前囟后0.8， 2.3 mm脑组织连续冠状切片，结合Nissle染色定位下丘脑SON和PVN. 应用免疫组化染色（SABC法）检测γadducin在SHR下丘脑SON和PVN中的增龄性表达及盐摄入对其表达的影响. 利用图像分析系统对免疫组化染色强度进行定量分析. 高倍镜下，选3个视野，测定每个视野的阳性物质的灰度值.
　　统计学处理: 所有数据采用SPSS 11.5软件进行统计分析. 计量资料以x±s表示， 采用方差分析及LSDt检验. P&<0.05认为差异具有统计学意义.
　　2结果
　　2.1盐对SHR血压的影响
　　在成年组和老年组盐负荷后收缩压水平较正常盐喂养的均显著性升高（P&<0.01），但在幼年组，盐负荷后较正常盐喂养的收缩压水平无统计学差异(P&>0.05， 表1).表1盐干预对SHR收缩压的影响（略） 转贴于 　　2.2增龄和盐负荷对下丘脑SON和PVN中γadducin的表达的影响
　　SHR下丘脑SON中γadducin的灰度值随年龄增长呈递增趋势，即其蛋白表达呈递减趋势. 在正常盐喂养情况下，γadducin的表达在老年组与幼年组、老年组与成年组均有统计学差异（P&<0.05）， 而成年组与幼年组间比较无统计学差异（P&>0.05）. 在高盐干预后，γadducin的表达在老年组与幼年组之间比较亦有统计学差异（P&<0.05），而老年组与成年组间、成年组与幼年组比较无统计学差异（P&>0.05）. SHR下丘脑PVN中γadducin的灰度值随年龄增长呈递增趋势，即其蛋白表达呈递减趋势. 无论正常盐喂养，还是盐负荷后，老年组与幼年组、老年组与成年组之间均有统计学差异（P&<0.05），而成年组与幼年组之间比较无统计学意义（P&>0.05， 表2）. 各年龄组内高盐亚组与正常盐亚组间比较，下丘脑SON和PVN中γadducin的表达均无统计学差异(P&>0.05， 表2). SHR下丘脑中SON和PVN的γadducin表达均随年龄的增长而逐渐减少，而盐负荷对其无明显影响(图1).表2增龄和高盐对SHR下丘脑SON和PVN中γadducin表达的影响(略)
　　3讨论
　　本研究我们观察到雄性SHR下丘脑SON中γadducin表达存在增龄性改变，表现为随着周龄的增加其表达逐渐降低，盐负荷对这种改变无明显影响. 结果提示γadducin增龄性表达减少可能是SHR血压随周龄增加而升高的因素之一. 流行病学研究和临床观察显示，不仅高血压的发病率随年龄的增加而增加，而且血压对钠盐的反应亦呈明显的年龄相关性. 我们的追踪研究结果显示， 随着年龄的增加， 盐负荷后的血压增高幅度逐渐增大，盐敏感者的检出率明显增加［3］. Bianchi等［4］发现，米兰高血压大鼠（MHS）的膜骨架蛋白adducin基因存在点突变（A亚单位基因：F316Y，B亚单位基因：Q529R），将这种突变基因转染给正常米兰高血压大鼠（MNS），其肾小管上皮细胞钠泵表达活性显著增加（296%）； Cusi［5］在意大利和法国两个不同的人群中发现，аadducin基因多态性与高血压有明显的相关并参与钠代谢的调节，但我们对中国高血压人群的研究发现，аadducin基因的上述多态性在盐敏感者与盐不敏感者之间、高血压与正常血压者之间无明显差别［6］，这表明adducin基因多态性存在着种族差异性. Hong等［2］用基因芯片技术对SHR和WKY大鼠的下丘脑和脑干进行分析后发现有112个基因在两者之间存在明显差异，其中一个重要的基因就是γadducin. 我们发现下SHR下丘脑SON和PVN中γadducin表达均随年龄的增长呈递减趋势，盐负荷对这种改变无明显影响.

【参考文献】
　　［1］刘治全，牟建军，孙超峰，等. 盐与高血压 ［M］. 北京：协和医科大学北京医科大学联合出版社， 1997: 211-216.

　　［2］Hong Y， Sharon CF， Katleen S， et al. Hypertensionlinked decrease in the expression of brain γadducin［J］. Circ Res， 2002， 91(10):633-639.

　　［3］刘治全，李玉明，牟建军，等. 青少年血压水平、趋势、变异性及其与生长发育的关系：8年随访研究［J］.高血压杂志，1996， 4（4）：89-92.

　　［4］Bianchi G， Tripode G， Casari S， et al. Two point mutations within the adducin genes are involved in blood pressure varition［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 1994， 91（21）:3999-4003.

　　［5］Cusi D. Ploymorphyisms of а1adducin and salt sensitivity in patients with essential hypertension［J］. Lancet， 1997， 349(12): 1353-1357.

　　［6］候嵘， 刘治全， 孙超峰， 等. 盐敏感者细胞膜骨架蛋白adducin α1亚单位基因变异的研究［J］. 中华心血管病杂志， 2000， 28（5）: 389-398.