作者：姚奇健 何韶衡 林小平
【关键词】 花粉症；类胰蛋白酶；白细胞介素8；白细胞介素12；嗜酸性粒细胞趋化因子；肥大细胞
【Abstract】 AIM：To investigate the correlations between plasma levels of tryptase， interleukin8 (IL8)， interleukin12 (IL12) and eotaxin in the patients with grass pollinosis in summer and autumn and their clinical significances. METHODS：A total of 37 patients with grass pollinosis and 23 healthy controls were recruited into the study. Plasma tryptase levels were determined by Unicap Tryptase fluoroimmunoassay. The levels of IL8， IL12 and eotaxin were detected by double sandwich ELISA method. RESULTS：The plasma level of IL8 was significantly increased in the patients with pollinosis as compared with healthy controls (t=2.56， P&<0.05). In contrast， the plasma level of IL12 was significantly decreased in the patients with pollinosis as compared with the healthy controls (P&<0.05). But the levels of tryptase and eotaxin had no significant differences between the patients and the volunteers (P&>0.05). The significant correlations were only between IL8 and IL12 （P&<0.01） and between IL8 and eotaxin (P&<0.05). CONLUSION: Occurrence of pollinosis is related to many inflammatory cells including mast cells and inflammatory mediators. The downregulation of Th1 cytokines may contribute to the pathogenesis of pollinosis.
【Keywords】 pollinosis；tryptase；interleukin8；interleukin12；eotaxin；mast cell
【摘要】 目的: 检测夏秋季花粉症（pollinosis）患者血浆类胰蛋白酶（Tryptase）， IL8，IL12和嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平，探讨其临床意义. 方法: 夏秋花粉症患者37例，正常对照23例. 采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）检测IL8， IL12和嗜酸性粒细胞趋化因子水平， Unicap系统检测血浆类胰蛋白酶. 结果: ①花粉症患者血浆IL8水平明显高于对照组（t=2.56，P&<0.05）;②患者血浆IL12水平明显低于对照组（P&<0.05）；③患者血浆Tryptase和Eotaxin水平与对照组无显著差异（P&>0.05）;④患者血浆Tryptase，IL12和Eotaxin三者之间无相关性（P&>0.05），Tryptase与IL8也无相关性（P&>0.05），而IL8与IL12间存在显著负相关（P&<0.01），IL8与Eotaxin间存在明显正相关(P&<0.05). 结论: 花粉症的发生与肥大细胞及多种炎症细胞、炎症介质有关，其发病亦与Th1细胞下调机制有关.
【关键词】 花粉症；类胰蛋白酶；白细胞介素8；白细胞介素12；嗜酸性粒细胞趋化因子；肥大细胞
0引言
花粉症（pollinosis），又名枯草热（hayfever），是指一组因接触变应原花粉而引起的呼吸道和眼部过敏症状的疾病，其临床症状的发生发展与花粉的播散季节密切相关［1］，多种炎症细胞及其分泌的介质均参与花粉症的发生机制［2］. 夏秋季导致过敏的花粉以草木类为主，在我国则以蒿草和豚草最为常见［3］. 我们对该类患者血浆特异性IgE（sIgE）、类胰蛋白酶（Tryptase）、IL8， IL12及嗜酸性粒细胞趋化因子（Eotaxin）水平做了检测，以了解这些炎性因子在夏秋花粉症患者体内的作用.
1对象和方法
1.1对象入选37（男21，女16）例患者均为200407/200408于沈阳军区总医院变态反应门诊就诊患者. 年龄（37.8±11.4）岁，病程2~31 a. 另选健康者（对照组）23（男13，女10）例，年龄（39.8±13.3）岁. 诊断标准：①典型的夏秋季（6~10 mo）发作的变应性鼻炎、结膜炎或哮喘的临床症状、病史和体征；②变应原皮肤点刺实验：蒿草和豚草其中任何一项SI≥++，其他吸入性变应原如：尘螨、猫毛、狗毛、真菌、蟑螂、树类花粉SI≤+；③血清蒿草、豚草特异性IgE（sIgE）抗体阳性(≥ 0.35 Kual/L)，或阴性，但SI≥；④各入选者均无免疫治疗史(表1).
表1花粉症患者的一般情况（略）
F：女性；M:男性；R:鼻炎；A:哮喘.
1.2方法①皮肤点刺实验：皮试方法及阳性判断参阅参考文献［3］. 应用ALKABELLO公司（丹麦）提供的12种常见吸入性变应原皮内点刺液进行检测，包括：屋尘螨、粉尘螨、猫毛、狗毛、蟑螂、蒿草、豚草、牧草、树类花粉、真菌类I、真菌类II. 以0.1 g/L磷酸组胺及生理盐水分别作为阳性及阴性对照. ②样本采集：分别抽取患者及对照者静脉血10 mL，立即置入含EDTA的试管中混匀抗凝，4℃，2000 r/min，离心15 min，收集血浆，-20℃冷藏备用. ③血浆sIgE检测：采用Pharmacia公司(瑞典)CAP系统Unicap100荧光酶联免疫(RAST FEIA)法检测，具体操作及结果判断依据仪器说明. sIgE 1级以上（即＞0.35 kual/L）为阳性结果. ④细胞因子检测：Tryptase于Unicap100系统中检测，试剂由Pharmacia公司提供. IL8(BD公司， 敏感度4 ng/L)， IL12（BD公司，敏感度4 ng/L）， 及Eotaxin（RD公司， 敏感度0.5 ng/L）采用双抗夹心ELISA测定. 一切操作严格按照试剂盒说明进行， 采用酶标仪（Molecular Devices， 340PC型）以450 nm读盘.
统计学处理： 数据以x±s表示， 用SPSS 13.0统计学软件包进行皮试等级间均数比较的方差分析以及LSDt检验，并对指标间进行相关性分析.
2结果
2.1夏秋花粉症患者皮试结果及血浆sIgE水平的比较依蒿草和豚草两种变应原的皮试结果（-～），将全部受试者分别分成4组，比较患者之间和患者与正常人的血浆sIgE水平(表2).
表2花粉症患者和正常人血浆sIgE水平比较（略）
bP&<0.01 vs对照组；dP&<0.01 vs 组；eP&<0.05， fP&<0.01 vs 组.
2.2夏秋花粉症患者与健康对照者血浆类胰蛋白酶、IL8， IL12， 嗜酸性粒细胞趋化因子水平比较花粉症患者血浆IL8水平明显高于健康对照组，差别有统计学意义（t=2.56，P&<0.05）. 花粉症患者血浆IL12水平低于健康对照组，差别有统计学意义（t=-2.02，P&<0.05）. 而患者血浆Tryptase水平和Eotaxin水平与对照组间则无明显差异（t=0.5，P&>0.05，表3).
表3花粉症患者和正常人血浆类胰蛋白酶，IL8，IL12，嗜酸性粒细胞趋化因子（略）
aP&<0.05 vs对照.
2.3夏秋花粉症患者血浆类胰蛋白酶、IL8，IL12和Eotaxin绝对值的相关性夏秋花粉症患者血浆Tryptase， IL12和Eotaxin三者之间彼此无相关性，Tryptase与IL8也无相关性，而IL8与IL12间存在显著负相关（r=-0.506， P&<0.01），IL8与Eotaxin间存在显著正相关(r=0.401， P&<0.01).
3讨论
近年的研究表明，肥大细胞在过敏性炎症中起了多重作用. 肥大细胞在过敏性哮喘和鼻炎的患者体内可以分泌Th3型细胞因子，诱导B细胞IgE的表达和分泌，通过肥大细胞IgEFcεR1的级联反应机制被激活， 分泌出一系列前炎症性因子，可上调内皮细胞和成纤维细胞的细胞因子和化学因子的表达. 此外，肥大细胞还可以诱导中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、T细胞、嗜酸性粒细胞在过敏性炎症局部的募集［4］. 用草类花粉作为变应原在非花粉季节刺激花粉症患者的鼻黏膜，黏膜层的肥大细胞的数目可在刺激后1 h后迅速增多，在受刺激后的1wk后才回到基线［5］. 类胰蛋白酶是肥大细胞被高亲和力受体FcεR1激活后分泌的特异性中性蛋白酶，可视为肥大细胞活化的标志［6］. 类胰蛋白酶能诱导中性粒细胞、嗜酸性粒细胞浸润［7］、持续性增加微血管通透性［8］、刺激上皮细胞释放IL8，上调细胞间黏附分子的表达［9］. 国外的其他研究表明，类胰蛋白酶在花粉症鼻黏膜局部表达增强［10］. 但我们的研究发现，花粉症血浆中的类胰蛋白酶水平与正常人无差异，推测可能是类胰蛋白酶仅在炎症局部起作用，进入血液循环量较少.
嗜酸性粒细胞趋化因子具有诱导嗜酸性粒细胞在炎症局部募集的作用，变应性鼻炎患者鼻腔灌洗液中可发现Eotaxin水平的增高［14］. 本实验中，花粉症血浆Eotaxin水平与对照组无差别，提示Eotaxin可能也是主要在炎症局部起作用. 而Eotaxin水平与Tryptase水平无相关性，表明肥大细胞不是Eotaxin的唯一来源. 但Eotaxin的水平却与IL8成呈正相关关系，推测除了肥大细胞外，Eotaxin和IL8还有共同的来源，可能是来自活化的上皮细胞.
近年来，Th1/Th3细胞因子失衡在过敏性疾病的发病机制中的作用得到广泛关注. 本实验室其它研究［15］发现，花粉症发作期血浆IFNγ明显降低，并与IL4呈明显负相关， 证实Th1/Th3失衡在花粉症的发病机制中可能起一定作用. IL12是Th1类细胞因子，可调节TH1/Th3平衡，在本实验中被列入了研究范围. 在动物模型中，IL12能与IL18协同作用抑制Th3型细胞的发生发展，减少IgE的产生，降低气道高反应性，减少气道灌洗液中炎症细胞的渗出. 本实验结果显示，IL12在花粉症体内明显下降，破坏了Th1/Th3细胞因子的平衡，对花粉症发病机制有促进作用. 而IL8与IL12水平呈负相关，意味着Th1细胞的下调可能促进IL8的分泌，加剧局部炎症的发展.
【参考文献】
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