血必净对大鼠外伤性脑损伤后血清S100B和IL6水平的影响

　　　　　　作者：袁雪松， 卞晓星， 戚传平

【摘要】 目的： 探讨血必净对大鼠外伤性脑损伤的神经保护机制。方法： 将40只健康成年雄性SD大鼠随机分成4组：正常对照组、血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组。采用改进的Feeney氏法制作大鼠自由落体脑创伤模型。伤后第6小时、第24小时、第3天、第5天、第7天断尾采血，运用双抗体夹心ELISA方法检测各组治疗后血清中S100B蛋白和白细胞介素6（interleukin6，IL6）的含量。结果： 与正常对照组相比，血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组血清中S100B蛋白和IL6的含量均显著升高（P&<0.001）；与生理盐水组相比，血必净治疗组和胞二磷胆碱治疗组血清中S100B蛋白和IL6的含量显著降低（P&<0.001）；与胞二磷胆碱治疗组相比，血必净治疗组血清中S100B蛋白和IL6的含量显著降低（P&<0.05）。结论： 血必净可能通过抑制脑外伤后S100B和IL6的合成与分泌，降低全身和局部的炎症反应程度，从而发挥神经保护作用。

【关键词】 血必净；大鼠; 外伤性脑损伤；S100B；白细胞介素6

　　［Abstract］ Objective: To explore the neuroprotective mechanisms of Xuebijing on rats after traumatic brain injury. Methods： Forty healthy adult male SpragueDawley rats were randomly devided into 4 groups: normal control， Xuebijing， nicholin and saline groups. The model was made by improved Feeney′s traumatic brain injury model. Serum samples were collected at 6h， 24h， 3d， 5d， 7d after trauma. The serum S100B protein and IL6 content of each group after treatment was detected with double antibody Sandwich ELISA. Results： Compared with the normal control group， the serum S100B protein and IL6 content significant difference in Xuebijing， nicholin and saline groups(P&<0.001); compared with the saline group， the serum S100B protein and IL6 content significantly lower in Xuebijing and nicholin groups(P&<0.001); compared with the nicholin group， the serum S100B protein and IL6 content significantly lower in Xuebijing group(P&<0.05). Conclusion： Inhibition of the composition and secretion of S100B protein and IL6 by Xuebijing might be one of the mechanisms in decreasing inflammatory reaction systemic and local， and this may be how Xuebijing exerts its neuroprotective effect on traumatic brain injury.

　　［Key words］ Xuebijing; rats; traumatic brain injury; S100B; interleukin6

　　外伤性脑损伤除了原发伤外，更为重要的是以局部炎症反应为主的继发性脑损害。机械力的损伤导致炎性细胞因子如S100B蛋白和IL6的大量产生。血必净为中药制剂，主要拮抗内毒素和炎症介质。以往的研究多集中于拮抗内毒素反应方面［1，2］，关于拮抗炎症介质的研究较少。尤其在脑外伤方面更少，所查文献中尚未见到血必净与炎性细胞因子S100B蛋白和IL6相互作用方面的报道。本研究运用双抗体夹心ELISA方法对运用血必净治疗的外伤性脑损伤大鼠血清S100B蛋白和IL6的含量进行连续性检测，旨在探讨血必净对大鼠外伤性脑损伤炎症反应的保护机制。

1 材料与方法

　　1.1 材 料

　　血必净由天津红日药业股份有限公司提供，大鼠S100B蛋白和IL6 ELISA试剂盒购自英基生物科技有限公司(美国生产)。

　　1.2 实验动物及分组

　　健康成年雄性SD大鼠40只，体质量（300±20）g，由江苏大学实验动物中心提供。随机分为正常对照组、血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组。正常对照组4只，其余每组12只。血必净治疗组于脑外伤后立即腹腔注射血必净(4 ml/kg)，此后每12小时1次，共注射10次。生理盐水组和胞二磷胆碱治疗组于伤后立即经腹腔分别注射生理盐水和胞二磷胆碱，胞二磷胆碱剂量为100 mg/kg。各组注射容量相同，生理盐水组和胞二磷胆碱治疗组每24小时注射1次，共注射6次。

　　1.3 动物模型的建立

　　采用改进的Feeney氏法［3］制作自由落体脑挫伤模型。0.35%戊巴比妥钠溶液30 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，俯卧位固定头部，矢状切开头皮，显露左顶骨，运用牙科钻在冠状缝前1 mm，中线旁左1 mm钻一小孔，扩大骨窗成3 mm×3 mm，显露完整硬膜。打击器下端直径2.0 mm，下陷深度控制为2.0 mm，运用砝码自由落体打击器打击硬膜，造成左侧大脑额叶脑挫伤。砝码自由下落所形成的冲击能量为20×50 g·cm。打击完毕后，缝合头皮。

　　1.4 标本的采集及检测

　　各组大鼠均在伤后第6小时、第24小时、第3天、第5天、第7天断尾采血，每次采血约1 ml。常温下3 500 r/min离心15 min后取上清液，-20℃冻存。分别使用大鼠S100B蛋白定量双抗体夹心ELISA试剂盒和大鼠IL6蛋白定量双抗体夹心ELISA试剂盒检测血清中S100B蛋白和IL6的浓度。

　　1.5 统计学分析

　　采用SPSS10.0统计分析软件，数据以±s表示，运用方差分析进行组间比较，以P&<0.05为有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 外伤性脑损伤后血清S100B蛋白含量的变化

　　与正常对照组相比，血必净治疗组、胞二磷胆碱治疗组和生理盐水组血清中S100B蛋白含量均显著升高（P&<0.001）；与生理盐水组相比，血必净治疗组和胞二磷胆碱治疗组血清中S100B蛋白的含量显著降低（P&<0.001）。生理盐水组血清S100B蛋白浓度在伤后立即升高，并在第24小时达到高峰，此后缓慢下降，并保持较高水平。胞二磷胆碱治疗组中血清S100B蛋白浓度在伤后升高缓慢，第3天达到高峰，随后快速下降，短时间内降至较低水平。而血必净治疗组中血清S100B蛋白浓度升高缓慢，升幅很小，高峰出现在第3天，随后即下降至较低水平，与胞二磷胆碱治疗组相比，P&<0.05。各组血清S100B蛋白含量的变化见表1。

　　2.2 外伤性脑损伤后血清IL6含量的变化

　　与正常对照组相比，生理盐水组血清IL6含量在伤后立即升高，并在第3天达到高峰，此后缓慢下降，并保持较高水平（P&<0.001）。与生理盐水组相比，各组均有显著差别（P&<0.001）。胞二磷胆碱治疗组血清IL6含量在伤后升高极为缓慢，峰值在第5天，随后逐渐下降。血必净治疗组中血清IL6含量在伤后升高迅速，升幅较大，高峰出现较早，在第24小时达到峰值，但峰值明显低于其他两组，且随后的下降幅度亦较其他两组大，与胞二磷胆碱治疗组相比，P&<0.01。各组血清IL6含量的变化见表2。表1 各组大鼠血清S100B蛋白浓度的变化 表2 各组大鼠血清IL6浓度的变化±s， pg/ml

3 讨 论

　　外伤性脑损伤占全身创伤发生率的第2位，但死残率则处于第1位［4］，是临床常见的致死性疾病之一，对人类健康危害极大。外伤性脑损伤后继发性脑损害的机理十分复杂，其本质主要是一系列炎性细胞因子所介导的炎症反应，导致神经细胞结构破坏、代谢紊乱、功能丧失。S100B蛋白是一种酸性钙结合蛋白，在中枢神经系统主要由星形神经胶质细胞分泌。脑组织损伤后，星形胶质细胞过多释放S100B蛋白，从而刺激自身和小胶质细胞产生大量致炎因子［5］。而IL6是免疫及炎症的重要调节因子，广泛参与机体的炎症反应。在中枢神经系统内IL6主要由神经胶质细胞合成和分泌，特别是星形胶质细胞和小胶质细胞。在脑组织损伤后，IL6的表达会明显增加［6］。近年来，有研究已经证实颅脑损伤后S100B蛋白和IL6在局部和全身均有明显升高，持续时间较长，且两者在脑脊液和血清中的升高程度与脑组织受损程度成正比［7-10］。这充分说明S100B蛋白和IL6在颅脑损伤的继发性脑损害阶段参与了炎症反应的介导。

　　本研究显示对照组大鼠在脑外伤后血清S100B蛋白和IL6含量均在早期明显升高，升幅较大，且一直保持在较高水平，下降缓慢。S100B蛋白的高峰在伤后24小时，而IL6的高峰在伤后第3天，两者经过7天仍未降至正常水平。这些结果说明S100B蛋白和IL6在脑外伤后早期即参与了炎症反应的介导，加重继发性脑损害。

　　血必净是在古方血府逐瘀汤的基础上，以“菌、毒、炎并治”的理论为指导研制而成的水溶性溶液，由天津红日药业股份有限公司生产，其主要成分有川芎、赤芍、丹参、红花等，上述药物合用具有清热凉血、行气活血、解毒止痛之功效，多应用于全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症及多器官功能障碍综合征(MODS)等疾病。其分子生物学作用机制可能为［11-14］：①减轻组织细胞的氧耗， 使细胞保持在一个相对较低的能量代谢水平，减轻病灶组织的酸中毒；②抑制白三烯、氧化亚氮和去甲肾上腺素等的生成和释放，减少血管内皮细胞收缩，保持血管壁的完整性；③减少钙离子内流防止钙超载， 阻断钙对细胞的毒性作用。

　　本实验研究结果显示血必净治疗组能明显抑制神经胶质细胞分泌S100B蛋白，减少血清中S100B蛋白的含量，减轻脑外伤后脑组织的早期炎症反应。另一方面，血必净治疗组在降低S100B蛋白的同时，还能明显降低血清中IL6的含量，与对照组相比具有显著统计学意义。同时发现， 血必净的作用比疗效肯定的阳性对照胞二磷胆碱治疗组作用更大。

　　综上所述，血必净可能通过在脑外伤后抑制S100B蛋白和IL6的合成和分泌，减轻炎性反应和继发性脑损害，从而起到神经保护的作用。本研究结果为血必净用于临床治疗外伤性脑损伤提供了很有价值的实验依据。

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