关于充血性心力衰竭老年患者中性粒细胞膜脂流动性与心功能状况的关系

　　　　　　　　 作者：唐发宽，华宁，肖军，张同欣，陆宏，王龙

【摘要】 　　目的： 观察中性粒细胞膜脂流动性(LFU)在充血性心力衰竭(CHF)中的变化及其与心功能状况的相关性. 方法： 选择CHF患者40例，正常对照者30例，用荧光分光光度计偏振技术测定外周血中性粒细胞LFU. 结果： CHF组中性粒细胞LFU低于正常对照组（P＜0.01)；心功能越差，LFU越低，随着心功能的改善而逐渐升高（P＜0.05）. 结论： 中性粒细胞LFU可能参与了CHF的病理过程，在一定程度上反映了心力衰竭程度.
【关键词】 心力衰竭 ，充血性；膜脂流动性；中性粒细胞
　　【Abstract】 AIM: To explore the changes of membrane lipid fluidity (LFU)of neutrophils and its relationship with heart function in the patients with congestive heart failure (CHF). METHODS: Retrospective study was carried out .The membrane LFU of neutrophils in the peripheral blood of 40 patients with CHF and 30 controls were determined by fluorescence polarization analysis. RESULTS: The LFU of neutrophils in CHF was significantly lower than that in the controls（P&<0.01）. The worse the cardiac function，the lower the LFU value of neutrophils. The LFU increased gradually with the improvement of cardiac function（P&<0.05). CONCLUSION: The LFU of neutrophils in peripheral blood may play some roles in the pathophysiology of CHF，which may reflect the severity of CHF to some extent.
　　【Keywords】 heart failure， congestive; lipid fluidity; neutrophils
　　0 引言
　　细胞膜是细胞功能的重要调节器，而细胞膜脂流动性（1ipid fluidity， LFU）是细胞膜的重要生物物理特征，它与膜功能或细胞功能的调节密切相关，近年来已发现许多因素均可影响LFU，一些疾病的病理发生发展过程也与LFU有关［13］. 我们应用荧光分光光度计偏振技术测定中性粒细胞LFU，旨在探讨老年充血性心力衰竭(congestive heart failure， CHF)患者外周血中性粒细胞LFU改变的特点和规律性、与病情程度的关联性及其临床意义.
　　1 对象和方法
　　1.1 对象
　　CHF组40（男27，女13）例，平均年龄73.6岁，其中风心病4例，冠心病24例，扩张性心肌病7例，高血压性心脏病5例. 根据NYHA心功能分级标准，II级6例、III级10例、IV级24例. 正常对照组30（男19，女11）例，平均年龄65.6岁. 经询问病史，体格检查及各项辅助检查正常者. 所有受试者均无糖尿病及血液病.
　　1.2 方法
　　1.2.1 标本采集
　　所有标本均为肘静脉血. 采血时间： 正常组在空腹时，CHF组在入院后24 h内作为第l日血标本，在入院后第3，7，14，21日时取血.
　　1.2.2 中性粒细胞DPH标记
　　取受试者抗凝血3 mL，采用Perco11(Pharmacia公司)密度梯度法分离中性粒细胞［4］，台盼兰测活为98%，将中性粒细胞悬液2 mL (1×109/L )加入DPH(1，6二苯基1，3，5已三烯，美国Sigma公司)为荧光探剂，置于37℃水浴30 min，待测.

　　1.2.3 中性粒细胞LFU 的测定
　　全部样本用F4000型日立荧光分光光度计测定. 测定条件是：激发波长（EX）330 nm，发射波长（EM）424 nm. 起偏器和检偏器光轴均在垂直方向测得的荧光强度为IV，起偏器光轴在垂直方向，检偏器光轴在水平方向测得的荧光强度为I h. 根据下列公式分别计算偏振度{Ｐ＝（Iv－Ih）/（Iv＋Ih）}、微粘度（η＝（2P/（0.46-P））和膜脂流动性值（ＬＦＵ＝（Ｐ最大值/Ｐr-11）/Pr），其中0.46为常数，P最大值为0.5，Pr为P实测值，且每次操作均严格控制在同一温度（24℃）下进行.
　　统计学处理： 全部数据以x±s表示，组间均数比较采用方差分析及LSDt检验，P&<0.05表示差异有统计学意义.
　　2 结果
　　2.1 外周血中性粒细胞ＬＦＵ在CHF患者中的变化
　　CHF组中性粒细胞LFU值（25.025土3.200），与正常对照组（77.957土6.624）相比较，差异有统计学意义（P&<0.01）. 从中性粒细胞LFU分布所见，两组差异明显，仅有少量重叠，40例CHF患者38例外周血中性粒细胞LFU值&<50（敏感度为95.0％），30例正常人中26例外周血中性粒细胞LFU值&>50（特异度为86.7%）.
　　2.2 不同心功能组间比较
　　心功能越差，外周血中性粒细胞LFU降低越明显，各级心功能组间经方差分析差异有统计学意义（P&<0.01，表1）.
表1不同心功能外周血中性粒细胞LFU的变化（略）
　　2.3 不同时间中性粒细胞LFU的变化
　　对CHF患者入院后1，3，7，14，21 d不同时间的中性粒细胞LFU的观察，LFU随着住院时间延长呈上升趋势，在病程第7日时中性粒细胞LFU值有统计学意义（P&<0.05），21 d时其差异有统计学意义（P&<0.01，表2）. 表2CHF患者不同时间外周血中性粒细胞LFU的变化（略）
　　2.4 心脏病病因对中性粒细胞LFU的影响
　　本研究将四种CHF患者的病因和心功能等级的计数资料制成R×C列联表，作x2的关联性检验，结果提示四组的中性粒细胞LFU值无统计学差异（P＞0.05），表明其心脏病病因与心功能等级这个标识间无关联（P＞0.05）.
　　3 讨论
　　LFU是细胞膜脂基于分子运动而具有易于流动的性质，它对于细胞的形态、物质运输、酶活性以及受体活性等均有影响. 研究病理状态下的膜功能、膜物理性质的改变与功能的关系，有助于在分子水平上阐明和解释疾病的发生和发展机制. 结果表明，CHF患者中性粒细胞LFU较正常人明显降低，提示中性粒细胞LFU参与了CHF的病理过程. 中性粒细胞LFU降低的直接原因尚不明确，可能与心力衰竭时氧自由基(OFR)的产生和消除失衡以及出现脂质过氧化有关［5］. 心衰时心肌缺血缺氧，释放花生烯酸并代谢合成前列腺素、白三烯等物质，使中性粒细胞趋化、聚集和脱粒作用增强，同时体内产生某些化学趋向因子，如补体C5， C5a趋化肽、免疫复合物等，再加上缺血心肌的能量水平下降致Ca2+进入细胞内［6］激活钙依赖性蛋白水解酶，黄嘌呤、次黄嘌呤增多，同时细胞的线粒体细胞色素氧化酶活性下降，NADH得不到氧化，以及心力衰竭患者自身抗氧化酶系统对自由基的清除能力降低，导致OFR大量形成［7-8］，故体内脂质过氧化反应增强［9］，进而损伤细胞膜，细胞LFU降低；

LFU反映细胞的变形能力，中性粒细胞LFU的降低必然提示其变形能力的降低，故使中性粒细胞黏附堆积于毛细血管内，形成小栓子，并释放各种活性物质，如血小板激活因子、溶血酶等，进一步加重微循环血流障碍［10］导致组织的缺血损伤；心肌组织的缺血缺氧可导致中性粒细胞在缺血区聚集，并出现“呼吸爆发”，而产生大量的活性氧，导致心肌结构损伤，同时消耗大量能歧化氧自由基的超氧化物歧化酶（SOD）［11］，上述变化的直接后果使心肌细胞膜完整性遭到破坏，影响心肌的收缩及舒张功能，降低左室压力上升速率和心收缩指数，增加左室舒张末压［6］，从而减少心排出量. 本研究发现，在CHF患者发病后不同时间，随着心力衰竭的逐步纠正和心功能逐渐改善，中性粒细胞LFU值呈上升趋势；不同心功能组间的比较，心功能IV级的中性粒细胞LFU值明显低于II， III级（P&<0.05），提示中性粒细胞LFU在反映心力衰竭的程度上有一定的意义. 从心脏病病因看，本组患者的心脏病因与心功能恶化程度之间无关联，CHF患者外周血中性粒细胞LFU的降低也与病因无明显关系，但尚需进一步探讨.

参考文献

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