关于子宫内膜异位症患者血清和腹腔液VEGF测定及其诊断价值

【摘要】 目的： 测定子宫内膜异位症(EMT)患者血清和腹腔液VEGF（血管内皮生长因子）水平，并探讨它的诊断价值. 方法： 采用RIA的方法测定34例EMT患者和15例非EMT患者(对照组)血清和腹腔液中VEGF的含量，并与RAFS评分进行相关性分析. 结果： 两组间体质量指数差异均无显著性(P&>0.05)，EMT组血清VEGF蛋白水平显著高于对照组(ng/L， 463±64 vs 52±30， P&<0.05). EMT组腹腔液VEGF极高于对照组（ng/L， 1630±82 vs 142±73， P&<0.01). 轻度及重度EMT患者血清和腹腔液VEGF水平均明显高于对照组，重度组又较轻度组明显升高（ng/L，376±59 vs 589±76， P&<0.05)和（ng/L， 1201±95 vs 1822±112， P&<0.05). EMT患者血清和腹腔VEGF水平与RAFS评分间均呈直线正相关关系. 结论： EMT患者血清和腹腔液VEGF水平明显升高并随疾病的严重程度而上升，尤其是腹腔液VEGF，可能有望成为EMT诊断的辅助性指标.
【关键词】 子宫内膜异位症；血管内皮生长因子类；血清；腹液
　　【Abstract】 AIM: To determine the levels of vascular endothelial growth factor (VEGF) protein in sera and peritoneal fluid from patients with endometriosis (EMT) and to evaluate its diagnostic value. METHODS: The VEGF levels in sera and peritoneal fluid from 34 patients with EMT (experimental group) and 15 cases without EMT (control group) were detected by radiolinked immunoassay (RIA). The correlation between the detection results and RAFS scores was also analyzed. RESULTS: Basal metabolism index (BMI) had no significant difference between the two groups (P&>0.05). Sera VEGF level of EMT patients was significantly higher than that of control group ［(463±64)， (52±30) ng/L respectively， P&<0.05］. Peritoneal fluid VEGF level in EMT cases was significantly higher than that in healthy controls ［(1630±82)， (142±73)ng/L respectively， P&<0.001］. The VEGF levels in sera and peritoneal fluid of the patients with severe EMT were significantly higher than that of patients with mild EMT［ (376±59)， (589±76) ng/L， P&<0.05， and (1201±95)， (1822±112) ng/L respectively， P&<0.05］. There was a linear positive correlation between VEGF levels in peritoneal fluid and sera of EMT patients and RAFS scores (P&<0.01). CONCLUSION: VEGF levels in sera and peritoneal fluid of EMT patients are significantly elevated and rise along with the severity of the disease. Determination of VEGF protein level， especially in peritoneal fluid， might be a helpful index for the diagnosis of EMT.
　　【Keywords】 endometriosis; vascular endothelial growth factors; serum; ascitic fluid
　　0 引言
　　子宫内膜异位症（endometriosis，EMT）是生育期妇女常见疾病，其发病机制至今尚不清楚［1］. 许多研究证实EMT的发生发展过程中，逆流经血中子宫内膜能成功地异位种植、生长，与局部新生毛细血管的生成有关［2］，而腹腔内免疫功能的紊乱及多种细胞因子分泌失调，可导致炎性细胞因子间形成正反馈，扩大腹腔内无菌性炎症反应，促进了EMT的发生发展［3］. 本研究通过检测EMT患者血清及腹腔液中的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)水平，探讨其诊断价值.
　　1　对象和方法
　　1.1　对象
　　选取200501/200512江苏大学附属医院妇产科行腹腔镜或开腹手术，术后病理检查确诊为EMT患者34例（EMT组）. 年龄22~50（35±8）岁. 按美国生育协会修正标准分期法（RAFS），Ⅰ期6例，Ⅱ期7例，Ⅲ期12例，Ⅳ期9例. 同期在我院行腹腔镜手术的非EMT患者15例为对照组(包括卵巢畸胎瘤8例，浆液性囊腺瘤3例及腹腔镜检查正常的患者4例)，年龄22~36（30±8）岁，两组年龄分布差异无显著性（P&<0.05）. 纳入标准： ① 生育年龄的妇女，月经周期正常；② 至少3 mo未接受激素类药物治疗；③ 先前无自身免疫性疾病、肝脏疾病、糖尿病或恶性肿瘤；④ 同时排除了生殖器官发育不良，腹腔镜检查证实无急性炎症及其他盆腔改变.
　　1.2　方法

　　1.2.1　体质量指数(BMl)计算
　　两组患者均于入院后第2日清晨空腹、脱鞋、免冠，测身长(m)，体质量(kg)，精确度分别为1 cm和0.1 kg，计算体质量指数(BMI)=体质量(kg)/身长2(m2).
　　1.2.2　血液的采集和处理
　　两组均于入院第2日清晨禁食12 h后取肘前静脉血3 mL，常温下静置1 h，3000 r/min，离心10 min，取上清液，-70℃保存.
　　1.2.3　腹腔液的采集和处理
　　两组均于卵泡期(月经第6~14日)在腹腔镜检查或开腹手术直视下通过穿刺针或注射器吸取子宫直肠陷凹和子宫膀胱陷凹腹腔液，立即3000 r/min，离心10 min，取上清液，-70℃保存. 有血液污染者则弃置不用.
　　1.2.4　VEGF蛋白检测
　　采用ELISA法，VEGF蛋白试剂购自R＆D Systsem，具体操作严格按说明书进行. 血清及腹腔液均在同一批试剂盒内测定.
　　统计学处理： 组间比较行单因素方差分析；腹腔VEGF水平与RAPS评分的关系用Pearson直线相关分析. 用SPSS l2.0软件进行统计学处理.
　　2　结果
　　2.1　血清及腹腔液中VEGF水平
　　EMT组血清中VEGF水平与对照组间比较有统计学差异(P&<0.01)，腹腔液中VEGF水平高于对照组(P&<0.01，表1)，两组间BMI差异无统计学意义(P&>0.05). 表1两组患者血清、腹腔液中VEGF水平及体质量指数(略)

转贴于 　　2.2　VEGF与EMT严重程度的关系
　　将EMT按I~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期分成轻度和重度两组，和对照组间两两比较，轻度和重度EMT患者腹腔液VEGF水平均高于对照组(P&<0.05)，而且重度组腹腔液VEGF水平较轻度组明显升高(P&<0.05，表2). 经poarson直线相关分析后，EMT患者腹腔液中VEGF水平与RAFS评分间呈正相关 (P&<0.01). 血清中VEGF水平在3组间比较有显著差异性(P&<0.05)，EMT血清VEGF水平与RAFS评分间呈正相关(P&<0.05)，3组间BMI差异无统计学意义(P&>0.05). 表2VEGF与EMT严重程度的关系(略)
　　3　讨论
　　我们研究表明，在两组间BMI差异无显著性的情况下，EMT患者血清中VEGF水平与对照组间比较差异有统计学意义(P&<0.05)，腹腔液中VEGF水平高于对照组(P&<0.01)，因此推测VEGF水平是影响EMT发生及发展的原因. EMT患者血清和腹腔液VEGF水平在轻度组和重度组中均高于对照组，尤其是腹腔液VEGF水平重度组较轻度组明显升高(P&<0.01)，并且与RAFS评分间成正相关. 这是因为随着疾病的进展，病灶反复出血，促进异位病灶血管生成使得自主分泌VEGF增多，加之重度EMT患者异位灶中血管通透性增加、导致盆腔的广泛粘连［4-7］，导致了腹腔液中VEGF水平随疾病的严重程度而升高. 有研究表明［4-5］正常子宫内膜组织只表达少量的VEGF mRNA，但是不论在轻度或者重度EMT患者的异位内膜组织却有显著增高的VEGF mRNA的表达，并同BMI无相关性. 这同我们证实的EMT患者血清和腹腔液VEGF水平较对照组明显升高的结果一致. 因此我们分析腹腔液中异常升高的VEGF，一方面通过抑制逆流经血中内膜基质细胞的凋亡，刺激异位内膜本身及其周围组织新的血供的建立和维持，促进异位内膜的增殖和浸润入腹膜组织内，另一方面还可通过其免疫调节机制及促炎性反应的作用形成网络结构，导致恶性循环，改变了腹腔内环境，有利于炎性细胞在EMT病灶的积聚、炎性反应和粘连形成，从而在内异症发病过程中起重要作用.
EMT微环境的改变始于腹腔，血清和腹腔液中升高的VEGF可能在EMT复杂的发病机制中起着关键性桥梁作用，随着对EMT发病机制研究的深入，有利于探讨诊断EMT的新方法. 通过对EMT患者血清和腹腔液VEGF蛋白检测，尤其是腹腔液VEGF蛋白，可能有望成为EMT诊断和判断疾病严重程度的辅助性指标之一.

参考文献

　　［1］郎景和. 子宫内膜异位症的研究与设想［J］. 中华妇产科杂志， 2003，38：478-480.

　　［2］尹利荣，孙俊杰，洪达，等. 白细胞介素1α，β及干扰素mRNA在子宫内膜异位症患者异位和在位子宫内膜巨噬细胞中的表达［J］. 中华妇产科杂志，2006，41(5):295-298.

　　［3］郎景和. 子宫内膜异位症基础研究与临床研究的几个问题［J］. 中国实用妇科与产科杂志，2002，18:129-130.

　　［4］Gazvani R， Smith L， Fowler PA. Effect of interleukin8(IL8)， antiIL8， and IL12 on endometrial cell survival in combined with and without endometriosis ［J］. Fertil Steril， 2002，77(1):62-67.

　　［5］Carmeliet P， Jain R， Angiogenesis in cancer and other diseases ［J］. Nature， 2000， 407:249-257.

　　［6］王含必，冷金花，朱兰，等. 抗血管内皮生长因子抗体对子宫内膜异位症鸡胚模型干预的研究 ［J］. 中华妇产科杂志， 2007，42(1):43-47.

　　［7］张信美，林俊，许泓，等. 子宫内膜异位症患者腹腔液白细胞介素17的变化及意义［J］. 中华妇产科杂志， 2005， 40( 6 ):380-382.