【摘要】 目的：研究甘肃回族人群7个位于X染色体上的短串联重复序列（DXS6789，DXS6799，DXS6804，DXS7130，DXS7132，DXS7133和DXS7423）的遗传多态性. 方法：随机抽取甘肃回族150名女性和130名男性无关个体的静脉血，提取DNA，PCR扩增，变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染检测结果. 结果：在7个XSTR基因座中，DXS6789，DXS6799，DXS6804，DXS7130，DXS7132，DXS7133和DXS7423分别检出8，4，6，6，6，4和4个等位基因；分别检出22，7，14，14，15，6和7种基因型. 此7个位点女性的基因型频率分布均符合HardyWeinberg平衡. 结论：此7个X染色体STR位点有较高的遗传多态性.
【关键词】 染色体，人，X;短串联重复序列;遗传多态性
【Abstract】 AIM: To investigate the genetic polymorphism of 7 short tandem repeat (STR) loci （DXS6789， DXS6799， DXS6804， DXS7130， DXS7132， DXS7133 and DXS7423 on the X chromosome in Hui nationality inpiduals living in Gansu province. METHODS: The 7 Xchromosomal STR loci were typed by PCR following polyacylamide gel electrophoresis and silver staining to analyze the blood sample from the 150 unrelated Hui famale inpiduals and 130 unrelated Hui nationality male inpiduals. RESULTS: The number of alleles in the 7 loci (DXS6789， DXS6799， DXS6804， DXS7130， DXS7132， DXS7133 and DXS7423) were 8， 4， 6， 6， 6， 4 and 4 respectively; the number of genotypes were 22， 7， 14， 14， 15， 6 and 7 respectively. Exact tests demonstrated that genotype frequencies in females had no departure from HardyWeinberg equilibrium. CONCLUSION: 7 Xchromosomal STRs loci have highly genetic polymorphism.
【Keywords】 chromosome， human， X; short tandem repeat; polymorphism
0 引言
短串联重复（short tandem repeat， STR）是由2～6 bp重复单位构成的微卫星DNA，广泛分布于人类基因组中，作为一种遗传标记，在研究人类起源、进化和种族间的差异方面有意义，并被应用于疾病研究和个体识别当中. X染色体的STR已应用很多，但X染色体STR群体遗传的研究报道较少. 随着X染色体上的STR位点研究的深入，将为X连锁遗传病的基因定位和基因诊断提供重要方法. 我们选用了DXS6789，DXS6799，DXS6804，DXS7130，DXS7132，DXS7133和DXS7423 7个XSTR基因位点，对甘肃回族女性人群的等位基因及基因型进行了观察，为相关疾病的诊断、法医学亲子鉴定的应用奠定了基础.
1 材料和方法
1.1 材料
150名女性和130名男性无关个体静脉血，均来自甘肃血站提供的回族无关个体供者血样，全部血样用Chelex100提取DNA. PE9600扩增仪进行扩增.
1.2 方法
1.2.1 引物设计与合成7个XSTR基因座引物序列根据Edelmann等［1］报道的序列设计，以上引物均由北京奥科公司合成（表1）.表17个XSTR基因座引物序列（略）
1.2.2 PCR扩增反应PCR反应体系总体积20 μL，含1×反应缓冲液， 15 mmol/L MgCl2， 0.5 ｕ Taq酶， 0.25 μmol/L引物， 200 μmol/L dNTP， DNA 20～200 ng. PCR扩增参数见表2.表27个XSTR基因座登陆号及PCR条件（略）
1.2.3 变性凝胶电泳根据7个XSTR基因座的位点特性，采用6 mol尿素，T 60 g/L，C 50 g/L聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳. 先预电泳1 h，上样后恒功率40 W，电泳3 h，停泳后乙酸固定，AgNO3染色，Na2CO3显色，乙酸停显.
1.2.4 等位基因Ladder的制备将纯合子PCR产物分别与T载体连接，转入感受态细胞，过夜生长，提取质粒DNA，以质粒DNA为模板，作PCR扩增，得到相应的各等位基因Ladder. 同时用50 bp DNA Ladder对照， 并以测序结果按重复单位重复次数命名等位基因.
统计学处理：直接计数法观察位点的基因频率和基因型频率，计算杂合度、多态信息量、非父排除率及个体识别率.
2 结果
2.1 7个XSTR基因位点遗传多态性7个XSTR基因座中，最多检出8个等位基因（DXS6789），最少检出4个等位基因（DXS6799， DXS7133和 DXS7423），基因频率分布在0.01～0.68之间. 最多检出22种基因型（DXS6789），最少检出6种基因型（DXS7133），7个XSTR基因座的基因型频率分布均符合哈德韦伯平衡(P&>0.05). 7个XSTR基因座基因频率分布见表3.表37个XSTR基因座基因频率分布(略)
3 讨论
X染色体的STR广泛分布于真核细胞基因组中，高度稳定且有高的多态性，遗传方式独特，绝大多数STR位于非编码区，不受选择压力的影响.
X染色体STR在法医工作中具有很好的发展前景，STR可用于遗传性疾病的连锁分析和基因诊断［2］，X染色体STR基因座的最大应用价值在于可以解决一些特殊的亲子鉴定案，如缺乏双亲认定姐妹亲缘关系及同父异母的姐妹亲缘关系认定时，有关报道X染色体STR基因的资料非常缺乏［3］. STR在人群和种族之间的等位基因和基因型频率分布有地理差异. 因此，研究X染色体DNA多态性为群体遗传学方面重构人类进化史、追溯人类种群起源与迁移能够提供有价值的信息.
新近的研究显示，我国对X染色体的STR位点报道多见于对汉族群体X染色体的STR位点多态性分析［4-5］，而在其它民族群体X染色体的STR位点等位基因及基因型多态性的研究报道却很少. 目前国内的研究方向是寻找更多、多态性更高、特异性更好的XSTR基因位点，调查更多基因位点在中国不同地区和民族人群中的频率资料，建立XSTR数据库. 我们对甘肃回族群体的等位基因及基因型进行了观察，得到了甘肃回族群体的遗传多态性资料，研究结果表明这7个XSTR基因位点具有较高的遗传多态性，可以为群体遗传学研究、法医学亲子鉴定等应用提供理论基础.
【参考文献】
［1］Edelmann J， Deichsel D， Hering S， et al. Sequence variation and allele nomenclature for the Xlinked STRs DXS9895， DXS8378， DXS7132， DXS6800， DXS7133， GATA172D05， DXS7423 and DXS8377［J］. Forensic Sci Int，2002，129（2）: 99-103.
［2］Edelmann J， Szibor R. The Xlinked STRs DXS7130 and DXS6893［J］. Forensic Sci Int，2003， 136（1-3）:73-75.
［3］Matsushita H， Nakamura S， Nagai T， et al. Genetic analysis of 18 STR loci on the X chromosome in a Japanese population［J］. Int Congress Series， 2003， 1239:331-333.
［4］Edelmann J， Hering S， Kuhlish E， et al. Validation of the X chromosome STR DXS7424 which is closely linked to DXS101［J］. Int Congress Series， 2003，1239: 393-398.
［5］吕德坚. 用PCR复合扩增检测DXS7132 和DXS6804的单倍型［J］.遗传学报， 2003，30（1）:10-14.