关于首发精神分裂症IL 1β,IL 6,TNF α的血清蛋白水平及PBMC mRNA表达

【摘要】 目的：观察精神分裂症及其不同亚型中IL1β， IL6， TNFα的动态变化情况，探讨免疫机制与精神病理的关系. 方法：应用ELISA和RTPCR方法，同时检测83例精神分裂症患者治疗前后和65例健康对照者IL1β， TNFα， IL6血清蛋白水平和PBMC mRNA表达. 结果：①精神分裂症组治疗前、后与对照组血清IL1β， IL6， TNFα水平相比均增高，差异有统计学意义（P&<0.05）. 精神分裂症组治疗后血清IL1β水平与治疗前相比下降，差异有统计学意义（P&<0.05）. ②精神分裂症组治疗前阴性亚型患者TNFα水平高于阳性亚型（P&<0.05），治疗后两型IL1β水平和阴性亚型患者TNFα水平较治疗前下降（P&<0.05）；治疗前家族型患者IL6水平高于散发型（P&<0.05），治疗后两型IL1β水平和家族型患者TNFα水平较治疗前下降（P&<0.05）. ③治疗前TNFα水平与阴性症状评分呈正相关（r=0.412，P&<0.05）；IL1β治疗前后的差值与PANSS量表降分率呈正相关（r=0.388， P&<0.05）. ④精神分裂症组治疗前、后PBMC中IL1β， IL6， TNFα mRNA表达与对照组相比增高，差异有统计学意义（P&<0.05）；精神分裂症组治疗后PBMC中IL1β mRNA表达与治疗前相比明显下降，差异有统计学意义（P&<0.05）. 结论：①精神分裂症患者存在免疫激活，IL1β水平的变化可作为病情缓解的一个灵敏指标. ②遗传背景可能影响了精神分裂症患者血清IL6水平及其介导的免疫功能；TNFα水平的变化可能与阴性症状的改善密切相关. ③精神分裂症患者PBMC细胞因子mRNA表达上调，其可能是细胞因子的主要来源之一.
【关键词】 精神分裂症 白细胞介素1β 白细胞介素6 肿瘤坏死因子α
　　0引言
　　细胞因子作为神经系统、内分泌系统和免疫系统三大系统之间信息交流的重要物质［1］，影响神经递质和神经肽之间的平衡，并对神经递质，尤其是儿茶酚胺能系统等有调节作用，参与了神经系统疾患的病理生理过程［2］. 越来越多的证据表明，精神分裂症患者存在细胞因子介导的免疫功能紊乱［3-4］，本研究选择首发未用药的精神分裂症患者，扩大样本量，进行严格的分型，检测血清中细胞因子IL1β， IL6， TNFα的水平，同时用半定量RTPCR法检测外周血单个核细胞（PBMC）细胞因子mRNA的表达，以期从基因和蛋白两个层面上更真实地反映疾病过程中细胞因子的变化，探讨免疫机制与精神病理的关系.
　　1对象和方法
　　1.1对象精神分裂症组选取河南省精神病医院200407/200508住院的本地汉族患者. 入选标准：①符合DSMⅣ诊断标准，PNASS（Positive and Negative Syndrome Scale）评分＞60分；②首次发病，病程不超过2 a， 未用过任何抗精神病药物； ③年龄16~45岁；④患者家属知情同意. 排除标准：①患有心胆肝肾等躯体疾病、内分泌及免疫系统疾病、营养不良及其它精神疾患；②有过敏及激素治疗史，接受过免疫制剂治疗；③近期内进行预防接种；④怀孕或哺乳期妇女. 共收集到符合上述条件的精神分裂症患者83（男43，女40）例，年龄（27.3±6.7）岁. 对照组选取65（男35，女30）名同期的本院健康职工及在读大学生健康志愿者，均为汉族. 排除标准同精神分裂症组. 年龄（28.4±6.1）岁. 精神分裂症组及对照组，在年龄、性别方面均无统计学差异.
　　1.2方法
　　1.2.1一般资料的收集和PANSS量表评定精神分裂症组治疗前及治疗4 wk后采血. 在取血当天通过询问病情、精神检查，完成入组资料的收集和对精神分裂症患者的PANSS量表评定. PANSS量表的评定，由两个受过训练的评定者，在同一次检查后，共同讨论每个独立评分，统一意见后产生一致评分.
　　1.2.2临床分型标准根据PANSS评分进行分型评定，应用包容性大一些的分型评定方法，利用复合量表（阳性量表分减去阴性量表分）的不同分数，复合量表分为阳性值（即&>0）的患者为“阳性亚型”， 为阴性值（即&<0）的患者为“阴性亚型”. 其中阳性亚型56例，阴性亚型27例.
　　根据文献［5］分为家族型精神分裂症组（FS组）和散发型精神分裂症组（SS组）. 其中FS组31例，SS组52例.
　　1.2.3临床用药入组后单一应用利培酮治疗，利培酮从1 mg/d开始，逐渐加量到2～6 mg/d，一般在2 wk时达到治疗剂量，维持剂量不变. 如睡眠不佳可加用苯二氮卓类镇静催眠药物，出现锥体外系反应可加用安坦.
　　1.2.4标本的采集及处理精神分裂症组入组后治疗前及治疗4 wk后采血. 于晨6：30~7：30采集空腹肘静脉血6 mL，1 mL置于2×104 U/L肝素抗凝的玻璃试管中混匀，用于抽提RNA； 5 mL置于普通试管中，2000~2500 r离心10 min，分离血清标本，分置3份，-70℃冰箱保存备用于细胞因子的检测. 对照组入组时采血及标本处理同精神分裂症组.
　　1.2.5血清IL1β， IL6， TNFα蛋白水平的测定采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测，人IL1β， IL6， TNFα定量EIA试剂盒均由北京邦定生物技术有限公司提供.
　　1.2.6PBMC IL1β， IL6， TNFα mRNA的检测采用RTPCR方法. PBMC总RNA的提取及反转录为cDNA所需试剂由美国Promega公司提供. IL1β引物序列为：上游5′GGC TTA TTA CAG TGC CAA TG3′，下游5′GGA TCT ACA CTC TCC AGC TGT3′； IL6引物序列为：上游5′GCC CAT GCT ACA TTT GCC GAA G3′，下游5′CAG GAG CCC AGC TAT GAA CTC3′. TNFα引物序列为：上游5′ CCG AGT GAC AAG CCT GTA G3′，下游5′CAA TGA TCC CAA AGT AGA CCT 3′. 扩增片段长度IL1β为572 bp，IL6为246 bp，TNFα为444 bp. GAPDH为内参. 引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成. PCR反应产物琼脂糖凝胶电泳后，用Phoretix ID凝胶图像分析软件测定电泳条带的光密度，用内参校准后进行统计分析.
　　统计学处理: 采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，结果以x±s表示，两组间均数比较采用独立样本t检验，治疗前后均数比较采用配对t检验，两变量间相关分析采用Pearson相关，以P&<0.05为差异有统计学意义.
　　2结果
　　2.1血清IL1β， IL6， TNFα水平的比较精神分裂症组治疗前、治疗后与对照组血清IL1β， IL6， TNFα水平相比，均增高，差异有显著性（P&<0.05）. 精神分裂症组治疗后血清IL1β水平与治疗前相比下降，差异有显著性. 治疗后血清IL6， TNFα水平与治疗前相比差异无显著性（P&>0.05，表1）.表1两组血清IL1β， IL6， TNFα水平的比较
　　2.2精神分裂症不同亚型间血清IL1β， IL6和TNFα水平的比较治疗前IL1β和IL6水平在阳性亚型、阴性亚型患者之间无统计学差异（P&>0.05），阴性亚型患者TNFα水平高于阳性亚型（P&<0.05）；治疗前IL1β和TNFα水平在家族型与散发型患者之间无统计学差异（P&>0.05），家族型患者IL6水平高于散发型（P&<0.05）. 细胞因子治疗前后进行比较，各个亚型患者IL1β水平在治疗后均较治疗前下降（P&<0.05）； TNFα水平在治疗后较治疗前下降（P&<0.05）；家族型患者TNFα水平在治疗后较治疗前下降（P&<0.05，表2）.表2精神分裂症不同亚型间血清IL1β， IL6和TNFα水平的比较
　　2.3精神分裂症患者PANSS量表评分和细胞因子的关系精神分裂症患者治疗前PANSS总分为(89.1±11.6)，阳性症状分为(25.0±10.8)，阴性症状分(19.8±11.3). 治疗后PANSS总分为(59.0±9.5)，PANSS降分率为（51±14）%. 精神分裂症患者治疗前TNFα与阴性症状分呈正相关（r=0.412， P&<0.05）；IL1β治疗前后的差值与PANSS量表降分率呈正相关（r=0.388，P&<0.05）.
　　2.4精神分裂症组治疗前后与对照组PBMC中IL1β， IL6， TNFα mRNA表达的比较表达与对照组相比均明显增高，差异有统计学意义（P&<0.05）. 精神分裂症组治疗后PBMC中IL1β mRNA表达与治疗前相比下降，差异有统计学意义（P&<0.05）. 而精神分裂症组治疗后PBMC中IL6和TNFα mRNA表达与治疗前相比无统计学意义（P&>0.05，表3）.3精神分裂症组治疗前后PBMC中IL1β， IL6， TNFα mRNA表达的比较
　　3讨论
　　本研究表明，精神分裂症患者在治疗前血清IL1β， IL6， TNFα水平与对照组相比明显增高，并且TNFα与阴性症状分呈正相关，提示精神分裂症患者存在免疫激活，细胞因子水平的增高可能积极参与了精神病理的发生，且TNFα主要与阴性症状关系更为密切.
　　除疾病本身外，细胞因子的产生受经典抗精神病药［6］和非经典抗精神病药的影响［7］. 有报道细胞因子的变化与抗精神病药物的治疗存在关联［8］，经典和非经典抗精神病药物至少可以部分地使异常的免疫正常化，一些免疫参数对预测患者对抗精神病药物的反应是有用的［9］. 本研究发现治疗4 wk后病情基本缓解，血清IL1β水平下降，而IL6， TNFα水平无统计学改变，且IL1β治疗前后的差值与PANSS量表降分率呈正相关，IL6， TNFα治疗前后的差值与PANSS量表降分率无相关，提示IL1β水平可作为病情缓解的一个灵敏指标，IL6， TNFα水平的变化有一定的滞后性. 在精神分裂症不同亚型之间细胞因子水平以及其与精神症状的相关性亦存在差异， 免疫紊乱与精神分裂症亚型的部分临床特征相关联［10］. 本结果显示阴性亚型患者TNFα水平高于阳性亚型，治疗后较治疗前下降，提示TNFα水平的变化在以阴性症状为主的病例中可能更为突出，这与Ramalho等［11］所报道的精神分裂症细胞因子异常可能与其临床症状（主要是阴性症状）密切相关是一致的. 治疗4 wk后，总体精神分裂症患者血清TNFα水平的下降与治疗前相比无统计学差异，考虑可能与所收集病例以阳性亚型患者较多，而TNFα主要与阴性症状相关，其治疗前后的变化主要反映阴性症状的改善程度，故均值变化不明显.
　　精神分裂症大多数具有遗传倾向，家族型精神分裂症遗传特征较散发型精神分裂症更突出一些. 有资料报告，家族型精神分裂症临床表现以阴性症状为主，对抗精神病药物反应差，预后不良. 本结果显示在治疗前IL6水平则家族型显著高于散发型，提示遗传背景可能影响血清IL6水平及其介导的免疫功能. 家族型患者TNFα水平在治疗后较治疗前下降（P&<0.05），这与我们前面所述阴性亚型患者TNFα水平治疗后也较治疗前下降的结果似乎是一致的，因为二者均是以阴性症状为主，进一步提示TNFα的水平变化可能与阴性症状的改善密切相关.
　　本研究表明，精神分裂症患者在治疗前其PBMC中IL1β， IL6和TNFα mRNA表达水平与对照组相比均增高，治疗4 wk后IL1β mRNA表达水平下降. 既往曾有报道IL1β mRNA的表达与炎症程度呈正相关，可作为临床上判断疾病严重程度和疗效的指标［12］，精神分裂症患者治疗前后PBMC中IL1β mRNA表达水平的变化，是否也提示IL1β可作为精神分裂症病情变化和疗效的一个监测指标. 而治疗后IL6和TNFα mRNA表达水平无明显改变. 这些与血清中IL1β， IL6和TNFα的蛋白水平变化趋势相一致，进一步验证了PBMC中细胞因子mRNA的表达与血清蛋白水平密切相关. 提示：①无论是在基因转录或蛋白层面，在精神分裂症中确实存在细胞因子IL1β， IL6和TNFα水平的异常；②精神分裂症中存在PBMC的激活，激活后IL1β， IL6和TNFα mRNA表达的增高，可能也是血清中IL1β， IL6和TNFα水平增高的主要来源之一. 进一步探讨影响PBMC细胞因子mRNA表达的影响因素，将有助于反映对机体免疫状况的影响.
【

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