关于E 选择素＋G98T, ＋A561C基因多态性与原发性高血压及左室重构的关系

【摘要】 目的： 探讨E选择素（Eselectin）＋G98T， ＋A561C基因多态性与原发性高血压及左室重构的关系. 方法： 对105例原发性高血压患者（高血压组）及94健康正常人（对照组）进行Eselectin＋G98T， ＋A561C基因多态性检测及超声心动图、血脂水平检测. 结果： ① Eselectin +A561C各基因型在原发性高血压组和对照组间的分布差异存在统计学意义(P&<0.05 )；② Eselectin ＋G98T基因型在原发性高血压组和对照组间的分布差异无统计学意义(P&>0.05);等位基因频率在两组中分布差异亦无统计学意义(P&>0.05)；③ 原发性高血压组内， ACCC基因型更倾向于发生左室肥厚(P&<0.05)； ④ 原发性高血压组和对照组Eselectin+G98T位点及+A561C位点各基因型组间血脂水平比较差异均无统计学意义(P&>0.05 ). 结论： Eselectin＋A561C位点单核苷酸多态性与原发性高血压具有相关关系， C等位基因可能是原发性高血压发病的遗传易感基因. C等位基因原发性高血压患者更倾向于出现左室重构.
【关键词】 E选择素 高血压 多态现象 遗传 心室重构
　　 0引言
　　原发性高血压是最常见的心血管疾病， 由遗传因素和环境因素共同作用产生的，因而对于高血压病分子机制的研究至关重要. E选择素(Eselectin)属于黏附分子(Ams)中的选择素家族(SF)，可介导白细胞与内皮细胞起始黏附聚集并刺激白细胞与内皮细胞的相互作用［1］，并且Eselectin本身有促血管生成的作用.
　　1对象和方法
　　1.1对象原发性高血压住院患者105例（高血压组），符合2005年《中国高血压防治指南》高血压诊断标准. 同期选取健康体检者94例作为对照组. 行超声心动图、肝肾功能、血糖、胸片等检查，排除继发性高血压、糖尿病、冠心病、心瓣膜疾病、先天性心脏病，肝肾功能异常者. 原发性高血压组及对照组均排除体质量指数≥28 kg/m2者.
　　1.2方法采用酚氯仿法提取人类基因组DNA，采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR RFLP)的分析方法，检测Eselectin基因+G98T位点及+A561C位点多态性.
　　1.2.1引物设计与合成PCR引物序列根据文献［2］设计，Eselectin +G98T位点上游引物5′TGCCCAAAATCTTAGGATGC3′，下游引物5′AAGCCCA
　　GGGAAGAACACAT3′. Eselectin ＋A561C位点上游引物5′AGTAATAGTCC TCCTCATCATG3′，下游引物5′ACCATCTCAAGTGAAGAAAGAG3′.
　　1.2.2PCR扩增PCR扩增体系25 μL，模板DNA 2 μL，上下游引物各1 μL，5×Buffer5 μ uL，TagDNA酶 0.5 μL ，双蒸水补足至25 μL. 94℃预变性5 min， 94℃变性30 s， 59℃退火1 min， 72℃延伸1 min， 35个循环，末循环72℃再延伸5 min.
　　1.2.3限制性内切酶酶切+G98T位点PCR产物的酶切体系为PCR产物 10 μL，限制性内切酶Hph I 2U， 10×buffer 2 μL，灭菌去离子双蒸水10 μL. ＋A561C位点PCR产物的酶切体系为PCR产物 10 μL，限制性内切酶Pst I 10U， 10×buffer 2　　μL，灭菌去离子双蒸水 10 μL. 37℃水浴中酶解12～14 h.
　　1.2.4电泳判断基因型酶切产物在90 V电压下通过25 g/L琼脂糖凝胶电泳约40 min；EB染色，紫外光透照仪下鉴定拍照.
　　1.2.5血脂、血糖等生化指标测量于全自动生化仪上行TG， TC， LDLC， HDLC， 血糖等检测.
　　1.2.6左室质量指数计算彩色多普勒超声心动图仪检测，由专人操作，探头频率2.5 MHz，探查深度12～20 cm，黑白二维图像时帧频速度25 Hz，多普勒取样容积宽度3.0 mm，纸速50～100 mm/s. 测量3个心动周期，取平均值. 探测舒张末期左室内径(LVDd)、室间隔(IVST)、左室后壁厚度(LVPW). 计算左室向心性重构指数CR= IVST×2/LVDd；左室质量（LVM）计算采用Devereux公式：LVM=1.04×［（IVSTd+LVDd+LVPWTd） 3-LVDd 3 ］-13.6；左室质量指数（LVMI）=LVM/BSA.
　　统计学处理： 用SPSS15软件包进行分析. 基因型和等位基因频率采用基因计数法计算，研究对象与HardyWeinberg平衡的符合程度、单个基因型及组间等位基因频率比较采用四格表χ2或R×C列联表检验，并以比值比(OR)及其95%可信区间(CI)表示相对风险度. 计量资料用x±s表示，各组间均数的比较依据资料的性质，用t检验，以P&<0.05为有统计学意义.
　　2结果
　　2.1一般资料两组在性别和年龄上进行了匹配，年龄及性别在高血压组及对照组差异无统计学意义（P&>0.05）. TC， TG， LDLC水平在高血压组中明显高于对照组(P&<0.05 )， HDLC水平在高血压组和对照组间比较差异无统计学意义(P&>0.05 ).
　　2.2Eselectin基因型分析① Eselectin +G98T位点基因多态性检测： PCR扩增产物片段大小为332 bp(图1). 基因型有三种，GG型(194，138 bp两条带)，GT型(332，194， 138 bp三条带)，TT型(332 bp一条带，本研究未检测到)（图2）. ② Eselectin＋A561C位点基因多态性检测： PCR扩增产物片段大小为186 bp（图1）. 基因型有三种，AA型(123， 63 bp两条带)，AC型(186， 123， 63 bp三条带)，CC型(186 bp一条带)(图3).
　　2.3Eselectin基因多态性与原发性高血压的相关性分析Eselectin基因型在两组人群中分布频率，经HardyWeinberg遗传平衡定律检验，达到遗传平衡，具有群体代表性.
　　　Eselectin＋G98T基因型在高血压组和对照组间的分布，差异无统计学意义(P=0.203). 基因型频率的相对风险分析，GTTT基因型患原发性高血压的风险是GG基因型的1.729倍. 等位基因频率在两组中分布，差异亦无统计学意义(P=0.218，表1）.
　　Eselectin＋A561C基因型在高血压组和对照组间的分布差异存在统计学意义(P=0.045). 基因型频率的相对风险分析，ACCC基因型患原发性高血压的风险是AA基因型的3.55倍；等位基因频率在两组中也存在着统计学意义(P=0.013，表1）.
　　2.4Eselectin基因型与血脂水平关系的分析高血压组与对照组Eselectin各基因型间比较，ACCC基因型与AA基因型血清TG， TC， LDLC水平差异均无统计学意义(P&>0.05 ). GT基因型与GG基因型血清TG， TC， LDLC水平差异均无统计学意义(P&>0.05 ).
　　2.5Eselectin基因多态性与原发性高血压患者左室重构的相关分析对高血压组内AA基因型及ACCC基因型的CR， LVM， LVMI进行比较，ACCC基因型更倾向于发生左室肥厚（P&<0.05，表2）.表1Eselectin＋G98T基因Eselectin＋A561C基因多态性分布表2Eseleetin＋G98T基因及Eseleetin＋A561C基因多态性与左室重构相关性

3讨论
　　迄今为止已证明Eselectin基因多态性与多种疾病的易患性和(或)临床表现有关联，如非胰岛素依赖型糖尿病［3］、冠心病等［4］.
　　关于Eselectin基因多态性与原发性高血压相关性的研究，而显示Eselectin Leu554Phe(L/F554)多态性［5］、+G98T基因多态性［6］ 、+A561C多态性［7］与血压可能具有相关性的报道.
　　本研究结果显示，Eselectin +A561C位点多态性与原发性高血压有相关关系，ACCC基因型及C等位基因可能是原发性高血压的易患因素之一(P&<0.05). Eselectin基因+A561C位点多态性与原发性高血压患者左室重构有相关关系，ACCC基因型及C等位基因可能是原发性高血压患者左室重构的危险因素之一（P&<0.05）. 与之前Eselectin基因+A561C位点多态性与原发性高血压关系的研究报道［7］相一致.
　　　Eselectin＋G98T多态性与原发性高血压无明显相关关系（P&>0.05），GT基因型及T 等位基因在原发性高血压组有增高趋势，但无统计学意义. 与韦叶生等［6］关于Eselectin＋G98T多态性与原发型高血压相关性的报道不一致，考虑可能与本研究样本量较小有关，同时Eselectin＋G98T多态性位于2号外显子5′非翻译区，故其位点突变是否对Eselectin功能产生影响，进而对血压产生影响，有进一步研究.
　　Eselectin+A561C位点， ＋G98T位点不同基因型之间血清TG， TC， LDLC水平比较，ACCC基因型及GT基因型较AA基因型及GG基因型血清TG， TC， LDLC水平有增高趋势，但差异无统计学意义（P&>0.05），国内外各关于Eselectin基因多态性与血脂水平关系的研究结果有不一致之处［7-8］，尚无定论，考虑可能与实验样本量的大小、体质量指数等影响因素有关，有待进一步研究.
　　综上所述，本研究提示Eselectin+A561C多态性可能是原发性高血压的患病的遗传因素之一，并可能使原发性高血压患者更倾向于发生左室肥厚. 对于Eselectin基因多态性与原发性高血压的研究，还有待于今后进行大样本、多地域的广泛深入研究，将有可能为原发性高血压的早期防治提供新的线索和途径.

参考文献

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