作者：刘希成 梁恒 田真 张霖 陈阳
【关键词】 双向电泳；，蛋白质组学；，血清
【关键词】 双向电泳；蛋白质组学；血清
1 材料和方法
应用Affinityblue gel和Protein A分别去除人血清中的白蛋白和IgG. 将未做处理的血清以及去除白蛋白和IgG的血清各400 μg与水化液混合，参照Grg等［1］ 的方法进行双向凝胶电泳（twodimensional polyacrylamide gel electrophoresis， 2DE）检测，实验重复3次. 扫描获取谱图，用PDQuest分析软件进行图像分析，选取表达量差异2倍以上的蛋白点进行质谱分析，获得其肽质量指纹图(PMF)，用Profound PMF数据库查询软件在NCBInr蛋白数据库中进行蛋白的检索.
2 结果
PDQuest软件对2DE谱图进行匹配和统计分析，发现未做处理血清、去除白蛋白及IgG的血清的平均蛋白质点分别为(482±18)个和(523±29)个. 从谱图中发现，去除白蛋白及IgG后，Mr=30 000~70 000区域内蛋白点的丰度明显提高，高丰度蛋白富集区的蛋白丰度明显下降，但其它区域的部分蛋白丰度也随之下降或者丢失. 切取在去除白蛋白及IgG过程中丢失和新出现的9个蛋白点 （Studentst检验差异显著， P&<0.05），胶内酶解后进行MALDITOFMS分析，成功鉴定了这些差异蛋白点为8种蛋白质. 在这些鉴定的差异蛋白点中，出现在未做处理血清中的蛋白有5个，其中2个蛋白点鉴定为同一种蛋白，分别为维生素A结合蛋白，可溶性尿激酶血纤维蛋白溶酶原激活剂受体，蛋白激酶1抗原和血清白蛋白. 出现在去除白蛋白和IgG的血清中的蛋白有4个，分别为NADH脱氢酶辅酶β，肌动蛋白结合蛋白M1，T细胞活性受体β和血小板生长因子C.
3 讨论
应用Affinityblue gel和Protein A分别去除白蛋白和IgG已经成为血清蛋白质组学研究中一种常用的前处理方法［2］. 本研究应用蛋白质组学方法比较分析了人未做处理血清和去除白蛋白及IgG的血清，鉴定了8种差异表达的蛋白质，其中7种为低丰度功能蛋白.
我们的实验结果表明，去除高丰度蛋白时可以增强一些低丰度功能蛋白的检测，但由于非特异性吸附的存在，也会导致部分功能蛋白的丢失. 因此，我们认为在分析具体病例的血清时，应采用不同的方法对样品进行处理后再分别进行实验，并将结果综合起来全面地加以分析.
【参考文献】
［1］Grg A， Weiss W， Dunn MJ. Current twodimensional electrophoresis technology for proteomics ［J］. Proteomics， 2004， 4 (12): 3665-3685.
［2］Hu S， Loo JA， Wong DT. Human body fluid proteome analysis ［J］. Proteomics， 2006， 6(23): 6326-6353.
［3］庞月华， 杨望平. 丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶1和p38在内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化过程中的表达变化［J］. 临床心血管病杂志， 2006， 22(9): 36-40.
［4］Campbell JS， Hughes SD， Gilbertson DG， et al. Plateletderived growth factor C induces liver fibrosis， steatosis， and hepatocellular carcinoma ［J］. Proc Natl Acad Sci USA， 2005， 102(9): 3389-3394.