本文是一篇药学论文，笔者认为DNA metabarcoding和shotgun metabarcoding两种方法为五虎散等中成药的生物组分鉴定提供了不同的策略和技术手段，构建更全面的中成药生物组分鉴定体系，以保障中成药临床使用的疗效与安全。
第一部分 基于DNA barcoding技术五虎散原料药材参考序列获取
材料与方法
1仪器与试剂
1.1 仪器
SQP型电子天平（德国sartorius公司） MM400型球磨仪（德国Retsch公司） 微量移液器（德国eppendorf公司） VORTEX-5型涡旋混合器（Haimen Kylin-Bell LabInstruments Co..Ltd） 1-14型离心机（德国Sigma公司） Nanodrop One型超微量分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific公司） T100型聚合酶链反应（PCR）仪（美国Bio-Rad公司） DYY-6C型电泳仪（北京六一生物科技有限公司）Gel DocTMXR+型凝胶成像仪（美国Bio-Rad公司）
..........................
结果
1 DNA提取、PCR扩增结果
根据材料与方法3.1中的DNA提取方法完成6份样品的DNA提取。DNA检测结果见表1-4，6份样品DNA浓度的平均值为201.4 ng/μL。除白芷外，其余样品的A260nm /A280nm在1.8至2.07之间，表明大部分样品均成功提取质量较高的DNA。
按照设置好的扩增程序进行PCR扩增，除白芷的rbcL片段外，6种药材的ITS2、psbA-trnH、matK和rbcL DNA条形码片段均成功扩增，所得到的PCR产物在电泳胶图上的条带单一且明亮。
药学论文怎么写
..............................
第二部分 基于DNA metabarcoding技术中成药五虎散生物组分鉴定
材料与方法
1 仪器与试剂
1.1 仪器
FW135型中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司） 标准检验筛（5号和6号）（上海宝蓝实验仪器制造有限公司） SQP型电子天平（德国sartorius公司） MM400型球磨仪（德国Retsch公司） 1-14型离心机（德国Sigma公司） 微量移液器（德国eppendorf公司）。 SW-CJ-2FD型超净工作台（上海博讯实业有限公司） NanoDrop One型超微量分光光度计（Thermo公司） ABI GeneAmp® 9700型PCR仪（Thermo Fisher Scientific公司）
.........................
结果
1 DNA提取及PCR扩增结果
2份自制的五虎散参考样品如图2-1所示。根据方法中的DNA提取方法完成2份自制样品和4份市售样品的DNA提取，DNA质量见表2-4。6份样品DNA浓度的平均值为125.13 ng/μL，A260nm /A280nm在1.8至2.07之间，表明所有样品均成功提取质量较高的DNA，可进行后续PCR扩增。
按照设置好的扩增程序进行PCR扩增，所得到的PCR产物在电泳胶图上的条带单一且明亮，长度在500 bp左右，可进行后续实验。
药学论文怎么写
..............................
第三部分 基于shotgun metabarcoding 技术中成药五虎散生物组分鉴定.............................. 52
前言 ................................. 52
材料与方法 .............................. 53
结果 ...................... 55
结论 .......................... 77
结果
1 DNA 提取、shotgun测序及序列组装结果
按照上述3.2中的方法提取五虎散的总DNA，2份自制和3份市售DNA浓度的平均值为144.06 ng/μL，A260nm/A280nm的比值均分布在1.8至2.0之间，表明中成药样品所获得DNA的浓度与纯度均较高，可满足后续分析需要，五虎散样品所提取DNA的质量见表3-1。
经shotgun测序，2份自制样品和3份市售样品共获得了37.14 G的原始数据，经去除低质量的pair-end测序reads后，ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL片段的共富集到1421013条测序reads，具体测序结果见表3-2。使用两个组装软件进行序列组装并去除重复序列，共获得6884个Unique Contigs。经注释、引物去除以及按照相似度100%进行OTU分析后，ITS2片段共获得80个OTU，平均长度为207.5 bp；通过核基因ITS2片段获得的 OTU 数量是叶绿体psbA-trnH、matK 和 rbcL的7倍以上。此外，ITS2 序列的GC含量高于psbA-trnH、matK 和 rbcL 序列（表3-3）。
药学论文参考
..............................
结论
DNA条形码技术可有效证实五虎散5种原料药材及阳性对照西洋参药材均为正品，可保证后续五虎散自制样品的制备的准确性，成功获取的参考序列也为后续数据分析及组装序列的准确性分析奠定基础。
DNA metabarcoding方法可以用于中成药五虎散中除天南星外其余处方成分的鉴定。此外，该方法也可以检测到一些非处方成分，如混伪品、杂质或真菌等外源污染。两对引物组合使用可以保证分析结果的准确性和全面性。该方法可作为传统中成药鉴定方法的有效补充，以实现更全面、准确、有效的中成药生物组分监测，确保中成药五虎散临床用药的安全有效。
与DNA metabarcoding技术相比，shotgun metabarcoding技术可以消除PCR扩增过程中可能产生的偏差，且多种条码的组合使用保证了分析结果的高准确度。Shotgun metabarcoding技术在五虎散生物组分鉴定中显示出较好的准确性，重复性和灵敏性，成功检测出自制样品中所有处方成分及阳性对照，且检测出市售样品中混伪品、杂质或真菌等外源污染的存在，可作为传统鉴定方法的有效补充，用于中成药五虎散生物组分的鉴定。
参考文献（略）