本文是一篇药学论文，本试验以菘蓝种子和幼苗为化感受体，制备无花果水提液，研究了无花果不同部位不同浓度水提液对菘蓝种子萌发和幼苗生长的化感作用，并对无花果叶水提液乙酸乙酯部位中的化感物质进行初步分离和鉴定，以及对其进行生物测定。
1 绪论
1.1 化感作用的研究概况
1.1.1 化感作用的定义
植物化感作用又称他感作用、相生相克作用，在生态系统中扮演着不容忽视的角色，在自然界中普遍存在。奥地利植物学家Molisch于1937年首次提出了“化感作用(Allelopathy)”的概念，1984年，Rice根据Molisch的定义并结合数十年来科学家们对植物化感作用的研究，重新界定了化感作用的概念，即一种植物(包括微生物)向外界释放化学物质，从而对该种植物或其附近的植物造成直接或间接影响，这种相互作用包括促进作用和抑制作用[1]。大部分植物都有化感作用，植物的化感作用与其自身特性密切相关，是植物本身具有的一种化学防御机制。研究发现，植物化感作用是自然界中的一种重要现象，可以影响植物生长发育、种群分布、土壤系统中微生物区系组成和植被演替，化感作用可以增强植物对环境的适应能力和与其他伴生植物争夺有限资源的能力，邓文红认为化感作用对黑沙蒿群落形成和演替的生态学影响在防止干旱地区荒漠化中具有科学意义[2]。化感作用还可以有效控制杂草和病虫害的侵害，利用化感作用来生产除草剂和杀虫剂可以代替农药的使用，减少环境污染，为农业用地的杂草控制提供新思路，黎蓉研究发现不同浓度的燕麦种子及幼苗提取物可抑制杂草产生[3]。此外，植物间的化感作用还可以有效解决连作障碍，胡双等人认为大蒜化感伴生栽培后，可以显著降低西瓜枯萎病的发生，在一定程度上减轻了西瓜的连作障碍[4]。
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1.2 无花果的研究现状
1.2.1 无花果简介
无花果(Ficus carica L.)又名文仙果、映日果、明目果、奶浆果[66]，属于被子植物科桑科榕属的小乔木或落叶灌木，雌雄异株，花藏在蒴果状的花托中，外观可以看到果实，但看不到花，因此称为“无花果”[67]。无花果有800多个品种，它们主要在热带和亚热带地区种植，这是一种果实或隐聚物，其表皮薄而柔软，肉质松软味甜、营养丰富，是优良的经济树种[68]，无花果起源于中东，是最早由人类种植的植物之一，在人类历史早期，无花果就被视为一种药食同源的植物[69]。在传统上，无花果的各个器官均可入药，具有一定的药用价值，无花果的汁液被用于伤口感染、痔疮、疣、病毒和昆虫叮咬等的治疗[70]，无花果叶被用于治疗腹泻、胃痛和糖尿病，树皮也可以被用于治疗腹泻[71]。无花果还具有一定的商业价值，无花果鲜果及其果汁饮料、果脯、果酱、果酒等在全国各地和国际市场有良好的销售潜力，特别是无公害无污染的果品更加引人注目[72]。
1.2.2 无花果的资源分布
无花果是喜光树种，适合在温暖湿润的气候条件下栽培，具有耐瘠薄、耐干旱等特点，但不耐寒，冬季温度达-12℃时，新梢顶端就开始受冻；在-20℃时，根茎以上的整个地上部分将受冻死亡，不耐积水，在这种情况下，会加速凋萎落叶，乃至死亡[73]。因此适合在阳光充足、疏松膏腴、排灌良好的地方栽培，广泛分布在热带、亚热带、地中海环带和具备地中海气候的地区[74]。无花果原产于地中海沿岸及西南亚的多个国家[75]，唐代时期自波斯传入，在我国，南北方均有栽培，无花果主要种植在山东、新疆、广西、江苏、陕西、四川、甘肃等地区，新疆南部尤其之多[76]。
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2 无花果不同部位水提物对菘蓝种子萌发和幼苗生长影响
2.1 材料和方法
2.1.1 试验材料
化感作用是植物主要通过雨雾淋溶、自然挥发、根系分泌和植株残体分解向环境释放的一些化学物质，这些化学物质一般是植物的次生代谢产物，进而对自身或周围的植物产生直接或间接的促进或抑制作用。化感效应在自然和农业生态系统中都发挥着非常重要的作用[97]。近年来，对植物化感作用的研究已经引起了全世界科学家越来越多的关注。无花果的营养价值[98]、药用价值[99]和经济价值[100]已经得到了充分的肯定，目前，我国无花果的利用主要集中在其果实，除了果实外的其他部位却常常没有得到充分利用，为了判断无花果不同部位产生和释放次生代谢产物的能力，研究其对菘蓝这种药用植物的化感作用尤为重要，为充分利用无花果资源和提高菘蓝产量提供理论基础和解决途径。
经东北林业大学赵春建教授鉴定，无花果(Ficus carica Linn.)植株品种为布兰瑞克，采自山东省荣成市成山镇，参考标本来自东北林业大学植物标本馆，标本编号为029002011001001。
经东北林业大学赵春建教授鉴定，菘蓝(Isatis indigotica Fort.)种子的品种为小叶菘蓝，采购于山东省荣成市成山镇药材市场，参考标本来自内蒙古自治区中医药研究所，标本编号为IATM0002552。
2.1.2 试验仪器及试剂
本章试验所需仪器见表2-1。
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2.2 结果与讨论
2.2.1 无花果根茎叶水提液对菘蓝种子萌发的影响
种子萌发是一个植物生命周期中最敏感和最重要的阶段，无花果不同部位水提液对菘蓝种子萌发的影响随水提液浓度和时间的变化而有所差异，但总体趋势相近，在第9天发芽结束，结果见表2-2所示。从表中可以看出，与对照相比，除了无花果茎水提液浓度25.00 g/L处理组之外，其余处理组对菘蓝种子萌发均起到不同程度的抑制作用。对照组的发芽率为60.00%，无花果根不同浓度水提液对菘蓝种子发芽率的影响在不同浓度间差异显著(P<0.05)，且随浓度的增加，这种促进作用逐渐转变成抑制作用，抑制了种子的萌发，当浓度达到最高50.00 g/L时，菘蓝种子的萌发率仅有26.25%，与对照组相比降低了33.75%；无花果茎水提液发芽率最高的处理组为25.00 g/L，前8天发芽率均小于对照组，但于第9天超过对照组，发芽率为66.25%，与对照组相比提升了6.25%，这表明无花果茎中可能存在促进菘蓝种子萌发的化感物质；无花果叶不同浓度水提液处理的菘蓝种子萌发率符合“低促高抑”的浓度效应，浓度为50.00 g/L的无花果叶水提液对菘蓝种子萌发率抑制作用最强，发芽率平均值为50.50%，各浓度处理组差异显著(P<0.05)，但总体来看，无花果根水提液各处理组较无花果叶水提液各处理组的抑制作用更显著，无花果不同部位水提液对菘蓝种子萌发的化感作用降序为：茎>叶>根，无花果不同部位的化感作用强度不同，可能是由于植物中化感物质的合成和释放途径不同所致[101]。
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3 无花果叶化感物质的分离与初步鉴定 .............................. 17
3.1 材料和方法 ..................................... 17
3.1.1 试验材料 .................................. 17
3.1.2 试验仪器及试剂 ......................... 17
4 无花果潜在化感物质的作用验证 .......................... 37
4.1 材料和方法 ................................... 37
4.1.1 试验材料 ................................... 37
4.1.2 试验仪器及试剂 ..................... 37
结论 ........................... 53
4 无花果潜在化感物质的作用验证
4.1 材料和方法
4.1.1 试验材料
同3.1.1
4.1.2 试验仪器及试剂
本章试验所需仪器见表4-1。
药学论文参考
磷酸氢二钠：分析纯，西陇化工股份有限公司；磷酸二氢钠：分析纯，恒兴化学试剂制造有限公司；过氧化氢溶液：分析纯，天力化学试剂有限公司；愈创木酚：分析纯，上海试一化学试剂有限公司；甲硫氨酸：分析纯，上海蓝季生物有限公司；乙二胺四乙酸二钠 (EDTA-Na2)：分析纯；氯化硝基四氮唑蓝：分析纯；瑞金特化学品有限公司；核黄素：分析纯，纳川生物技术工作室；三氯乙酸：分析纯，富宇精细化工有限公司；硫代巴比妥酸：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；95%乙醇：分析纯，连云港鑫瑞洁医药咨询有限公司；丙酮：分析纯，天津渤海化工股份有限公司；补骨脂素：纯度≥98%，Sigma公司；佛手柑内酯：纯度≥98%，Sigma公司；伞形花内酯：纯度≥98%，Sigma公司。
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结论
本试验以菘蓝种子和幼苗为化感受体，制备无花果水提液，研究了无花果不同部位不同浓度水提液对菘蓝种子萌发和幼苗生长的化感作用，并对无花果叶水提液乙酸乙酯部位中的化感物质进行初步分离和鉴定，以及对其进行生物测定，得出以下主要结论：
(1)25.00 g/L无花果茎水提液对菘蓝种子萌发促进作用最强，无花果根和叶水提液对菘蓝种子萌发表现出一定程度的化感抑制作用，且抑制作用强度随浓度的升高而增加，种子萌发进程减慢，其中无花果根水提液的抑制作用强于叶水提液，无花果不同部位水提液总体对菘蓝种子萌发的化感作用由大到小排序为：茎>叶>根。
(2)无花果不同部位水提液对菘蓝幼苗生长的影响存在差异，无花果叶水提液对菘蓝幼苗苗高表现为“低促高抑”的浓度效应，无花果不同部位水提液总体对菘蓝幼苗生长的促进作用由大到小排序为：叶>茎>根。
(3)使用梯度萃取法，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对无花果叶水提液进行萃取，以菘蓝组培幼苗为受体进行不同极性段的生物测定，结果表明，无论是出苗率、地上地下鲜重、总叶面积、苗高和根长，乙酸乙酯萃取相均表现出显著的化感促进作用，其次是石油醚相，而正丁醇相表现出显著的抑制作用。
(4)鉴定出无花果叶水提液乙酸乙酯部位中的三种潜在化感物质：补骨脂素、佛手柑内酯和伞形花内酯。
参考文献（略）