关于慢性乙型肝炎患者血清基质金属蛋白酶 2及其组织抑制因子的变化及临床意义

【摘要】 　　目的： 观察血清基质金属蛋白酶2（MMP2）及其组织抑制因子（TIMP2）与慢性乙型肝炎患者肝纤维化程度的相关性. 方法： 用ELISA方法检测60例慢性乙型肝炎患者的血清MMP2和TIMP2的含量，并与20例健康人员作对比，分析二者与患者肝纤维化程度之间的关系. 结果： 慢性乙型肝炎重度患者血清MMP2和TIMP2的水平分别较对照组、慢性乙型肝炎轻、中度升高（P&<0.05）；而慢性乙型肝炎轻、中度患者的MMP2和TIMP2水平与对照组比较无统计学差异（P&>0.05）. 慢性乙型肝炎轻、中度患者的MMP2， TIMP2比较无统计学差异（P&>0.05）. 血清MMP2， TIMP2水平分别与肝纤维化程度有相关，二者的相关系数r值分别为0.851， 0.623，P值均&<0.01. 结论： 患者血清中MMP2， TIMP2水平随慢性乙型肝炎病情的加重而升高，并与肝纤维化程度有相关.
【关键词】 明胶酶A；金属蛋白酶2组织抑制剂；肝炎，乙型，慢性
　　【Abstract】 AIM: To investigate the relationship of the levels of serum matrix metalloproteinase2 (MMP2) and tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2) with hepatic fibrosis degree in patients with chronic hepatitis B. METHODS: Serum levels of MMP2 and TIMP2 were measured by ELISA in 60 patients with chronic hepatitis C and 20 healthy controls.　　 RESULTS: The serum MMP2 and TIMP2 levels were significantly increased in severe chronic hepatitis B， but not in mild and moderate chronic hepatitis B. There was no significant difference in the serum MMP2 and TIMP2 levels between the patients with mild and moderate chronic hepatitis. The levels of serum MMP2 and TIMP2 showed a positive correlation with the degree of hepatic fibrosis (r=0.851， 0.623， P&<0.01). CONCLUSION: Serum MMP2 and TIMP2 levels are significantly increased in chronic hepatitis B and have a good correlation with hepatic fibrosis.
　　【Keywords】 gelatinase A; tissue inhibitor of metalloproteinase2 (TIMP2); hepatitis B， chronic
　　0引言
　　慢性乙型肝炎后，易发生肝纤维化，进而发展为肝硬化、肝癌. 目前的研究表明，基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制剂（TIMPs）可调节肝细胞外基质（ECM）的代谢，肝纤维化的发生就是由于ECM合成增多，降解减少而在肝内过度沉积所致［1-4］. 其中，MMPs促进ECM降解，而TIMPs通过抑制MMPs阻止ECM的降解从而促进肝纤维化. 肝脏MMPs的活性受抑，同时TIMPs的功能活性增强，导致了细胞外基质的降解减少. 肝纤维化时，在ECM降解过程中起主要作用的MMPs是MMP1， MMP2， MMP3， MMP9［5］，其中MMP2与肝纤维化的关系较为密切. 因此，本实验我们观察了60例慢性乙型肝炎患者及20例健康人员MMP2和TIMP2血清水平的变化，探讨其与肝纤维化程度的相关性.
　　1对象和方法
　　1.1对象
　　慢性乙型肝炎组 60（男30，女30）例，年龄(35.6±13.7)岁，均为我院200201/200701住院及门诊患者，所有病例均被我院临床明确诊断为慢性乙型肝炎患者，符合1995年北京全国病毒性肝炎会议制定的诊断标准（包括体征、超声、生化系列检测、血清抗HBsAg为阳性）. 正常对照组20例，均系健康体检者，无心、肝、肺、肾等重要脏器疾患，肝、肾功能试验正常，HBsAg为阴性.
　　1.2方法
　　1.2.1 血样标本
　　采集所有实验对象均采取空腹静脉血后，立即分离血清，-20℃保存待测.
　　1.2.2肝活检方法及病理诊断标准
　　每例患者在穿刺前，均行B超定位检查. 采用1s肝穿刺活检法，使用16G活检针，由配套活检枪行经皮肝穿术，取肝组织标本送病检，连续切片，分别做HE及网状纤维染色，病理炎症分级按照1995年国家卫生部制订的《病毒性肝炎防治方案》的病理诊断标准判断. 60例均有不同程度的炎症反应及不同程度的纤维化或肝硬变.
　　1.2.3血清MMP2和TIMP2测定
　　均采用ELISA方法检测（试剂购自USA R＆D Systems Inc）. 按试剂盒说明书操作.
　　统计学处理：各指标以x±s表，示用统计软件SPSS12.0进行统计学处理，各组均数比较用方差分析及LSDt检验. MMP2， TIMP2分别与肝纤维化分期作相关性分析.
　　2结果
　　在不同炎症活动度下，慢性乙型肝炎组与正常对照组的血清MMP2， TIMP2水平比较见表1. 可见慢性乙型肝炎重度患者的血清MMP2， TIMP2含量与正常对照组比较，有统计学差异（P&<0.05）. 慢性乙肝轻、中度患者的血清MMP2， TIMP2含量与对照组比较，无统计学差异（P&>0.05）. 慢性乙肝轻、中度患者的血清MMP2， TIMP2含量的比较亦无统计学差异（P&>0.05）. 表1正常组与患者肝组织炎症活动度与血清MMP2， TIMP2水平的关系 （略）
　　在不同肝纤维化程度下，慢性乙型肝炎组与正常对照组的血清MMP2， TIMP2水平比较见表2. 慢性乙型肝炎患者随肝纤维化程度的加重，其MMP2， TIMP2的血清水平逐渐升高，且升高幅度不断加大，与正常对照组比较有统计学差异（P&<0.01）. 通过相关性分析发现，MMP2， TIMP2的血清水平与肝纤维化程度的相关系数r分别为0.851， 0.623，P值均&<0.01，具有一定的正相关性.
　　3讨论
　　各种慢性肝病患者均会逐渐出现不同程度的肝纤维化，进而向肝硬化发展. 肝纤维化的实质［6-9］是以Ⅰ， Ⅲ型胶原为主的细胞外基质(ECM)合成与降解失衡，导致ECM在肝内过度沉积. 基质金属蛋白酶类(MMPs) 和金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)的平衡在ECM的合成与降解中发挥着重要的作用.表2正常组与患者在不同肝脏纤维化程度下血清MMP2， TIMP2的含量（略）
　　MMPs［10］是一类含有Zn2+的肽链内切酶，几乎能水解所有的细胞外基质. 迄今为止，MMPs 家族中已发现有26 个成员，但它们的降解底物及功能各不相同. TIMPs则是近年被发现的一组能够特异性抑制MMPs活性的蛋白质，其家族成员有4个，分别命名为TIMP1， TIMP2， TIMP3， TIMP4，均为小分子多肽. TIMPs分为N端和C端两个功能区，前者的半胱氨酸残基与MMPs的Zn2+活性中心结合，后者与MMPs的其他部位结合，以1∶1 非共价结合的形式构成MMPs TIMPs复合体，从而阻断MMPs与其底物结合，是一种转录后调节机制. 在正常肝脏中MMPs 和TIMPs 处于平衡的状态，两者共同维护肝脏的微环境稳态，一旦有致病因子打破这种平衡，便会促进肝纤维化的发生. MMP2， MMP9 和MMP3对正常肝脏基质有降解活性［11］. 其中MMP2的特异性底物为Ⅳ型胶原，TIMP2调节MMP2的活性，故MMP2， TIMP2在肝纤维化的发生、发展过程中起重要作用. 所以，对MMP2及其抑制物TIMP2在肝纤维化病理损害中的变化过程进行分析是很有必要的.

　为此，我们在本实验中对60例慢性乙型肝炎患者血清MMP2， TIMP2水平与炎症活动度及肝纤维化程度的关系进行了考察，结果发现，慢性乙型肝炎重度患者的MMP2，TIMP2血清水平高于正常对照组，有统计学意义（P&<0.05）. 并且随着患者肝纤维化程度的加重，MMP2，TIMP2的血清含量逐渐升高，幅度不断加大，相关性分析说明二者与肝纤维化程度呈明显的正相关. 可见，MMP2，TIMP2血清水平不仅可以作为肝纤维化的诊断指标之一，还可用于判断慢性乙型肝炎病情轻重，在此领域具有一定的临床意义.

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