关于Th1/Th2在乳腺癌组织中的表达与意义

【摘要】 　　目的： 探讨Th1类细胞因子IL2， IFNγ及Th3类细胞因子IL4和IL10在青年和老年乳腺癌组织中的表达模式. 方法： 采用免疫组化方法检测105例良恶性乳腺组织中IL2， IFNγ， IL4， IL10的表达，并比较其阳性表达率和程度的差异. 结果： 青年组与老年组乳腺癌组织中Th1类细胞因子IL2， IFNγ阳性表达率较乳腺纤维瘤组显著降低，Th3类细胞因子IL4和IL10阳性表达率较乳腺纤维瘤组升高，差异有统计学意义（P&<0.01）. IL2的表达水平在青年组与老年组随乳腺癌临床分期的增加而降低（P&<0.05），青年组IL2的表达水平低于老年组，差异有统计学意义（P&<0.01）；在青年组和老年组中腋窝淋巴结阳性组IL4的表达水平均明显高于淋巴结阴性组（P&<0.01）. 结论： 乳腺癌癌组织中呈现Th3型免疫反应优势状态， Th1/Th3平衡向Th3方向漂移. 在青年乳腺癌组织中Th1/Th3的比值更低. 这可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸，从而导致肿瘤的发生或者转移的原因之一. IL2和IL4联合检测对评价患者机体免疫水平、判断预后具有重要意义.
【关键词】 乳腺肿瘤；白细胞介素2；干扰素Ⅱ型；白细胞介素4；白细胞介素10
　　【Abstract】AIM: To explore the expressions of Th1 type cytokines IL2， IFNγ and Th3 type cytokines IL4， IL10 in　　breast carcinoma tissues of young and old human subjects. METHODS: The expressions of IL2， IFNγ， IL4 and IL10 were detected by immunohistochemistry in 105 benign and malignant breast tissues， and the difference in the rate and intensity of positive expressions of IL2， IFNγ， IL4 and IL10 were checked. RESULTS: The positive rates of Th1 type cytokines IL2， IFNγ in breast carcinoma tissues were lower than those in breast fibroadenoma tissues， while the positive rates of IL4 and IL10 were higher than those in breast fibroadenoma tissues， and the differences were statistically significant (P&<0.01). The positive rate of IL2 was decreased with the increasing of clinical staging in breast carcinoma tissues(P&<0.05)， and it was lower in young human than in old human subjects， with significant difference between them(P&<0.01). There was higher expression of IL4 in the metastasis of lymph node than in the nonmetastasis of lymph node of breast carcinoma(P&<0.01). CONCLUSION: The expression of Th1 cytokines are inhibited with a concomitant predominant state of Th3 cytokines in tumor tissues from breast cancer patients. The balance between Th1 and Th3 shifts to the direction of Th3， and that shift is more obvious in young breast carcinoma tissues. It may be one reason for immune escape of tumor cells that induces the development and metastasis of tumor. It is of important significance to detect IL2 and IL4 levels together， which facilitates evaluating the immune levels and judging the prognosis of the patients with breast cancer.
　　【Keywords】 breast neoplasms; interleukin2; interferon typeⅡ; interleukin4; interleukin10
　　0引言
　　乳腺癌患者外周血中CD4＋/CD8＋比例的变化，对乳腺癌组织中Th1/Th3类细胞因子的漂移以及不同年龄、不同分期、不同病理乳腺癌组织中Th1/Th3类细胞因子的漂移的变化尚无系统报道. 我们以IL2， IFNγ代表Th1类细胞因子，以IL4和IL10代表Th3类细胞因子，应用免疫组化检测43例青年乳腺癌、52例老年乳腺癌和10例乳腺纤维腺瘤组织中Th1/Th3类细胞因子的表达模式.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　收集199801/200212在重庆医科大学附属第一医院普外科手术的存档蜡块105例，其中乳腺癌95例. 青年乳腺癌组43例，临床分期Ⅰ期4例，Ⅱ期23例，Ⅲ期12例，Ⅳ期4例. 年龄26～34.9岁，平均31.9岁. 老年乳腺癌组52例，临床分期Ⅰ期5例，Ⅱ期23例，Ⅲ期20例，Ⅳ期4例. 年龄60～82岁，平均68.2岁. 10例乳腺纤维腺瘤石蜡包埋组织标本，患者年龄28～45，平均36岁，所有患者均为女性. 乳腺癌和乳腺纤维腺瘤的病理诊断参照肿瘤病理学［1］的标准. 乳腺癌临床分期根据美国癌症研究联合会(AJCC)癌症分期手册 (6版)［2］为标准. IL2， IL4， IL10， IFNγ兔抗人多克隆抗体购自武汉博士得生物工程有限公司. 免疫组化SP试剂盒购于北京中山生物技术有限公司.
　　1.2方法
　　1.2.1IL2， IL4， IL10及IFNγ表达检测
　　采用免疫组化二步法，以TBS代替一抗做空白对照. 免疫组化染色方法参照SP试剂盒说明，基本步骤：石蜡切片脱蜡至水；加过氧化酶阻断溶液(试剂A)；加非免疫性动物血清(试剂B)；加入一抗；加生物素标记第二抗体(试剂C)：加链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶溶液(试剂D)：加DAB溶液，苏木素复染，中性树胶封固. 每步骤间PBS冲洗3次.
　　1.2.2结果判定IL2， IL4， IL10及IFNγ在DAB显色后以细胞内出现棕黄色或棕黄色颗粒为阳性. 参照shimizu方法，依据染色阳性细胞所占细胞总数的百分数评分（A）：阳性细胞数为零者为0分，&<30％为1分，30％～60％为2分，&>60％为3分；按染色强度评分（B）：无色为0分，弱染色为1分，中染色为2分，强染色为3分；总分（A+B）≥3分为阳性表达，&<3分为阴性表达.
　　
　　统计学处理： 使用SPSS11．0软件系统，计数资料进行χ2检验或Fishers确切概率法检验，P&<0.05为差异有统计学意义.
　　2结果
　　2.1乳腺癌组织中Th1/Th3类细胞因子95例乳腺癌组织中Th1类细胞因子IL2阳性表达33例（34.74%），IFNγ阳性46例（48.42%），均较乳腺纤维瘤对照组明显降低（P&<0.01）；Th3类细胞因子IL4阳性84例（88.42%），IL10阳性表达86例（90.53%），两者均较对照组明显升高，差异有统计学意义（P&<0.01，图1，表1）.表1IL2， IFNγ， IL4， IL10在乳腺癌与纤维瘤组织中表达水平(略)

　　2.2乳腺癌组织中Th1/Th3类细胞因子水平与临床TNM分期IL2在青年组及老年组乳腺癌组织中的阳性表达水平在临床TNM分期之间有随着病情的进展呈下降的趋势，差异有统计学意义（P&<0.05），但在青年组Ⅱ期和Ⅲ期之间差异无统计学意义（P&>0.05），尤以Ⅰ期与其他各期的差别显著（P&<0.01）. IFNγ表达水平在青年组各临床TNM分期之间无明显差异：在老年组主要是Ⅳ期较其它各期降低显著（P&<0.05）. IFNγ在两组患者腋窝淋巴结阴性阳性的表达之间无显著差异. IL4， IL10在两组临床TNM分期之间虽然随着病程的进展有升高的趋势，但是差异无统计学意义. 青年组中IL2， IL4， IL10在腋窝淋巴结阳性组的表达水平明显高于腋窝淋巴结阴性组（P&<0.01）；老年组中仅有IL4在腋窝淋巴结阳性组的表达水平明显高于腋窝淋巴结阴性组（P&<0.01，表2，3）. 表2IL2， IFNγ， IL4， IL10在青年乳腺癌中的表达水平与临床TNM分期(略)表3IL2， IFNγ， IL4， IL10在老年乳腺癌中的表达水平与临床TNM分期(略)
　　青年组IL2的表达水平较老年组明显降低（P&<0.01），IFNγ虽然在老年组表达水平高于青年组，但差异无显著性（P&>0.05）；IL4， IL10表达在两组表达水平无明显差异（表1）.
　　3讨论
　
　　Th1细胞分泌IL2，IFNγ 和TNFα等细胞因子，主要介导细胞免疫反应和迟发型超敏反应；Th3细胞分泌IL4和IL10等细胞因子，主要介导体液免疫反应［3-5］. 当某些因素导致其失衡时，Th0即可向Th1或Th3转化，并导致机体免疫紊乱，诱发一系列的病理变化，其中包括肿瘤的发生与发展［6］.
　　本研究结果发现乳腺癌组织中表达Th1型细胞因子的CD4+T细胞比例较对照组明显降低，表达Th3型细胞因子的CD4+T细胞比例比对照组升高. 提示乳腺癌患者Th1型反应模式占弱势状态，相对地Th3型反应模式处于优势状态，Th1/Th3平衡失调，Th1/Th3平衡向Th3方向漂移. 与此同时，癌组织中Th1类细胞因子表达水平随着肿瘤临床TNM分期的增高而降低，并且在青年乳腺癌患者中，这种趋势更明显. 提示乳腺癌患者由于Th1细胞受到抑制，细胞免疫功能不能有效地激活，抗肿瘤免疫能力下降，从而不利于机体组织以细胞免疫为主的抗肿瘤免疫反应，使肿瘤细胞得以生存发展. 实验发现乳腺癌患者发病年龄越晚，淋巴结转移少，临床TNM分期早，组织中IL2表达水平高，IL4呈现低表达状态. IL2， IFNγ是最重要的Th1类细胞因子，很多研究表明，在恶性肿瘤患者体内及肿瘤组织内呈现低水平表达状态［7-8］. 在对不同分期肿瘤患者研究时发现，在Ⅰ期乳腺癌组织内，Th1类细胞因子IL2的表达水平要高于其它各期，提示在乳腺癌的早期阶段Th1类细胞因子发挥了肿瘤免疫功能；但随肿瘤发展，机体的Th1/Th3平衡紊乱呈现典型的Th3漂移. 　　
　　青年乳腺癌在临床较为少见，一般认为其有较强的侵袭性，病情发展快，腋窝淋巴结转移率高，预后不良［9］. 本组研究中，青年乳腺癌组织中IL2的表达较老年组明显降低，这说明Th1/Th3的漂移在青年乳腺癌患者中更显著，IL2阴性表达的乳腺癌具有更强的侵袭性和转移能力，预后差.
【

参考文献

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