Smad4和转化生长因子β受体Ⅱ在宫颈腺癌中的表达及意义

【摘要】 目的： 研究Smad4和转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)在宫颈腺癌中的表达及其与临床病理的相关性，探讨其作为宫颈腺癌预后判断分子指标的可能性。方法： 免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)检测36例宫颈腺癌组织中Smad4和TβRⅡ的表达，以 20例正常宫颈腺上皮组织作为对照，对Smad4和TβRⅡ的表达与宫颈腺癌临床病理参数的关系进行分析。结果： Smad4和TβRⅡ在宫颈腺癌中的表达显著低于正常宫颈腺上皮组织(P&<0.05)，在低分化癌中的表达率显著低于中高分化癌(P&<0.05)，在有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组(P&<0.05)。Smad4和TβRⅡ的表达相关。结论： Smad4和TβRⅡ的表达缺失与宫颈腺癌的发生、分化程度及转移有关。Smad4和TβⅡ的低表达可能作为判断宫颈腺癌恶性程度和转移的标记，Smad4和TβRⅡ联合检测能作为一种有效的肿瘤标记物用于宫颈腺癌患者预后的评估。

【关键词】 Smad4; 转化生长因子β受体Ⅱ; 宫颈腺癌; 诊断

　　[Abstract] Objective: To study the correlation of the expression of Smad4 and TGFβ receptor Ⅱ( TβRⅡ) with clinical pathology in cervical adenocarcinoma， and to explore its possibility as a marker to decide the prognosis of cervical adenocarcinoma.Methods： To detect the expression of Smad4 and TβRⅡin 36 cases of cervical adenocarcinoma and 20 cases of normal cervical glandular epithelium tissue and to investigate the relation between the expression of Smad4 with TβRⅡand clinical pathology. Results： The expression of Smad4 and TβRⅡin cervical adenocarcinoma is significantly lower than normal cervical glandular epithelium tissue(P&<0.05).The expression of Smad4 and TβRⅡin cervical adenocarcinoma with poor differentiated was significantly lower than that of moderate or well differentiated(P&<0.05).The expression of Smad4 and TβRⅡis significantly lower in cervical adenocarcinoma with metastatic lymph nodes than in the tissue with no metastatic lymph nodes(P&<0.05).The expression of Smad4 and TβRⅡ was significantly related with clinical stage(P&<0.05). Conclusion： The deleted expression of Smad4 and TβRⅡ was associated with development， advanced， differentiated and metastasis in cervical adenocarcinoma.Smad4 and TβRⅡmay be a marker for differentiated and metastasis of cervical adenocarcinoma.To detect Smad4 and TβRⅡmay be a useful tumor marker to decide the prognosis of cervical adenocarcinoma.

　　[Key words] Smad4; TGFβ receptor Ⅱ ; cervical adenocarcinoma; prognosis

　　宫颈腺癌近年来在宫颈癌中所占的比例明显增高[1]，宫颈腺癌较宫颈鳞癌更易于发生转移，预后差[2]。其主要死亡原因是术后复发和转移。临床尚无可靠方法做到早期预测。因此，对宫颈腺癌复发和转移等预后指标的生物学标志物的研究有非常重要的意义。转化生长因子βⅡ型受体(TβRⅡ)可直接结合转化生长因子β(TGFβ)参与细胞增殖分化、血管形成、肿瘤发生等多种生物学过程。Smad4是TGFβ信号转导通路中重要的调控因子，活化的TβR与Smad结合成寡聚物，将TGFβ的信号传递至细胞核内，调节靶基因的转录并诱导下游基因的表达[3]。本研究用免疫组化法检测Smad4和TβRⅡ在宫颈腺癌组织中的表达，探讨Smad4和TβRⅡ在宫颈腺癌组织中表达情况及其相关性，结合临床及病理资料探讨其在评价宫颈腺癌预后中的意义。

　　1 对象与方法

　　 1.1 对 象

　　收集2006年1月至2008年12月共3年间在镇江地区各二级及以上医院收治的宫颈腺癌患者术后存档蜡块共36例，选取同期正常宫颈腺上皮组织20例作为对照。肿瘤组织学类型、分化程度由两位病理专家根据HE染色判断。两组间年龄构成比差异无统计学意义(P&<0.05)。所有病例术前均未行放、化疗。根据WHO标准按分化程度分为高、中分化癌20例，未、低分化癌16例。23例手术标本有淋巴结转移，13例无淋巴结转移。临床分期采用国际妇产科协会(FIGO)标准，其中Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期22例。

　　1.2 试剂与方法

　　浓缩型Smad4和TβRⅡ单克隆抗体、SP超敏试剂盒及DAB酶底物显色试剂盒均购自北京中山生物技术有限公司。采用SP免疫组化法，方法按试剂盒说明进行。Smad4按照1∶50稀释，TβRⅡ按照1∶100稀释。石蜡组织2～3 μm厚度切片，高温高压抗原修复，柠檬酸修复，一抗4℃冰箱过夜，孵育约16 h左右，用试剂公司提供的阳性片做阳性对照，PBS代替一抗做阴性对照，苏木素复染。

　　1.3 结果判定

　　在双盲法下进行结果判定，Smad4蛋白表达定位于细胞质内，也可出现于胞核内，TβRⅡ蛋白表达定位于细胞质内，出现淡黄色、棕黄色、棕褐色颗粒为阳性表达。每张切片在高倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，着色强度分为无着色(-)为0分，浅黄色(+)为1分，黄色及棕黄色(++)为2分。阳性细胞数&<10%为0分， 10%～50%为1分，&>50%为2分。两项得分相加结果≥2分记为阳性[3]。

　　1.4 统计方法

　　运用SPSS11.5软件，采用χ2检验、四格表确切概率法进行统计分析。取双侧α=0.05为检验水准。

　　2 结 果

　　2.1 正常宫颈腺上皮组织、宫颈腺癌中Smad4与TβRⅡ的表达

　　见表1。Smad4和TβRⅡ在正常宫颈腺上皮组织中的表达率高于宫颈腺癌组织，差异有统计学意义(χ2=12.59， P&<0.05， χ2=15.19， P&<0.05)。表1 正常宫颈腺上皮组织、宫颈腺癌中Smad4与TβRⅡ的表达

　　2.2 宫颈腺癌中Smad4，TβRⅡ的表达与临床病理学参数的关系

　　见表2。Smad4和TβRⅡ的阳性表达率在高、中分化癌组高于未、低分化癌组，差异有统计学意义(P&<0.05)。Smad4 和TβRⅡ阳性表达率在无淋巴结转移组阳性率高于有淋巴结转移组，差异有统计学意义(P&<0.05)。Smad4 和TβRⅡ在Ⅰ期+Ⅱ期组中阳性率高于在Ⅲ期+Ⅳ期组，差异有统计学意义(P&<0.05)。

　　2.3 宫颈腺癌中Smad4，TβRⅡ表达的关系

　　见表3。27例Smad4蛋白表达阳性标本TβRⅡ阳性24例，29例Smad4蛋白表达阴性标本TβRⅡ阴性22例，两者明显相关(χ2=23.71， P&<0.01)。表2 宫颈腺癌中Smad4，TβRⅡ的表达与临床病理学参数的关系表3 正常宫颈腺上皮组织、宫颈腺癌中Smad4和TβRⅡ表达的关系

　　3 讨 论

　　Smad4基因是位于18号染色体长臂上，编码一种552个氨基酸的蛋白，Smad4蛋白是TGFβ信号转导系统中的关键因子。近年来研究证实Smad4与恶性肿瘤的发生发展、浸润、转移有密切关系。TGFβⅡ型受体TβRⅡ是一种存在于细胞膜表面的跨膜糖蛋白，相对分子质量75 ku，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族，包括配体结合部、跨膜区域、蛋白激酶部。TGFβ的多种生物学功能都由其相应的受体介导，磷酸化后被激活的受体可进一步激活细胞质内的Smads 蛋白，调节靶基因的转录，控制细胞生长、分化和凋亡， 其中Smad4是其胞内重要传导成分[4]。这一通路中的任一环节异常都将导致细胞异常增殖，而Ⅱ型受体和Smad4是TGFβ信号传导系统中最为关键的部分。研究表明[5]，在多种肿瘤都有TβRⅡ和(或)Smad4基因缺失，点突变或者功能性灭活。

　　有研究证实[6]，Smad4在胰腺癌中缺失和突变率为50%，并存在TGFβ抵抗。Ijichi等[7]对11种结肠癌细胞系TGFβSmad通路研究发现，91%的细胞系存在TβRⅡ和Smad4的失活导致该通路的受损。Xie等[8]对瑞典600多份结肠癌标本研究提示Smads基因的不表达与肿瘤进展、淋巴结转移和生存时间较短有关。Kim等[9]研究表明，在胃癌中Smad4阳性表达者肿瘤多数分化好、生长速度慢、侵袭和转移能力弱，预后较好。研究认为Smad4的失活一般发生在肿瘤进展的后期，属于晚期分子事件。Zhou等[10]研究了64例子宫内膜癌的染色体缺失图谱，发现20例存在第18染色体的杂合性缺失，14例存在Smad4基因片段的纯合性缺失，6例发生Smad4的转录异常。而在国内未见有宫颈腺癌中Smad4和TβRⅡ表达情况的报道。我们发现Smad4 和TβRⅡ在有淋巴结转移的宫颈腺癌中的阳性率明显低于无淋巴结转移组， 在临床分期ⅢⅣ期的宫颈腺癌中的阳性率明显低于ⅠⅡ期，提示Smad4和 TβRⅡ表达缺失对促进宫颈腺癌细胞侵袭及淋巴结转移具有重要作用。作用机制可能为TβRⅡ及Smad4的表达受到阻遏，使得TGFβ信号传导系统在多个部位阻断，无法介导TGFβ的生长抑制效应，从而促进肿瘤的发生发展。

　　在本研究中， Smad4和 TβRⅡ在宫颈腺癌中的表达率均明显低于正常宫颈腺上皮组织，两者表达明显相关，且其表达情况与宫颈腺癌分化程度、淋巴结转移及临床分期有关。因此， Smad4和 TβRⅡ的表达缺失可能与宫颈腺癌的恶性程度及转移潜能有关。综上所述，Smad4和 TβRⅡ联合检测能作为一种有效的肿瘤标记物用于宫颈腺癌患者预后的评估。

参考文献

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　　[9] Kim MA， Lee HS， Yang HK，et al.Clinicopathologic and protein expression differences between cardia carcinoma and noncardia carcinoma of the stomach[J].Cancer， 2005， 103(7): 1439-1446.

　　[10] Zhou Y，Kato H，Shan D，et al.Involvement of mutations in the DPC4 promoter in endometrial carcinoma development[J].Mol Carcinog，1999，25(1):64-72.