肺癌组织中树突状细胞浸润和mP53表达的关系及临床意义

　　　　作者：陈宇平 穆传勇 朱晔涵 王一江 宋丽丽 黄建安

【摘要】 目的： 探讨非小细胞肺癌组织中突变型P53(mutant P53，mP53)表达和树突状细胞(dendritic cell，DC)浸润的关系及临床意义。方法： 采用免疫组化染色检测经外科手术切除的60例非小细胞肺癌组织中mP53，CD1α，CD83阳性细胞的表达。结果： 肺癌组织中可检测到mP53阳性肿瘤细胞及CD1α，CD83阳性DC的表达;有淋巴结转移组中mP53及CD1α表达率明显高于无淋巴结转移组(P&<0.05)。ⅢⅣ期组中CD1α阳性DC表达率明显高于ⅠⅡ期(P&<0.05);mP53阳性肺癌组织中CD83阳性DC表达率明显减少，而CD1α阳性DC表达率明显增加，与mP53阴性组相比差异有统计学意义(P&<0.05)。结论： 肺癌组织中mP53表达与肺癌组织中浸润树突状细胞的成熟状态密切相关，在肺癌的免疫逃逸和疾病进展过程中起着重要作用。

【关键词】 肺癌; 树突状细胞; 突变型P53

　　[Abstract] Objective: To explore the relationship between dendritic cell infiltration and mP53 expression in nonsmall cell lung cancer and its clinical significance.Methods： Immunohistochemical staining was performed to detect expression of CD1α，CD83，mP53 in 60 lung cancer tissues. Results： mP53 positive tumor cells and CD1α，CD83 positive DC can be detected in lung cancer tissues.Expression rate of mP53 positive tumor cells and CD1α positive DC in tumor tissues with lymph node metastases were higher than those without lymph node metastases. CD1α expression in tumor tissues of stage ⅢⅣ were higher than those of stage ⅠⅡ.Expression rate of CD83 in tumor tissues of mP53 positive group were lower than those of negative group while CD1α were higher.All above differences were statistically significant(P&<0.05). Conclusion： There is a close relationship between mP53 and maturation of DC infiltration.mP53 may participate in tumor progression of disease and play an important role of tumor immune escape.

　　[Key words] lung cancer; dendritic cell; mutant P53

　　树突状细胞(dendritic cell，DC)是机体内最主要的抗原递呈细胞，在抗肿瘤免疫中起着重要作用。肿瘤宿主存在着不同程度的免疫力低下，与DC数量上的减少及功能上的缺陷关系密切。研究表明，肿瘤细胞存在P53的基因突变，可通过异常蛋白表达抑制树突状细胞成熟而逃脱免疫监视或产生免疫耐受。为此我们运用免疫组化染色观察60例原发性非小细胞肺癌组织中突变型P53(mutant P53，MP53)的表达及CD1α，CD83阳性树突状细胞浸润，探讨非小细胞肺癌组织中mP53蛋白表达和树突状细胞浸润的关系及临床意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材 料

　　随机选取2004年11月至2005年9月吴江市第三人民医院及苏州大学附属第一医院胸外科手术治疗的60例非小细胞肺癌组织作为研究对象。上述标本均经过病理诊断证实，患者术前均未行放疗或化疗。60例肺癌患者中，男44例，女16例，年龄35～72岁，平均(53.9±8)岁。根据1997年国际抗癌联盟(UICC)修订的标准进行TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期27例，Ⅲ期21例(ⅢA期16例，ⅢB期5例)，Ⅳ期3例。组织学分级：高分化6例，中分化35例，低分化19例。病理类型：鳞癌28例，腺癌22例，大细胞癌6例，其他类型4例。送检区域淋巴结癌转移阳性者25例，阴性者35例。

　　1.2 试 剂

　　mP53，CD1α及CD83单克隆抗体和免疫组化SP检测试剂盒均购自武汉博士德生物制品公司。

　　1.3 方 法

　　所有标本均经10%的中性甲醛固定，常规石蜡包埋， 5 μm切片，二甲苯及梯度乙醇脱蜡至水，抗原微波修复，3%h3O2阻断内源性过氧化物酶，PBS洗涤，山羊血清封闭后加入抗mP53，CD1α及CD83单克隆抗体， 4℃过夜，PBS洗涤后依次加入二抗及卵白素过氧化物酶，DAB显色。操作严格按产品说明书进行。滴加PBS液代替一抗作阴性对照，每例标本均用常规HE染色。

　　1.4 免疫组织化学染色结果判断

　　CD1α及CD83阳性细胞均为胞质或胞膜染成棕黄色或棕褐色，染色细胞呈树突状外形，阴性细胞不染色。mP53阳性细胞为细胞核染成棕黄色或棕褐色，细胞质不染色。阳性结果评分判断参照文献[1]方法，①阳性细胞数量评分：0为0%阳性细胞，1为&<25%阳性细胞，2为26%～50%阳性细胞，3为&>50%阳性细胞;②染色强度评分：0为阴性，1为弱阳性，2为中等强度阳性，3为强阳性。阳性细胞百分率+染色强度为综合积分，0～2分为阴性，3～6分为阳性。

　　1.5 统计方法

　　统计数据采用χ2检验，所有结果经过SPSS11.5软件包进行统计分析，多组间比较用方差分析，两组间比较用t检验，P&<0.05表示差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 肺癌组织中mP53，CD1α和CD83的表达情况

　　肺鳞癌和肺腺癌的HE染色结果见图1。mP53为胞核表达棕黄色或棕褐色(图2a，2b)。CD1α及CD83阳性细胞均为胞质或胞膜染成棕黄色或棕褐色，染色细胞呈树突状外形(2c)，阴性细胞不染色(图2d)。其中，CD1α阳性表达23例(38.3%)，CD83阳性表达26例(43.3%)，mP53阳性表达40例(66.7%)。

　　2.2 肺癌组织中mP53，CD83，CD1α 表达与肺癌临床病理参数的关系

　　有淋巴结转移组中mP53及CD1α表达率明显高于无淋巴结转移组(P&<0.05)。ⅢⅣ期组中CD1α阳性DC表达率明显高于ⅠⅡ期(P&<0.05)。mP53，CD83及CD1α与肺癌细胞分化程度及病理类型无明显相关(表1)。表1 肺癌组织中mP53，CD83，CD1α 表达与肺癌临床病理参数的关系例

　　2.3 肺癌组织中mP53表达与CD83，CD1α之间的关系

　　mP53阳性肺癌组织中CD83阳性DC表达率明显减少，而CD1α阳性DC表达率明显增加，与mP53阴性组相比差异有统计学意义(P&<0.05)，见表2。表2 肺癌组织中CD83，CD1α表达与mP53之间的关系例

　　3 讨 论

　　树突状细胞(DCs)是目前已知的最强大的专职抗原提呈细胞， 能够激活静止T细胞，在抗肿瘤免疫应答中处于中心环节。浸润到肿瘤局部的DC称为TIDC(tumor infiltrating dendritic cell)，随着对TIDC研究的进一步深入，发现其抗肿瘤效应与其是否成熟密切相关，只有成熟的TIDC才可以向肿瘤特异性T细胞递呈肿瘤抗原而激活其抗肿瘤活性，未成熟TIDC因不能有效进行抗原递呈而诱导免疫耐受[2]。CD1α和CD83是DC表面两个重要的标记分子，CD1α通常被作为未成熟DC的表面标志，而CD83则是目前发现的人类成熟DC一个最为特异性的表面分子[3]。本研究发现，肺癌组织中可检测到CD1α及CD83阳性细胞表达，在光学显微镜下，阳性细胞呈现较为典型的树突状外形，在肿瘤细胞及基质中散在分布。结果提示肺癌组织中浸润树突状细胞的成熟状态和肺癌的分期及淋巴结转移密切相关，推测肺癌细胞可能通过产生特定的细胞因子而导致树突状细胞的成熟障碍，进而抑制了其抗原递呈及活化T细胞的功能。

　　为进一步探讨肺癌组织中浸润DC成熟障碍的相关抑制因素，我们检测了肺癌组织中mP53蛋白的表达情况。已有研究证实， P53是迄今临床发现与肿瘤相关性最高的抑癌基因，与肺癌关系密切，其功能是参与细胞生长的负调控和抑制肿瘤细胞的生长，与细胞的程序性凋亡密切相关[4]。P53分为野生型和突变型，野生型P53为重要的肿瘤抑制基因，它通过调节细胞生长，监视细胞DNA完整性，诱导DNA损伤和不能修复的细胞发生凋亡。有文献报道50%～80%的非小细胞肺癌具有P53突变[5]，而P53基因突变可使DNA受损诱发的细胞凋亡受到抑制，从而导致细胞持续增殖及恶性肿瘤的发生。野生型P53蛋白半衰期短，表达水平低，常规免疫组化染色很难检测到。P53基因发生突变后丧失了正常功能，半衰期延长，稳定性强，常规免疫组化可以检测到mP53蛋白[6]。我们发现，肺癌细胞高表达mP53蛋白，主要为细胞核表达，特别在生长旺盛的肿瘤组织边缘表达增强。同时，mP53阳性肿瘤细胞数量与肺癌淋巴结转移及临床分期明显相关，晚期及有淋巴结转移的肺癌组织中mP53表达率明显多于早期及无淋巴结转移组。P53基因突变是肺癌发生发展过程中最重要的遗传基础，但mP53蛋白的表达和肺癌的生物学行为之间的关系至今仍不清楚。我们的研究初步发现，在mP53阳性表达的肺癌组织中，CD83阳性树突状细胞表达率明显减少，而CD1α阳性树突状细胞表达率明显增多，提示mP53表达与树突状细胞的成熟状态有密切关系。因此可以推测，肺癌高表达mP53可以导致DC的成熟受到抑制而处于无功能状态，这一现象可能成为肿瘤免疫逃逸的原因之一，而阻断mP53的表达是否可以提高肿瘤微环境中浸润树突状细胞的功能值得进一步研究探讨。

参考文献

　　[1] Volm M， Koomagi R， Mattern J， et al.Prognostic value of vascular endothelial growth factor and its receptor Flt1 in squamous cell lung cancer[J].Int J Cancer，1997， 74(1):64-68.

　　[2] Perrot I， Blanchard D， Freymond N， et al.Dendritic cells infiltrating human nonsmall cell lung cancer are blocked at immature stage[J].J Immunol， 2007，178(5): 2763-2769.

　　[3] Lechmann M， Berchtold S， Hauber J， et al.CD83 on dendritic cells: more than just a marker for maturation[J].Trends Immunol，2002，23(6):273-275.

　　[4] Morgunkova AA，Almazov VP，Strunina SM，et al.Dominantnegative inactivation of p53: the effect of the proportion between transdominant inhibitor and its target[J].Mol Bio(Mosk)， 2003，37(1): 112-120.

　　[5] Lai H，Ma F，Trapido E，et al.Spectrum of p53 tumor suppressor gene mutations and breast cancer survival[J].Breast Cancer Res Treat，2004， 83(1): 57-66.

　　[6] 方 娜，绍 睿，陈德玉.PTTG，cmyc和p53在非小细胞肺癌中的表达及意义[J].江苏大学学报：医学版，2008，18(2):131-134.