关于安心颗粒对阿霉素性心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响

代写论文网：

　　　　　　　　 作者：方显明 韦斌 郎中云 黄孟军

【摘要】 目的: 探讨安心颗粒对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响. 方法: 将50只雌性SD大鼠随机分为对照组(A组)、模型组(B组)、卡托普利组(C组)、安心颗粒小剂量组(D组)、安心颗粒大剂量组(E组)，每组10只. B～E组给予阿霉素腹腔注射造模，C～E组同时灌胃给药. 连续给药6 wk后，用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡，并计算凋亡指数. 结果: A组心肌细胞凋亡指数均比B～E组低（P&<0.01），而B组心肌细胞凋亡指数均较C～E组高（P&<0.05）. 结论: 安心颗粒有抑制心肌细胞凋亡的作用，可用于心力衰竭的防治.
【关键词】 安心颗粒；心力衰竭，充血性；细胞凋亡
　　【Abstract】 AIM: To study the effect of Anxin granula on cardiocyte apoptosis in rats with heart failure (HF) caused by adriamycin. METHODS: Fifty female SD rats were randomly pided into 5 groups (n=10 / group)， namely normal control group (A)， model group (B)， captopril control group (C)， lowdose Anxin granula group (D)， and highdose Anxin granula group (E). Adriamycin was injected ip into group B， C， D and E to induce HF model. At the same time， captopril and Anxin granula were administered ig in group C， D and E， respectively. After 6 weeks of drug administration， left ventricular tissues of the rats were taken to measure cardiocyte apoptosis by TUNEL and to count the index of apoptosis. RESULTS: The index of cardiocyte apoptosis in group A was lower than those in group B， C， D and E (P&<0.01). The index of cardiocyte apoptosis in group B was higher than those in group C， D and E (P&<0.05). CONCLUSION: Anxin granula has the effect of resisting cardiocyte apoptosis and can be used to prevent and treat HF.
　　【Keywords】 Anxin granula; heart failure， congestive; apoptosis
　　0引言
　　心力衰竭（heart failure， HF）是各种心血管疾病的终末阶段的临床表现，其生存率低，预后差. 近年来的研究证实， HF时有广泛的心肌细胞凋亡存在，其发生参与了心衰的心肌重塑，并在HF的发生、发展中起重要作用［1］. 因此，干预心肌细胞凋亡的发生在防治HF的研究中有重要的临床意义. 安心颗粒是我院附属瑞康医院用于治疗冠心病的复方中药制剂，近年用于HF的治疗也取得了较好的效果［2］，但其作用机制尚未清楚，本文拟从动物实验方面探讨安心颗粒对HF细胞凋亡的作用及其机制.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　动物：50只健康清洁级雌性SD大鼠，体质量160～180 g，由广西中医学院动物实验中心提供（桂医动字11003）. 药物：安心颗粒(含生药4.5 g/g)由培力（南宁）药业有限公司提供，批号：050301；卡托普利由中美上海施贵宝制药有限公司生产，批号：0505031；盐酸阿霉素（adriamycin， ADR）粉针由深圳万乐药业有限公司生产，批号：0501E2. 试剂：原位细胞凋亡检测试剂盒为德国Roche公司生产；DAB显色剂为北京中杉金桥生物技术有限公司生产.
　　
　　1.2方法
　　1.2.1动物模型制作参照《现代医学实验动物学》，将注射用ADR粉针用灭菌注射用水5 mL溶解，9 mL/L生理盐水稀释配成每l mL生理盐水含药0.8 mg溶液，第1～3周按3 mg/kg剂量给模型组和用药组大鼠进行腹腔注射，第4～6周按2 mg/kg剂量进行腹腔注射，1次/wk；正常对照组大鼠注射等量的生理盐水，1次/wk. 连续注射给药6 wk.
　　
　　1.2.2动物分组及给药SD大鼠造模前以基础饲料适应性喂饲1 wk，然后随机分为对照组（A组），模型组（B组），卡托普利组（C组），安心颗粒小剂量组（D组），安心颗粒大剂量组（E组），每组10只，分笼饲养. C组给予卡托普利6.25 mg/kg灌胃；D组和E组分别给予安心颗粒小剂量0.8 g/kg，大剂量1.6 g/kg灌胃，用药剂量分别按动物体表面积换算. A组给予等量的蒸馏水灌胃. 1次/d，自由饮食.
　　1.2.3指标检测末次给药24 h，用颈椎脱臼法处死大鼠，剖胸取出心脏，洗净后取部分左心室组织，用40 mL/L多聚甲醛液固定12 h，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片备病理形态学观察. 并按照试剂盒的说明操作，用TUNEL法检测细胞凋亡，以细胞核被染成棕褐色为阳性结果. 每个标本观察5张切片，每张切片计数5个高倍视野（×400）中的凋亡阳性细胞核数/总细胞核数，取其平均值作为心肌细胞凋亡指数（AI）.
　　统计学处理: 计量资料用表示，多组间比较用KruskalWallis秩和检验，组间两两比较用Wilcoxon秩和检验，以P&<0.05为差异有统计学意义. 全部数据采用SPSS 12.0统计软件分析.
　　2结果
　　2.1各组大鼠行为及病理形态学观察从实验第3周起，B组大鼠开始出现中毒症状，表现为精神差，活动少，食量减，腹泻，皮毛疏松. 第4周起，逐渐出现腹水，倚笼而立，气喘痰呜，紫绀，唇舌青紫，肢冷，皮下水肿等HF表现. 而C， D， E组出现中毒症状和HF较B组晚，且程度轻. 从动物行为观察，符合中医阳虚水停、夹痰夹瘀证候. 整个实验过程中，B组有3只大鼠死于HF， C， D， E组各有2只，A组有1只因灌胃不当而当场死亡.
　　
　　光镜下各组大鼠心肌组织切片可见肥大的心肌细胞群，细胞排列紊乱，断裂、溶解、炎症细胞浸润，但C， D， E组均较B组轻. B组肺病理图片放大（×400）后，可见肺泡壁破裂、融合、水肿、瘀血改变，且肝HE染色可见肝窦扩张瘀血.
　　2.2心肌细胞AI比较A组心肌细胞凋亡指数均比B， C， D， E组低［3.3±0.8 vs 23.3±4.0， 13.5±3.8， 18.1±4.2， 14.3±3.9（均P&<0.01）］，而B组的心肌细胞AI均较C， D， E组高（P&<0.05或P&<0.01），表明C， D， E组均有抑制心肌细胞凋亡的作用.

　　2.3各组大鼠心肌细胞凋亡的图片模型组显示棕褐色细胞核明显增多，正常组偶见，卡托普利组、安心颗粒小剂量组较少(图1).
　　3讨论
　　HF属于中医“心悸”、“喘证”、“水肿”等病证范畴，其病位在心，而与肝、脾、肺、肾均有关，治疗上多强调温阳利水. 笔者认为，HF的基本病机以阳气虚衰为本，瘀血、痰饮、水湿互结为标. 心阳虚衰是HF的发病基础，血瘀、痰饮、水湿是其主要病理产物，三者互为因果，构成HF错综复杂的病理过程，故为沉痼之疾. 安心颗粒是补气、通阳、化痰、逐瘀中药配方提取而制成，方中人参大补元气；桂枝通阳化气，辅人参以振奋心阳；瓜蒌化痰泄浊、水蛭破血逐瘀，佐人参以畅通血脉；茯苓利水渗湿，为人参之使. 现代药理研究表明［3］ ，人参小剂量有兴奋心脏作用，可增强心肌收缩力；桂枝挥发油有强心、利尿作用；瓜蒌能扩张冠状动脉，对急性心肌缺血有显著保护作用；水蛭能防止血栓形成，改善局部血液循环；茯苓有明显利尿作用. 诸药配伍，具有补气通阳、化痰逐瘀、强心利尿之功，对心衰的治疗，有标本同治之效.
　　
　　本实验我们采用近年来较公认的ADR腹腔注射方法制作大鼠AF模型. ADR属于蒽环类抗生素，是常用的一种抗肿瘤抗生素，心脏毒性是ADR临床应用的主要不良反应之一，可出现剂量依赖的不可逆转的心肌病，AFYG. 其作用机制过去认为主要与自由基、钙超载等有关，新近的研究表明，ADR致心衰的机制还与细胞凋亡有关，暴露在低于微摩尔浓度的ADR的心肌细胞和内皮细胞就会发生细胞凋亡［4］. 本实验结果表明，当给大鼠多次腹腔注射ADR而导致HF时，大鼠的心肌细胞凋亡数量明显增多，而正常对照组大鼠心肌细胞凋亡数量很少. 给予安心颗粒和卡托普利干预的HF大鼠，心肌细胞凋亡的数量也较模型组少(P&<0.05或P&<0.01). 这一结果证实心肌细胞凋亡与HF的发病有密切关系，安心颗粒和卡托普利均有抑制HF大鼠心肌细胞凋亡的作用. 心肌细胞的凋亡是HF过程中心肌细胞丧失的重要机制，心肌细胞数目的逐渐减少，纤维化进行性加重，从而心功能不全进行性加重［5-6］. 由此可以推测，通过阻断或抑制心肌细胞凋亡可能是安心颗粒防治HF的主要机制之一.

参考文献

　　［1］Kang PM， Izumo S. Apoptosis and heart failure: A critical review of the literature［J］. Circ Res， 2000， 86(11):1107-1113.

　　［2］王强，何劲松，方显明，等.加用安心颗粒治疗冠心病无症状性心力衰竭临床观察［J］. 广西中医学院学报，2005，8(3):20-21.

　　［3］黄兆胜. 中药学［M］. 北京: 人民卫生出版社，2002: 38， 198， 327， 345， 414.

　　［4］Kalyanaraman B， Joseph J， Kalivendi S， et al. Doxorubicininduced apoptosis: Implications in cardiotoxicity［J］. Mol Cell Biochem， 2002， 234-235(12):119-124.

　　［5］Haunstetter A， Izumo S. Future perspectives and potential implications of cardiac myocyte apoptosis［J］. Cardiovasc Res， 2000， 45(3): 795-801.

　　［6］Narula J， Kolodgie FD， Virmani R. Apoptosis and cardomyopathy［J］. Curr Opin Cardiol， 2000， 15 (3):183-188.