第一部分 综述
1 茯苓皮总三萜的研究进展
1.1 茯苓皮总三萜的化学成分
茯苓皮中主要有多糖和三萜两类化学成分，而茯苓皮总三萜（TTP）作为三萜类中的主要化学成分，目前报道的有 84 种[20]，主要包含羊毛甾-8-烯型、羊毛甾-7，9(11)-二烯型、3，4-开环-羊毛甾-8-烯型、3，4-开环-羊毛甾-7,9(11)-二烯型等[20]。
1.2 茯苓皮总三萜的药理作用
1.2.1 对泌尿系统作用
相关研究表明三萜类成分通过调控肾素-血管紧张素系统（RAS），防止细胞死亡，调节水和钠路径，平衡水分等途径调控泌尿系统[20]。
田婷等[21]报道在 150 至 600 mg·kg−1·d−1给药剂量范围内，茯苓皮乙醇提取物使大鼠尿量增加 21%到 42%，且增加保钾排钠作用，茯苓皮醇提取物的利尿作用可能是[21]由于茯苓皮中主含有四环三萜类化合物，它与醛固酮及其拮抗剂(如螺内酯等)结构相似，所以抑制了肾小管对电解质和水的重吸收。
三萜类成分具有良好的肾保护作用，可在一定程度防治肾病综合征等肾脏疾病。王明课题组[22]发现茯苓三萜酸，可通过调节 RAS 和减轻管间质纤维化（TIF）来治疗慢性肾病(CKD)。而 TIF 是 CKD 的共同病理特征，陈丹倩课题组[23]通过分离出茯苓酸 A，证明茯苓酸 A 通过选择性阻断 AMPK 下游的 Smad3 与 TGFβRI 和 SARA 的结合而抑制 Smad3 磷酸化，从而上调 AMPK 活性减轻肾间质纤维化。
肾病综合征与肾脏对水和钠的处理方式改变以及水通道蛋白（AQPs）和上皮钠通道（ENaCs）的水平变化有关。Lee 等[24]发现茯苓菌核水提物（200 mg/kg-1/天-1）通过抑制蛋白尿和腹水来改善肾病综合征 AQP2 和 ENaC 的表达，通过抑制水和钠通道影响体液调节，改善肾脏失调如水肿或肾病。
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2 脂质体的研究进展
2.1 脂质体的概况
脂质体是由上世纪 60 年代英国科学家 Bangham 首次发现的[41]，它主要包括磷脂和胆固醇两部分[42]，可同时包载脂溶性和亲水性药物[43-44]，具有良好的缓释、生物相容性、靶向性、可降解性和低毒性等优点[45-48]，可通过配体修饰，形成如温敏脂质体[49]、pH 敏感脂质体[50]、前体脂质体[51]、长循环脂质体[52]等许多新型脂质体。
2.2 脂质体的制备方法
2.2.1 薄膜分散法
作为最常用的制备方法[53]，它是将膜材溶解于溶剂中，通过旋蒸去除有机溶剂，形成薄膜，加入水化介质进行旋转，即得[54]。如潘文丽等[55]采用此法制备出了包封率高，具有缓释性的西洋参茎叶皂苷脂质体。
该法得到的脂质体粒径大小多不均一[56]，因而常通过超声、过膜挤压等方法进一步减小粒径[57]，目前主要用于包封亲脂性或两亲性物质[58]。
2.2.2 乙醇注入法
首先将膜材和药物溶于乙醇中，超声溶解后将此注入到恒温磁力搅拌的水相中，此时会得到脂质体混悬液[59]。常通过超滤、旋蒸、反渗透等[60]方法挥去乙醇，过膜挤压或超声等方法进一步减小脂质体粒径[57]。乙醇注入法绿色安全，可用于工业化生产[58]。如郝静梅等[61]采用此法制备的柠檬烯脂质体包封率为 67%左右，与模型预测误差相差甚微，重现性良好。
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第二部分 处方前研究
2 含量测定方法的建立
2.1 色谱条件
色谱柱：Lichrospher C18（4.6 * 150 mm，5 μm）色谱柱；流动相：乙腈-0.5 %甲酸水（85：15）；流速：1mL/min；柱温：30℃ ；进样量：10μL；检测波长： 244 nm
2.2 溶液制备
2.2.1 混合对照品溶液的制备
精密称取松苓新酸和去氢依布里酸对照品于同一 10mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容，制得松苓新酸、去氢依布里酸浓度分别为 200、204μg /mL 的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
精密吸取 1mL 脂质体溶液至 2mL 容量瓶中，加入甲醇溶解，超声 15min，放冷，摇匀，过 0.45µm 微孔滤膜，即得。
2.2.3 空白对照溶液制备
按照 2.2.2 下制备方法，在不加药物的情况下，即得空白对照溶液。
2.3 方法学考察
2.3.1 专属性实验
分别吸取上述 2.2.1、2.2.2、2.2.3 下溶液适量，按照 2.1 色谱条件下进样测定，结果空白对照溶液在 2 个对照品的相应位置上没有吸收峰，证明处方中的辅料对脂质体中的 2 个对照品测定没有干扰。
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3 脂质体包封率的测定方法
吸取适量的脂质体溶液置于离心管中，于低温高速（14000r/min ，4℃）条件下离心，离心 30 min，弃去上清液后用甲醇溶解底部沉淀物，超声，将底部沉淀溶液转移至容量瓶中，按 2.1 色谱条件下进样测定药物质量，记为 W包｡另取脂质体溶液适量加入容量瓶中，甲醇溶解定容，超声破乳，在上述色谱条件下进样测定脂质体中的总药量，记为 W总｡包封率的计算公式为：
包封率(%)=W包/W总*100%
脂质体制备后，常采用透析法、离心法、柱层析法等进行包封率的测定，由于透析法所需透析时间较长，柱层析法往往所需样品量大、操作繁琐、稀释量大且易造成药物泄露[93]，而离心法操作简单，用时较少，所需样品量小，因而本实验选用离心法测定包封率。
同时分别考察了 4000r/min、6000r/min 、8000r/min 、14000r/min 不同转速下脂质体和游离药物的分离情况，结果 14000r/min 可以快速将脂质体和游离药物良好分离，而其他转速均无法达到预期要求，因而最终确定了 14000r/min 作为离心转速。
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第三部分 茯苓皮总三萜脂质体的制备工艺研究.....................14
1 仪器与试药............................................. 14
1.1 仪器............................... 14
1.2 试药与试剂...........................14
第四部分 透明质酸修饰的茯苓皮总三萜脂质体制备工艺优化........................ 24
1 仪器与试药............................ 24
1.1 仪器................................ 24
1.2 试药与试剂..................................24
第五部分 脂质体的质量评价及体外释放度研究...............32
1 仪器与试药....................... 32
1.1 仪器............................. 32
1.2 试药与试剂...........................32
第五部分 脂质体的质量评价及体外释放度研究
1 仪器与试药
1.1 仪器
药学论文参考
1.2 试药与试剂
药学论文怎么写
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结语
脂质体作为一种新剂型，近年来被广泛应用于制剂领域，本实验基于提高茯苓皮总三萜的生物利用度，通过对茯苓皮总三萜脂质体的研究，主要完成了以下工作：
1.成功建立了茯苓皮总三萜脂质体含量的测定方法，并进行了方法学考察。通过对包封率测定方法的前期筛选，最终确定采用高速低温离心法。
2.脂质体的制备方法较多，本实验以包封率和粒径大小作为评价指标，最后选择了乙醇注入法。在单因素考察实验中，选择了几个影响较大的因素进行了考察，并通过正交试验优化，最终确定处方：磷脂-胆固醇质量比为 7:1，药脂比为 1:3，PBS 的 pH 值为 7.0，并进行了工艺验证。
3.在制备 HA 修饰的茯苓皮总三萜脂质体时，通过对 HA 的用量、搅拌转速、探头超声时间进行了单因素考察，最终确定处方为：采用电荷吸附法取 0.5mg/mL 的 HA水溶液并超声，将此 HA 水溶液缓慢滴入到不断搅拌的茯苓皮总三萜脂质体溶液中，磁力搅拌 30min（650 r/min，60℃），探头超声 2 min（10% 功率）使粒径均匀，即得 HA 修饰的茯苓皮总三萜脂质体溶液。
4.为了进一步提高脂质体溶液的稳定性，本实验采用了冷冻干燥法对 HA 修饰的茯苓皮总三萜脂质体进行了冻干工艺研究，通过对冻干保护剂的种类和用量进行筛选，最终确定脂质体冻干工艺为：称取卵磷脂、胆固醇、药物（磷脂-胆固醇质量比为 7:1，药脂比为 1:3），加入适量的无水乙醇超声溶解，吸取上述溶液，并注入到不断搅拌的 30mL PBS 中（pH=7.0），磁力搅拌 30 min，旋蒸除去乙醇（45℃），即得茯苓皮总三萜脂质体溶液。取 0.5mg/mL 的 HA 水溶液并超声，将此 HA 水溶液缓慢滴入到不断搅拌的已制备的茯苓皮总三萜脂质体溶液中，磁力搅拌30min（650 r/min，60℃），此时向脂体溶液中继续加入甘露醇（甘露醇-脂质体质量比 1.5:1），继续磁力搅拌 30 min，探头超声 2 min（10%功率）使粒径均匀，即得冻干脂质体溶液。按照 3.3 下冻干条件进行冷冻干燥，即得 HA 修饰的茯苓皮总三萜冻干脂质体。
参考文献（略）