本文是一篇药学论文，本研究采用酶辅助-水蒸气蒸馏法提取杜香精油。通过单因素和响应面实验考察了酶的种类、酶的浓度、酶解温度、酶的pH值、酶解时间、料液比、提取时间等７个因素对杜香精油提取率的影响。
1绪论
1.1杜香研究现状
杜香（Ledum palustre L.）为被子植物门杜鹃花科杜香属常绿灌木，是中国传统中药材，也是重要的香料植物[1]。杜香属植物分布在北半球温带或寒温带，主要分布于我国东北（大、小兴安岭和长白山）、朝鲜、日本、西伯利亚、北美、欧洲等地。杜香精油的组成因其品种、生长地点的差异有较大区别[2-4]。杜香在医学上应用广泛，其嫩枝叶的浸提液具有解痛、祛痰、脱敏和利尿作用[5]。杜香有强烈的芳香气味，可药用及提炼精油。细叶杜香精油是其活性成分之一，全株可提取芳香油，尤其以花、果出油率较高。精油在镇咳、杀菌、促进透皮吸收、杀螨、驱虫等作用[6]，在治疗皮肤病等方面也有较好疗效[7]，对多种真菌和细菌具有抗菌作用和抑制菌类生长功能[8-10]，杜香精油成分的功效已被运用于日常生活、医疗、香料生产等领域[11-13]。但精油内含成分受生长条件和地域影响，所以探索一种在保持其成分不改变的条件下适合规模化生产的提取工艺是必要的。
1.1.1杜香精油的提取方法
目前，植物精油的提取方法主要有超临界CO2萃取法、浸提法、微波辅助提取法、超声波提取法及水蒸气蒸馏法等[14]，但每种方法都不完善。其中，水蒸气蒸馏法具有方法简单、易操作、成本低、可控性高等特点[15]。利用水蒸气蒸馏法提取的杜香精油产物以单萜类化合物为主。气相色谱-质谱（GC-MS）联用法可以检测杜香挥发油的化学成分[16]，利用水蒸气蒸馏法提取的杜香精油产物以单萜类化合物为主。但其提取时间久，提取精油不充分。
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1.2杜香的化学成分
杜香精油中主要是以烯烃、酚、酯、萜、醇、芳香类化合物为主。微量测定法分析了精油的主要成分，其中含量最高的是月桂烯、松油醇、喇叭茶醇[52]。赵振东等研究了水蒸汽蒸馏法得到的杜香精油成分[53]，并对精油进行了初步的分离，分离后可以得到含量较高的桧烯和对伞花烃，未能较好的分离桃金娘烯醛和4-松油醇。
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药学论文参考
杜香挥发油含有多种活性成分[54]，其中，桃金娘烯醛是一种重要的有机合成中间体，可再合成其它更有价值的化学品，如香精及香料等[55]。对伞花烃也是一种重要的有机合成中间体，具有广泛的用途[56]。它可以直接用于口香糖、软饮料、糖果及调味料等食品中作为调味剂，或用于调配日化用品香精，或制成镇咳、祛痰类药物，还可以合成对甲酚及其下游系列产品。枯茗醛可以作为一种用于糕点、烹饪的食用香精，还具有一定的抑菌作用[57]。4-萜烯醇又叫4-松油醇、4-松油烯醇，具有辛香、木香和百合香气，可用作食品香料或日化香精，同时，它也具有驱虫和杀虫的作用[58]。枯茗醇、γ-松油烯、α-侧柏醛等均属于香料，分别具有辛香、柑橘香及花草香，可用于香精香料中。
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2酶辅助-水蒸气蒸馏法提取杜香精油
2.1引言
杜香(Ledum palustre L.)，杜香有强烈的芳香气味，可药用及提炼精油。杜香精油是其活性成分之一，其枝、叶、花和果实均可提取出精油，其中花、果出油率较高，其具有杀菌抗炎、杀螨、驱虫等作用。杜香精油内含成分受生长条件和地域影响，在提取时易使其成分发生改变。目前，杜香精油的提取方法主要有超临界CO2萃取法、浸提法、超声波提取法及水蒸气蒸馏法等，但每种方法都不够完善。其中，水蒸气蒸馏法具有方法简单、易操作、成本低、可控性高等特点。气相色谱-质谱（GC-MS）联用法可以检测杜香精油的化学成分，利用水蒸气蒸馏法提取的杜香精油产物以单萜类化合物为主。本研究利用酶辅助-水蒸气蒸馏法提取杜香精油不仅能够提高杜香精油的提取率，也可以有效地保证其主要成分不发生改变。在酶辅助提取的条件下优化生产工艺，为规模化生产杜香精油提供技术支撑。
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2.2实验仪器与材料
2.2.1仪器
QJ-20多功能粉碎机（上海兆申科技有限公司）；101-3AB型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；Startorious 1721型电子天平（德国）；安捷伦7890A-7000B气质联用仪（美国安捷伦科技公司）；轻油提取器。
2.2.2材料
α-淀粉酶（α-Amylase，AMS；S10003；4 000 U/g；100%）、半纤维素酶（hemicatalepsy，HCase；S10045；20 000 U/g；100%）、果胶酶（pectic enzyme，Pectase；S10007；500 U/mg；100%）、β-葡萄糖苷酶（β-glucosaccharase，β-G；S10047；100 U/g；100%）、纤维素酶（cellulase，CMCase；S10042；10 000 U/g；100%）均由上海源叶生物科技有限公司提供；去离子水为实验室自制。
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3杜香精油的活性研究..........................41
3.1引言.............................41
3.2实验仪器与材料...........................41
3.2.1仪器.........................................41
3.2.2材料....................................41
结论.............................53
3杜香精油的活性研究
3.1引言
皮肤表面栖居的正常皮肤微生物群包括长期存留及短期存留两种，前者为皮肤常驻菌，如痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌及绿脓杆菌等，常驻菌所产生的抗菌肽可以抑制和杀灭病原菌；后者为皮肤暂驻菌，包括金黄色葡萄球菌、链球菌及白念珠菌等，它们是引起皮肤感染的主要病原菌。杜香精油具有广谱抑菌作用，本研究通过探索杜香精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、痤疮丙酸杆菌和绿脓杆菌的抑制作用，杜香精油对痤疮主要致病菌的进行进一步研究，旨在为杜香精油在临床应用上提供理论依据。
松材线虫病又称松树萎蔫病，是一种危害松树的国际检疫性病害，属于病原松材线虫寄生于松树体内而导致松树迅速死亡的毁灭性病害。寄主松树被松材线虫侵染后，部分针叶出现退绿、病害逐渐加重、针叶变为黄褐色或红褐色的现象，最后松脂停止分泌、疏导组织受阻、蒸腾作用减弱，出现失水、木质部蓝变等现象，短时间内使整株萎蔫枯死，不脱落。本研究通过探索杜香精油对松材线虫的毒力作用，旨在寻找一种绿色、有效、可持续使用的防治方法。
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结论
1、本研究采用酶辅助-水蒸气蒸馏法提取杜香精油。通过单因素和响应面实验考察了酶的种类、酶的浓度、酶解温度、酶的pH值、酶解时间、料液比、提取时间等７个因素对杜香精油提取率的影响，确定了酶辅助-水蒸气蒸馏法的最佳条件为：酶的pH为5.5、料液比为1:20 g/mL、酶解时间为4 h、酶解温度为55℃、酶的浓度为1.5%、提取时间为1.5 h，在此条件下，杜香精油提取率为1.71%，较普通的水蒸气蒸馏法提高了67.65%。通过GC-MS测定、解析了杜香精油的主要化学成分，结果发现酶辅助提取所得的杜香精油化学成分有43种，水蒸气蒸馏法所得精油化学成分有39种；酶解的挥发性成分种类更丰富，使精油更好地释放出来。表明酶辅助-水蒸气蒸馏法提取法可以更好地获取更多组分的杜香精油。
2、本研究选取金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌、痤疮丙酸杆菌和绿脓杆菌为供试菌种，检测杜香精油的抑菌性、MIC和MBC。以菌液为对照组，将杜香精油与分子蒸馏法得到的各组分进行生长曲线对比分析，结果表明精油各成分均有抑菌效果，且轻油的抑菌能力比重油的能力强，其中，轻相3与轻相5的抑菌能力最强。
3、本研究体外抗氧化能力测定的结果显示，抗坏血酸对照组、杜香精油以及其6个组分对DPPH自由基最大清除率分别为100%、68.56%、53.47%、55.84%、78.27%、29.74%、71.13%以及37.34%；对ABTS自由基最大清除率分别为100%、71.16%、62.74%、72.25%、76.84%、36.28%、81.25%以及42.72%；三种羟基自由基最大清除率分别为100%、68.26%、54.17%、74.62%、85.19%、24.16%、82.73%以及34.27%。结果表明，轻油的抗氧化活性较重油的强。
参考文献（略）