第一章 文献综述及前言
1 沙冬青研究进展
沙冬青四季常绿，抗旱抗寒，是干旱沙区治沙造林和园林绿化中难得的树种，有很强的抗旱抗盐能力，为良好的固沙灌木树种。沙冬青种子扁肾形、黄褐色、种皮革质、沙冬青种子可提取特种工业用油，枝、叶可人药，能祛风、活血、止痛，外用主治冻疮、慢性风湿性关节炎等。沙冬青原植物见图 1-1。
1.2 沙冬青及其种子化学成分研究现代
研究表明，沙冬青及其种子主要含有生物碱、有机酸、黄酮、异黄酮、二苯乙烯类等成分，其中沙冬青嫩枝和叶中所含生物碱主要有：左旋黄花木碱(piptanthine)、鹰爪豆碱(又名金雀花碱，sparteine)、右旋羽扇豆碱(lupanine)、a-异鹰爪豆碱(a-isosparteine)、黄花木碱，异黄花木碱，右旋 3a-羟基羽扇豆碱(3a-hydroxylupanine)、黄花木胺(piptamine)、piptantine，nanine，17-oxosparteine、a-isolupanine、homormosarine、homopiptanthine、ammodendrine 等。所含黄酮成分：7-3’-二羟基-4’-甲氧基异黄酮(7，3’-dihydroxy-4’methoxyisoflavone)，4- 甲 氧 基 异 黄 酮 -7-β-D- 吡 喃 葡 萄 糖 甙 (4 ’-methoxyisoflavone-7-β-D-glucopyranoside)，刺芒柄花素(formononetin)，3’-羟基刺芒柄花素(3’-hydroxyformononetin)，6，4’-二羟基-7-甲氧基异黄酮(kakkatin) ，芒柄花甙 (ononin) ， 7- 羟基 -4 ’ - 甲氧基异黄酮 (7-hydroxy-4 ’-methoxyisoflavone)，毛异黄酮等。本品还含白藜芦醇(resveratrol)，大豆素(daidzein) ，右旋蒎立醇(pinitol)，水杨酸(salicylic acid) β-谷甾醇，间羟基苯甲酸等。而沙冬青种子中所含生物碱主要有：金雀花碱（sparteine）、17-氧基金雀花碱(17-oxosparteine)、β-异金雀花碱(β-isosparteine)、3α-羟基金雀花碱(3a-hydroxyparteine)、3β-羟基金雀花碱(3β-hydroxyparteine)、白羽扇豆碱（lupanine）等，其中金雀花碱（sparteine）是最主要成分。
1.3 沙冬青的药理作用
1.3.1 抗肿瘤作用
贾恢先等通过动物试验发现，沙冬青提取物（JA1）对肝癌、宫颈癌、有明显疗效，其肝癌抑制率达 42.9%。贾宁等[16-18]通过一系列体外试验证明了，沙冬青提取物（JA1）对体外培养的人肝癌 HCC 细胞、体外培养的小鼠肝癌细胞株 H22以及体外培养的 Hep 细胞具有明显的抑制作用；并通过体内试验进一步证明，JA1 对小鼠皮下移植性 Hep 肿瘤以及小鼠皮下移植性肿瘤 H22 的生长也具有明显的抑制作用。亢凯等采用单管法一步完成端粒重复序列扩增（TRAP）方法检测到沙冬青生物碱对体外培养的鸡马立克氏病肿瘤 HDCC-MSB1 细胞端粒酶活性具有显著的抑制效果，说明沙冬青生物碱可抑制鸡马立克氏病肿瘤细胞的增殖。
1.3.2 杀虫作用
沙冬青含生物碱属双稠哌啶(Quinolizidine Alkaloids)类生物碱,该类生物碱约 170 种,对植物病毒、细菌、真菌和松材线虫具有活性。鹰爪豆碱等少量生物碱已用于医药行业,开发为商业杀虫剂。
2 生物碱研究进展
2.1 生物碱概述
生物碱（alkaloids）是指来源于生物界（主要是植物界）的一类含氮有机化合物（氨基酸、氨基糖、肽类、蛋白质、核酸、核苷酸及含氮维生素除外）。大多数有较复杂的环状结构，氮原子结合在环内；多呈碱性，可与酸成盐；多具有显著的生理活性，是中草药中重要的有效成分之一；多数为无色结晶形固体，不溶于水，但与酸结合后易溶于水，有明显的熔点和旋光性，苦味，挥发性不强。
生物碱的发现起始于 19 世纪初，是人们研究的最早、最多的一类天然有机化合物。中国最早记载是 17 世纪初《白猿经》一书中用作箭毒的从乌头中提取的乌头碱。在欧洲，1803 年 Derosne 首次从鸦片中分离出第一种单纯的生物碱那可汀（narcotine）。1806 年德国助理药剂师 Serturner 从鸦片分离得到吗啡（morphine），并首次报告了它具有碱性的特征，因此曾称之为植物碱（vegetablealkalis）。1810 年西班牙医生 Gomes 从金鸡纳树皮中分得结晶 Cinchonino(奎宁和辛可宁 cinchonine 混合物)。1819 年 W.Weissner 将从植物中得到的具有碱性的化合物统称为类碱(Alkali-like)或生物碱(Alkaloids)。由于现在提取分离鉴定手段的不断发展，生物碱的种类和数量增加很快，据统计，1952 年以前共发现生物碱 950 种，到 1962 年达到 1107 种，1972 年又上升到了 3443 种，目前已发现生物碱达 10000 多种，并且仍以每年约 100 种的速度递增着。
生物碱类化合物多具有显著而特殊的生物活性，往往是许多中草药及药用植物的有效成分，如吗啡、延胡索乙素具有镇痛作用；曼陀罗、颠茄、天仙子中的莨菪碱具有解痉和解有机磷中毒的作用；黄连、黄柏中的小檗碱，苦参生物碱以及蝙蝠葛碱有抗菌消炎作用；催吐萝芙木中的利血平有降血压作用；麻黄中的麻黄碱具有止咳平喘作用；金鸡纳树皮中的奎宁有抗疟作用；苦参碱、氧化苦参碱等有抗心律失常作用；喜树碱、秋水仙碱、长春新碱、三尖杉碱、紫杉醇等有不同程度的抗癌作用等。
第三章对小鼠急性毒性试验研究............................ 32-36
1 材料与方法 ............................32-33
1.1 材料............................ 32
1.2 方法 ............................32-33
2 结果与分析............................ 33-35
2.1 预试验结果............................ 33
2.2 正式试验结果............................ 33-34
2.3 急性毒性试验的临床观察............................ 34
2.4 病理学观察 ............................34-35
3 讨论 ............................35-36
第四章牛病毒性腹泻病毒的体外试验 ............................36-48
1 材料 ............................36-37
1.1 试验用牛病毒性腹泻病毒............................ 36
1.2 试验用细胞............................ 36
1.3 试验药物 ............................36
1.4 试验试剂 ............................36-37
1.5 试验仪器 ............................37
2 试验方法 ............................37-40
2.1 细胞培养 ............................37-38
2.2 微量中和试验测定............................38
2.3 细胞毒性试验............................ 38-39
2.4 实验分组............................ 39
2.5 体外抗病毒试验............................ 39-40
2.6 统计学处理............................ 40
3 结果 ............................40-46
4 讨论 ............................46-48
结论
（1）采用超声波辅助提取法提取沙冬青种子总生物碱，工艺简单，提取效率高，节约时间和成本。沙冬青种子总生物碱的最佳提取条件为：pH 为 2.5 的盐酸水溶液、料液比 1∶30、提取温度 30℃、提取时间 1.5h、超声频率 60Hz。沙冬青种子中总生物碱的含量可达 2.868%。
（2）通过沙冬青种子总生物碱急性毒性试验可知，沙冬青种子总生物碱对小鼠口服的半数致死量 LD50为 588.71mg/kg ，LD50的 95%可信限为 513.93～674.37mg/kg，符合低毒标准[85]（501～5000 mg/kg 为低毒化合物）；通过对存活小鼠生存状态观察可知，沙冬青种子总生物碱对小鼠的持续影响较小；通过对试验期内死亡小鼠的病理学观察可知，沙冬青种子总生物碱毒性作用的靶器官可能是肝脏。
（3）沙冬青种子总生物碱有抗 BVDV 的作用，总碱以药物与等量病毒悬液混合后直接接种到单层牛肾原代细胞吸附 2.5h，弃上清液后，再换为含药物的维持液的方式抗病毒效果最好。