第一部分 左氧氟沙星不同厂家口服制剂对临床菌株的体外抗菌活性研究
1 材料与方法
1.1 药品来源
本研究通过正规商业渠道购买 17 个厂家左氧氟沙星口服制剂，均在有效期前使用。左氧氟沙星对照品（批号：130455-201607）购自中国食品药品检定研究院。将原研药厂家标记为 Levo 1，其余厂家标记为 Levo 2-Levo 17，其中 Levo 4 与 Levo 10 已通过仿制药一致性评价。17 个左氧氟沙星厂家制剂产品信息见表 1。
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2 结果
2.1 各厂家左氧氟沙星含量测定结果
按照 2015 年版《中国药典》，左氧氟沙星的含量以左氧氟沙星（C18H20FN3O4）计应为标示量的 90.0%～110.0%，对 17 个厂家进行含量测定，原研药 Levo 1 的药品含量为 99.10%，仿制药 Levo 12 和 Levo 15 两厂家含量略高，分别为 102.82%和102.48%，仿制药 Levo 10 的药品含量略低，为 95.27%；各厂家药品含量测定结果详见表 3，均在 90.0%～110.0%的范围内，均符合药典规定。
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第二部分 左氧氟沙星仿制药与原研药的防耐药突变浓度研究
1 材料和方法
1.1 药品来源
来源见第一部分 1.2.1 小节。
1.2 菌株来源
来源见第一部分 1.2.2 小节。
主要试剂与仪器
1.3.1 主要试剂及材料
试剂与试剂同第一部分 1.3.1 小节，其它另需试剂如下： 一次性 L 棒（711001） 无锡耐思生物科技有限公司 96 孔板 Corning Incorporated Nunc 50mL 离心管 Thermo Scientific 锥形瓶等1.3.2 实验仪器 部分仪器同第一部分 1.3.2 小节，其它另需仪器见下： 全温摇床（481 型） Thermo 公司 高速冷冻离心机（Sorvall ST 16R） Thermo 公司 酶标仪 Mutilskan
1.4 药物储存液的配制
储存液的配制方法如第一部分 1.5 小节所述。
1.5 防耐药浓度突变实验
参考文献推荐的方法[53]测定左氧氟沙星原研药厂家 Levo 1、仿制药 Levo 2、Levo 7和 Levo 10 的 MPC，以第一部分测定的各厂家对 EC 和 KP 的 MIC 值为基准，采用琼脂倍比稀释法配制含药平板，药物浓度为 MIC 到 64µg/mL。挑取新鲜过夜培养的单个菌落接种于 20mL LB 肉汤中震荡培养 18~24h，3000 rpm/min 离心，弃上清，细菌再悬浮于十倍体积的 LB 肉汤中培养 6h，离心后将菌液浓度调整为 1-3×1010 CFU/mL。取 100μL菌液均匀涂抹在每个平板上，并通过菌落计数及酶标仪测定菌液 OD600 以确保每个平板的细菌总接种量>1010 CFU，于 37℃下孵育，观察 24h、48h、72h 时的菌落生长情况，最终以 72h 无菌落生长的最低药物浓度称为初始 MPC(MPCpr)。再以 MPCpr 为基准，依次递减 20%抗菌药物浓度重新配制含药平板，重复 MPCpr 测定时的操作，以 72h 不出现菌落生长的最低药物浓度记为该菌的 MPC。MPC 越低，提示药物防止细菌耐药突变能力越强[54]。
............................
2 结果
2.1 左氧氟沙星仿制药与原研药对 EC 和 KP 的 MPC 结果
本研究的 MPC 实验结果显示：对 EC，Levo 10 的 MPC50是 1.6µg/mL，其余厂家均为 1.28µg/mL；对 MPC90，Levo 1 是 3.2µg/mL，其余厂家的 MPC90是 4.096µg/mL。对KP，Levo 1 的 MPC50是 0.8µg/mL，其余厂家为 1µg/mL；Levo 1 的 MPC90是 4.096µg/mL， Levo 2 和 Levo 7 是 5.12µg/mL，而 Levo 10 的 MPC90为 6.4µg/mL。无论是 EC 还是 KP，厂家 Levo 1 的 MPC90均低于其余三个厂家，如表 6 所示。
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第三部分 左氧氟沙星仿制药与原研药的 PK/PD 研究 ........................ 51
1 材料与方法 ........................... 52
1.1 左氧氟沙星原研药与仿制药的 PK 参数 .............................. 52
1.1.1 仿制药 300mg 的 PK 参数实测值 .................................. 52
1.1.2 Phoenix WinNonlin 模拟仿制药 500mg 的 PK 参数 ................ 53
1.2 左氧氟沙星原研药与仿制药的 PD 参数 ............................. 54
1.2.1 药效学参数 MIC ............................................. 54
1.2.2 药效学参数 MPC ................................. 55
全文总结 ..................................... 69
第三部分 左氧氟沙星仿制药与原研药的 PK/PD 研究
1 材料与方法
1.1 左氧氟沙星原研药与仿制药的 PK 参数
1.1.1 仿制药 300mg 的 PK 参数实测值
参考某院 I 期临床试验中心已完成的三个仿制药厂家 Levo 2、Levo 7、Levo 10 的生物利用度试验 PK 参数，该参数是采用高效液相色谱荧光检测法测定血清中药物浓度，用 DAS 软件计算药代动力学参数和相对生物利用度，具体方法如同文献所述[67]。Levo 2、Levo 7、Levo 10 的 PK 参数为中国健康成人口服左氧氟沙星 300mg 的人体药代动力学参数，见表 8，其详细完整的 PK 数据资料见附录。
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1.1.2 Phoenix WinNonlin 模拟仿制药
500mg 的 PK 参数 左氧氟沙星常用推荐给药方案为每 24h 给药 500mg[68]，其中原研药 Levo 1 说明书的药代动力学部分已给出单次口服左氧氟沙星 500mg 的 PK 参数，见表 9。单次口服左氧氟沙星 50~1000mg，平均 Cmax约为 0.6~9.4mg.h/L，AUC 约为 4.7~108 mg·h/L，药-时曲线下面积均呈线性增加且左氧氟沙星在多剂量给药方案中的药代动力学与单剂量给药方案相似，可以预测其药代动力学变化情况[69]。
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全文总结
本论文基于抗菌药物的 PK/PD 特性，通过体外抗菌活性研究和防耐药突变研究两个方面考察左氧氟沙星仿制药与原研药在抗菌能力及防耐药突变能力上的差异，再结合仿制药与原研药的药代动力学参数，应用单点估算法和蒙特卡洛模拟比较仿制药与原研药在 PK/PD 上的差异。为保障抗菌药物仿制药的质量与疗效，建议对抗菌药物仿制药进行一致性评价时应结合其 PK/PD 特性进行考察。 主要分为三个部分：
第一部分：体外抗菌活性研究中发现市售各厂家左氧氟沙星的抑菌能力参差不齐，部分仿制药厂家的抗菌活性与原研药相比存在明显差异。17 个厂家的左氧氟沙星口服制剂中，仿制药 Levo 8、Levo 10、Levo 12 等厂家的 MIC90与原研药Levo 1 均存在 2 倍差异；Levo 12 对 KP 的 MIC50与 Levo 1 相差 4 倍；这种差异很可能在临床治疗时导致治疗效果的不同。研究结果显示市售各厂家左氧氟沙星仿制药对临床重要致病菌的体外抗菌活性较原研药存在差异，建议在对抗菌药物进行仿制药一致性评价时应结合其 PK/PD 特性，引入基于各 MIC 值水平下的“累积抑菌百分率”进行考察，确保仿制药在真实的临床细菌耐药情况下与原研药具有相同的抗菌活性。
第二部分：市售左氧氟沙星口服制剂中，存在防耐药突变能力低于原研药的仿制药厂家，通过 MPC 实验发现原研药 Levo 1 的 MPC90最小，防耐药突变能力强于其余三个厂家。结合各自药时曲线比较%T＞MPC也发现原研药血药浓度高于MPC 的时间比仿制药更长，尤其针对 KP 的临床菌株，仅原研药的 Cmax超过了MPC90，而其余三个仿制药的 Cmax均落在 MPC90以下。测定 MPC，尽量延长治疗期间血药浓度高于 MPC 的时间，则能最大程度抑制耐药突变株的富集扩增，建议抗菌药物仿制药的一致性评价应考察 MPC 等参数与原研药的一致性。
参考文献（略）