引言
从前期文献研究和通过市场了解到，黄草乌现在市场炮制方法大体沿用《云南省中药饮片炮制规范》（1986年版）中草乌[2]的炮制方法，该炮制方法炮制工艺复杂，时间长，炮制辅料很多，炮制方法按炮制原料还分为以新鲜黄草乌为原料的“煮炙”以及以干黄草乌为原料的“煮蒸炙”。并且，不同厂家都根据自身条件使用不同辅料，炮制标准并不统一，其外观形态差别很大，经过初步的化学成分分析，发现黄草乌中的化学成分在炮制过程中也处于动态变化。不同程度的炮制品，其中的成分类别和含量都有区别。而同为乌头属的药材川乌[3]AconitumcarmichaeliDebx.和草乌[4]AconitumkusnezoffiiReichb.，它们的传统炮制方法中也是用了不同的辅料炮制，但是在《中国药典》（2010版）一部收载的乌头属药材川乌和草乌的炮制方法已不再使用辅料。所以对于现在仍然使用辅料炮制的黄草乌的进行炮制研究是很有必要的。目前对于黄草乌炮制品的研究匮乏，理论基础薄弱。这给临床用药及其安全性带来了许多困难。
黄草乌作为云南特有草乌类药材品种之一[5]，是云南伤科用药的主要原料，在云南众多的名方名药中发挥重要作用，成就了这些药物在临床上独特而优势的疗效，也是云南伤科药物国内外不可替代性盛名的主要物质基础和优势资源。通过对黄草乌生药材前期的化学成分研究[6]，发现其中滇乌碱、黄草乌碱甲、黄草乌碱丙、黄草乌碱丁、和塔拉乌头胺等二萜生物碱为主要的化学成分。不同于2010版《中国药典》收载的川乌和草乌药材所含成分。且二萜生物碱滇乌碱、黄草乌碱甲、黄草乌碱丙和醇胺型二萜生物碱均有抗炎镇痛的作用趋势。在黄草乌生药材化学成分和药理活性的研究基础上[6]，按《云南省中药饮片炮制规范》（1986年版）中草乌的炮制方法对黄草乌药材进行炮制，对炮制品的化学成分的进行研究。以《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中草乌炮制方法为研究主体，借鉴乌头属中草乌、川乌的传统及现代炮制市场及民间炮制方法。对黄草乌不同炮制方法进行科学性研究，同时对使用不同方法，不同辅料炮制后黄草乌化学成分影响进行初步分析，对黄草乌炮制后有效成分动态变化进行客观阐述。
综上所述，尽管目前已经对黄草乌生药材和黄草乌炮制品的化学成分有比较深入的研究，但从文献的调研尚未见有关黄草乌炮制方法，炮制辅料及其炮制过生程对黄草乌药材的影响。乌头类药物的活性成分同时也是毒性成分，其规范化炮制的目的就是保证炮制品的成分类型和含量稳定，从而保障临床用药安全有效。因此，有必要在明确制黄草乌毒性和活性成分的基础上，研究现行炮制方法对其中主要生物碱成分含量的影响，为进一步优选炮制方法和规范生产工艺奠定科学基础。因此，对黄草乌不同炮制方法，炮制辅料及炮制过程的进行初步研究，对有效成分动态变化进行科学阐述，可为黄草乌药材的规范炮制提供引导，为黄草乌饮片的炮制规范提供科学依据，为进一步研究黄草乌中成药制剂的临床安全性和有效性奠定基础。
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第一章黄草乌规范炮制及其指纹图谱研究
第一节依照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年版）对黄草乌炮制
1实验材料、仪器与试剂
1.1实验材料
黄草乌生药材采集自云南省玉溪市黄草乌种植基地，经云南中医学院中药鉴定教研室杨树德教授鉴定为毛茛科乌头属植物黄草乌AconitumvilmorinianumKomarov的干燥块根。辅料甘草、黑豆、白矾、皂角、生姜来自云南普瑞生物制药有限公司。
1.2仪器设备
云南普瑞生物制药有限公司已通过GMP认证毒性药材生产车间。
2炮制过程
2.1黄草乌药材采集、晒干
采集云南省玉溪市黄草乌种植基地黄草乌生药材1000kg，曝晒至干，干黄草乌375kg得。
2.2炮制步骤
以《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中草乌“蒸煮炙”方法进行炮制。
取梗干黄草乌300kg，拣净杂质，用水浸泡浸泡5天（浸泡时应每天换水一次），捞出。每50kg用甘草1.5kg、黑豆5kg、白矾0.5kg、皂角0.5kg加入清水（以淹没为度），与黄草乌共煮约3h，取出晾干水分，切或铡成厚约2mm的圆片，晒至八成干。再用甘草2.5kg（打碎）、生姜5kg（捣碎）放入锅内加清水煮约2h，滤渣取汁约得10~12.5kg；残渣再加清水煮1h，滤渣取汁约得5kg，合并两次药汁，洒入已晒干的黄草乌片内拌匀，待药汁吸尽，放入甑内，用武火蒸约8~10h，取样试切片心无白点，口尝略有麻舌感，取出晒或烘干，即可。
3小结与讨论
按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年版）中草乌的炮制方法对黄草乌进行炮制，因生产车间不能同时对300千克黄草乌干药材进行炮制，所以在实际炮制过程中，进行分批炮制。在炮制中发现，该炮制方法炮制工艺复杂，炮制时间长，且所需炮制辅料多达五种。为了达到心无白点，口尝略有麻舌感的炮制目的，每个批次炮制时间不能准确控制。辅料也因为蒸煮时，有少许的撒漏现象。炮制第二步蒸制使用第一步煮制切片后晒至八成干程度也很难在实际操作中的到控制。因此，对《云南省中药饮片炮制规范》（1986年版）中的炮制方法有待科学性研究。
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第二节制黄草乌及生药材指纹图谱研究
通过以《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中草乌蒸煮炙方法所得炮制品和黄草乌生药材进行化学成分研究表明[6-7]，黄草乌炮制品中主要化学成分为滇乌碱（Yunaconitine）、8-去乙酰基滇乌碱(8-Deacetylyunaconitine)、黄草乌碱甲(VilmorrianineA)、黄草乌碱丙(VilmorrianineC)、甘草苷(Liquiritin)、芒柄花苷（Ononin）、GeniculatineC。黄草乌生药材中主要化学成分为滇乌碱（Yunaconitine）、黄草乌碱甲(VilmorrianineA)、黄草乌碱丙(VilmorrianineC)、南乌碱乙(Austroconitine)、黄草乌碱丁（VilmorrianineD）、和塔拉乌头胺（(Talatisamine）等。经紫外检测器检测，滇乌碱（Yunaconitine）、8-去乙酰基滇乌碱(8-Deacetylyunaconitine)、南乌碱乙(Austroconitine)、黄草乌碱甲(VilmorrianineA)、黄草乌碱丙(VilmorrianineC)、甘草苷(Liquiritin)、芒柄花苷（Ononin）、GeniculatineC均在267nm左右均有良好吸收。因此，利用HPLC，以滇乌碱、8-去乙酰基滇乌碱、南乌碱乙、黄草乌碱甲、黄草乌碱丙、黄草乌碱甲、黄草乌碱丙、甘草苷、芒柄花苷、GeniculatineC为对照品。对不同黄草乌按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中草乌“蒸煮炙”、“煮炙”法所得炮制品及生药材进行成分分析。
1实验材料、仪器与试剂
1.1.1对照品来源
滇乌碱（Yunaconitine）、8-去乙酰基滇乌碱(8-Deacetylyunaconitine)、南乌碱乙(Austroconitine)、黄草乌碱甲(VilmorrianineA)、黄草乌碱丙(VilmorrianineC)、甘草苷(Liquiritin)、芒柄花苷（Ononin）、GeniculatineC，均由本实验室从黄草乌药材中分离得到，经HPLC分析（检测波长267nm），纯度均大于90%。
1.1.2黄草乌生药材来源
黄草乌生药材采集自云南省玉溪市黄草乌种植基地晒干得到，经云南中医学院中药鉴定教研室杨树德教授鉴定为毛茛科乌头属植物黄草乌AconitumvilmorinianumKomarov的干燥块根。
1.1.3制黄草乌样品来源
1.1.3.1
云南普瑞生物制药有限公司——按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中炙草乌“煮蒸炙”的方法炮制所得（以下简称省标“煮蒸炙”）。
1.1.3.2
本实验室按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中炙草乌“煮炙”的方法炮制得到（以下简称省标“煮炙”）。具体操作如下。
取鲜梗黄草乌，拣净杂质，洗去泥土。每50kg加生姜10kg（切片）、甘草2.5kg（捣碎）、黑豆5kg、白矾0.5kg，加清水（以淹没为度），共煮沸约20~30min后，再放入黄草乌合煮4~6h，（煮时应经常翻动，以免锅底焦糊，水干时可再加沸水）煮至透心，试切片心无白点、口尝略有麻舌感，取出晾干水分，拣去辅料残渣，切或铡成厚约2mm的圆片，晒或烘干，筛净灰碎即可。
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第三章省标炮制方法辅料科学性研究..................................41
第一节黄草乌省标“煮炙”法辅料拆分炮制及指纹图谱研究..............41
1实验材料...........................................................42
2供试品溶液制备......................................................45
第四章紫外分光光度法测定制黄草乌中生物碱的含量......................97
1实验材料、仪器与试剂...............................................97
2实验步骤...........................................................98
第五章实验总结与讨论...............................................119
第四章紫外分光光度法测定制黄草乌中生物碱的含量
根据文献记载，测定乌头类总生物碱的方法有酸碱中和法和紫外分光光度法。紫外分光光度法对仪器的要求低，适合常规检验，具有取样量小、准确、重现性好的优点。通过按照以《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中草乌干法炮制方法为研究主体化学成分研究，表明黄草乌炮制品中主要化学成分为双脂型生物碱：滇乌碱（Yunaconitine）。因此，以滇乌碱为对照品，与1.对不同黄草乌按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中草乌“蒸煮炙”、“煮炙”法所得制黄草乌及生药材、2.省标“煮蒸炙”的方法炮制过程中每个一定时间取出的样品、3.黄草乌传统炮制方法所得炮制品、4.黄草乌现代炮制方法所得炮制品、5.使用三类不同辅料组成对黄草乌按照“煮炙”相同方法进行炮制所得炮制品；6.使用四类不同辅料组成炮制工艺对黄草乌按照省标“煮蒸炙”相同方法进行炮制所得炮制品。六类进行成分生物碱含量初步测定。对黄草乌药材的规范炮制提供引导，为黄草乌饮片的炮制规范提供科学依据，为进一步研究黄草乌中成药制剂的临床安全性和有效性奠定基础。
1实验材料、仪器与试剂
1.1实验材料
滇乌碱（Yunaconitine）经HPLC分析（检测波长267nm），纯度大于90%。黄草乌药材采集自云南省玉溪市黄草乌种植基地，经云南中医学院中药鉴定教研室杨树德教授鉴定为毛茛科乌头属植物黄草乌AconitumvilmorinianumKomarov的干燥块根。制黄草乌是按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中炙草乌“煮蒸炙”的方法炮制所得。制黄草乌饮片分别来自：云南普瑞生物制药有限公司——按照《云南省中药饮片炮制规范》（1986年）中炙草乌“煮蒸炙”的方法炮制所得；昆明中药厂有限公司；云南大理三月街药材市场（20140414）；云南白药集团（YP20100902）；本实验室以《云南省中药饮片炮制规范》（1986年），川乌草乌药典炮制方法及乌头属文献方法自制。
1.2仪器与试剂
仪器：2F-1三用紫外分析仪（型号：WEH-20305J，上海精科实业有限公司）。分析天平（型号：AL104，METTLERTOLEDO，Switzerland，0.0001g）定性滤纸（FC00981，杭州沃华滤纸有限公司）。
试剂：氨水（AR，天津市风船化学试剂科技有限公司批号：20131205），三氯甲烷（AR，云南杨林工业开发区汕滇药业有限公司批号：20141205）；水为纯净水。
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2实验步骤
2.1供试品的制备
分别取黄草乌药材样品打成粗粉，精密称定5g，各样品平行称定三份，置100ml锥形瓶中，加10%氨试液0.5ml润湿。加50ml氯仿，超声提取2次，每次30min，过滤，残渣用氯仿洗涤3-4次，每次3-4ml,过滤，合并滤液，在水浴上挥散至无氨味。定量转移至100ml容量瓶中，加氯仿定容至刻度，摇匀。精确吸取该溶液5.0ml，置10ml容量瓶中，用氯仿定容至刻度，混匀。
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第五章实验总结与讨论
通过对黄草乌不同炮制方法科学性对比研究，客观的阐述了黄草乌炮制后有效成分的动态变化。对黄草乌的炮制辅料的研究表明，黄草乌辅料，特别是生姜、甘草在传统医学上有解毒作用的辅料对黄草乌炮制后有效成分有较大影响。对黄草乌辅料炮制进行科学性和必要性的阐述，为能简化黄草乌的炮制工艺，提高可操作性奠定了基础。
研究表明以滇乌碱、8-去乙酰基滇乌碱、南乌碱乙、黄草乌碱甲、黄草乌碱丙、黄草乌碱甲、黄草乌碱丙、甘草苷、GeniculatineC能作为黄草乌炮制品有效成分的对照品，能很好的规范黄草乌的炮制工艺。为黄草乌药材的规范炮制提供引导，为黄草乌饮片的炮制规范提供科学依据，为进一步研究黄草乌中成药制剂的临床安全性和有效性奠定基础。
尽管目前已经对黄草乌生药材和黄草乌炮制品的化学成分有比较深入的研究，但从文献的调研尚未见有关黄草乌炮制方法，炮制辅料及其炮制过生程对黄草乌药材的影响。因此，对黄草乌不同炮制方法，炮制辅料及炮制过程的进行初步研究，对有效成分动态变化进行科学阐述，可为黄草乌药材的规范炮制提供引导，为黄草乌饮片的炮制规范提供科学依据，为进一步研究黄草乌中成药制剂的临床安全性和有效性奠定基础。只有炮制规范简便易行，利于大规模生产，才能实现炮制品的均一性和稳定性，为黄草乌相关制剂的临床安全性和有效性提供有力保障。
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参考文献（略）