前 言
绿绒蒿因全株长满绒毛或刚毛而得名；生长周期短（大雪融化之时的 5 月～大雪再次封山的 10 月），野生植物资源珍稀。绿绒篙以其花大、色泽艳丽、姿态优美而著称，具有很高的观赏性，已成为享誉海内外的珍稀高山花卉，被誉为“高山牡丹”和“高山花卉的明珠”；欧洲人推崇为“世界名花”。本属植物虽然不做中药材使用，但部分品种在传统藏医药中却有着悠久的应用历史。红花绿绒蒿为中国特有种，为国家二级重点保护野生植物。
“欧贝”类绿绒蒿为藏医临床大量使用、多基源、品种不清的藏药材，在藏族地区具有悠久的使用历史和广泛的应用。成书于公元八世纪的藏医古籍《月王药诊》中记载了“欧贝”、“刺儿恩”、“木琼”、“阿夏择哦”等均为绿绒蒿属植物。《晶珠本草》记载：花类药材绿绒蒿（藏药名：欧贝）清肝热、肺热，并能治热邪引起的喉阻塞；生于高山阴坡，根单一，状如防风叶；先端圆，淡绿色，被小毛，花状如藏金盏，荚果状如半个空心金刚，种子小，黑色，多粒，味甘涩，气味芳香；由于花的颜色不同分为四种，白花绿绒蒿治培根病、龙的合并病，蓝花绿绒蒿清热，治赤巴病，红花绿绒蒿治血分病，黄花绿绒蒿治培根病[3]。藏医经典巨著《四部医典》记载绿绒蒿一般都不以全草入药，而以花入药，效果尤好。与其他药材作为复方一起使用，如二十五味绿绒蒿丸、二十五味松石丸、毛瓣绿绒蒿八味方、红花七味方、竹黄安乐方等 120 个经典藏药复方制剂都在使用绿绒蒿类药材[4-5]；2002 年国家药品监督管理局颁布的《国家中成药标准汇编》内科肝胆分册中，多种疏肝、利胆的中藏药标准中，均含有绿绒蒿；1995年《部颁标准·藏药分册》收载绿绒蒿药材标准，标准编号为WS3-BC-0098-95，明确指出绿绒蒿药材为全缘叶绿绒蒿、五脉绿绒蒿和长叶绿绒蒿；收载藏成药处方中有 31 个处方中使用绿绒蒿，但是只有 6 个处方中明确应用的是多刺绿绒蒿、2 个处方中明确应用的五脉绿绒蒿，其他无明确规定。《藏药志》记载各地藏医所用绿绒蒿的原植物为五脉绿绒蒿 Meconapsis quintuplinervia Regel、红花绿绒蒿 M. punicea Maxim、全缘叶绿绒蒿 M. integrifolia (Maxim.)Franch、尼泊尔绿绒蒿 M.napaulensis DC. Prodr 和毛瓣绿绒蒿 M. torquata Prain in Ann[6]。《中华本草 藏药卷》收载的绿绒蒿属药材有毛瓣绿绒蒿、全缘绿绒蒿、红花绿绒蒿和单叶绿绒蒿 M. simplicifolia (D. Don) Walp[7]。《现代中药学大辞典》收载的绿绒蒿药材为全缘叶绿绒蒿[8]。《新修晶珠本草》记载白花绿绒蒿来源于白花绿绒蒿 M. argemonantha Prain in Bull、黄花类绿绒蒿、红花类绿绒蒿、紫花类和蓝花类的绿绒蒿[9]。通过在四川藏区地区医疗机构走访发现，当地藏医主要根据当地绿绒蒿生长的品种而选择入药，以花的颜色分类，而不具体到某一植物种。
四川藏医临床主要使用紫色或蓝紫色花的绿绒蒿用于治疗肝病，很少使用其他花色绿绒蒿，并且很少用于肺部疾病的治疗，这与藏药本草的记载有所出入。同时，“欧贝”类绿绒蒿入药的植物种基源不清、药材质量标准粗浅、无法做到所涉及藏成药的质量可控，生物活性物质不明确，功效不够确切，无从保障临床疗效。另外，紫色或蓝紫色花的“欧贝”类绿绒蒿野生植物资源濒临灭绝，已经无法满足藏医临床大量配方入药的需求以及保障藏医临床独特疗效，亟待在保护现有珍稀野生植物资源的前提下，寻找缓解该藏药用植物的资源。因此，诸多科学问题亟待解决，主要问题如下：（1）藏医临床用量最大的“清肺热、肝热”的“欧贝”类紫色或蓝紫色花的绿绒蒿野生植物资源濒临灭绝，花的产量极低，可持续性原料供给如何实现？（2）现代藏医认为紫色或蓝紫色花的绿绒蒿的花入药，用于“清肺热、肝热”的科学依据是什么？（3）黄色花和红色花的绿绒蒿的花与紫色或蓝紫色花的绿绒蒿的花的药效是相近或如藏医认为药效并不一致？（4）同颜色花的全植株是否可以与花同等入药？（5）绿绒蒿药材的药效物质基础是什么？
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第一章 藏药材绿绒蒿的生药鉴别研究
目前，部颁藏药标准仅收载了全缘叶绿绒蒿、五脉绿绒蒿和长叶绿绒蒿的性状和全缘叶绿绒蒿根、五脉绿绒蒿和长叶绿绒蒿茎的组织切片和粉末鉴别；刘炳仑[10]曾报道了我国罂粟科植物的花粉形态，描述了绿绒蒿属花粉 13 种和 2 变种，但只对部分种进行了扫描电镜观察，未对红花绿绒蒿和川西绿绒蒿进行扫描电镜观察。通过观察原植物和药材性状、内部组织结构、粉末等方式，对药材的形态、组织、细胞和细胞后含物等特征进行鉴别，是药材鉴别的重要手段[11]；植物的花粉粒形态结构不易受环境因素影响，特征稳定，反映了植物类群间的演变规律，可为植物的种属分类提供科学依据[12-13]。药材的基源鉴别是中药、民族药开发和研究的基础，准确无误的药材基源能获得可靠的实验数据，最终保障成药的质量和临床疗效。任何现代鉴定方法的基础均为原植物鉴别，经过原植物准确鉴定后可为后期准确、简便的现代中药学鉴定方法如分子鉴定技术和光谱鉴定技术提供样本基础。因此，本研究拟采用光镜（OM）法和扫描电镜（SEM）法对全缘叶绿绒蒿 M. integrifolia、红花绿绒蒿 M. punicea 和川西绿绒蒿 M. henrici 的原植物和药材性状，根、花葶、叶、花的内部组织结构，花粉末特征，花粉粒表面结构进行观察，以期为藏医临床常用三种绿绒蒿的鉴别提供科学资料。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
全缘叶绿绒蒿，2014 年 6 月 21 日采于四川省康定县雅家埂（海拔 4000m）；红花绿绒蒿，2014 年 6 月 23 日采于四川省红原县月亮湾（海拔 3600m）；川西绿绒蒿 2013 年 7 月 6 日、2014 年 6 月 20 日采于四川省马尔康县梦笔山（海拔 4200 m）和四川省康定县折多山（海拔 4300 m），经罗达尚教授和西南民族大学民族医药研究院刘圆教授鉴定为罂粟科（ Papaveraceae）绿绒蒿属（ Meconopsis） 植物全缘叶绿绒蒿 M.integrifolia (Maxim.) Franch、红花绿绒蒿 M. punicea Maxim 和川西绿绒蒿 M. henrici Bur. et Franch。
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2 方法与结果
2.1 电镜观察方法
将干燥后的花药用双面胶粘于样品台上，然后用铂金（Pd-Au）直接镀膜，置于扫描电镜下观察，拍照。
2.2 显微样品制备
横切面制片：新鲜药材经 FAA 固定后，按常规石蜡切片法切片，番红-固绿法染色，加拿大树脂胶封片，制成永久装片。显微镜下观察，显微成像系统成像。
粉末制片：取干燥样品，粉碎，过 80 目筛，水合氯醛试液和稀甘油试液装片。显微镜下观察，显微成像系统成像。
2.3 鉴别研究
2.3.1 原植物
全缘叶绿绒蒿：草本，全株高 30～80 cm，被金黄色长柔毛。主根粗约 0.5～1 cm，具纤维状细根和侧根。茎粗壮，具纵向条纹。叶基生，呈莲座状，基部有较多宿存的叶基，并且密被长柔毛；叶倒披针形或匙形，全缘，被毛，长约 6～25 cm，宽 1～3 cm，基部渐狭，具 3 条明显纵脉。花生于茎生叶腋内，4～6 朵；花葶长约 20～40 cm；花瓣倒卵形，被刚毛，长约 5～6 cm，宽 3～4 cm，黄色；花丝线形，长约 1.5～2 cm，淡黄色；花药卵形，长约 1mm；子房卵圆形或椭圆形，密被金黄色柔毛；花柱短，柱头头状。花果期为 5 月～8 月。见图 1-1。
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第三章 三种不同花色绿绒蒿花和植株抗氧化活性和“清肝热、肺热”功效研究........25
第一节 三种不同花色绿绒蒿花的醇提取物和植株总黄酮体外抗氧化作用研究........25
1 材料与方法........................................................26
第四章 高速逆流色谱法分离纯化藏药材全缘叶绿绒蒿花的黄酮类成分....... 61
1 材料........................................................62
2 方法...........................................................62
第五章 全缘叶绿绒蒿谱效关系及质量评价研究......................73
第一节 全缘叶绿绒蒿抗氧化作用的谱效关系研究...................73
1 仪器与材料.............................................73
第五章 全缘叶绿绒蒿谱效关系及质量评价研究
第一节 全缘叶绿绒蒿抗氧化作用的谱效关系研究
中药及民族药由植物药、动物药和矿物药等组成，组分复杂，发挥疗效作用为多组分、多靶点及多途径协同作用的结果。近年来发展的中药指纹图谱从整体上最大程度地反映中药中所含的化学成分和含量，但仅仅是中药提取物的指纹图谱与药效关系并不明确，单纯的中药化学指纹图谱无法准确反映中药质量[93-95]。研究表明，ROS引发的氧化应激是多种肝病的共同病理生理基础[37]，因此，MITF 的极强抗氧化活性与其肝损伤保护作用具有密切关系。本研究以现代中药谱-效关系研究方法为背景，以 MITF 的指纹图谱和体外抗氧化活性为基础，采用统计学方法（主成分分析、灰色关联度分析法[95]）对指纹图谱-药效数据进行处理，探寻 MITF 中主要化学成分与抗氧化活性之间的相关性，为研究全缘叶绿绒蒿药材的效应物质基础提供科学依据。
1 仪器与材料
Waters ACQuity 超高效液相色谱仪，包括四元泵溶剂系统、自动进样器、PDA 检测器和 Empower 3 色谱工作站（美国 Waters 公司）；Waters Quattro Premier XE 质谱仪（美国 Waters 公司）；TU-1950 紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；Telstar LyoQuest 冷冻干燥机（西班牙 Telstar 公司）；IKA RV10旋转蒸发仪（德国 IKA 公司）；Sartorious BT 25 S 十万分之一电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；ESJ200-4 万分之一电子天平（沈阳龙腾电子有限公司）。
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结 语
1 结语
（1）对三种不同花色的绿绒蒿药材进行了系统生药鉴别研究。通过原植物鉴别、性状鉴别、显微鉴别的方法，准确区分全缘叶绿绒蒿、红花绿绒蒿和川西绿绒蒿。花颜色的差异和植株大小不同是三种绿绒蒿最明显的差异；根的差异、花粉囊内壁细胞的特征也可以准确鉴别三种绿绒蒿。花粉粒由于具有稳定的遗传特征和不受环境影响等特点，也可作为三种绿绒蒿鉴别的特征。全缘叶绿绒蒿和红花绿绒蒿的花粉粒较为相似，但仔细观察发现二者表面的平滑程度有差异，刺状凸起也有一定差别。
（2）不同花色、不同药用部位绿绒蒿药材的药效学比较研究。通过比较三种不同花色绿绒蒿植株总黄酮的体外抗氧化能力、肝损伤和肺损伤保护作用、以及三种不同花色绿绒蒿花的醇提取物对细胞炎症的作用，表明三种绿绒蒿植株总黄酮均能有效降低 ALT、AST，升高 SOD 活力、降低 MDA，以抵御肝损伤导致的氧化应激，减轻肝细胞坏死程度，与水飞蓟宾具有相似或更好的效果，其中以蓝紫色花的川西绿绒蒿降 ALT、AST 的效果最好，其次为全缘叶绿绒蒿，最后为红花绿绒蒿；全缘叶绿绒蒿的抗氧化作用效果最好，这与川西地区藏医以紫色或蓝紫色花绿绒蒿用于肝病治疗的用药经验一致，也说明可以用蓝紫色花绿绒蒿的全草与其花等同入药治疗肝病。研究发现，全缘叶绿绒蒿的抗氧化作用效果最好，其对肝损伤也有很好的保护作用，其较强的抗氧化作用可有效缓解肝病引发的氧化应激，并且由于全缘叶绿绒蒿资源丰富，植株大，因此，建议将全缘叶绿绒蒿的花和全草与紫色或蓝紫色花的绿绒蒿同等入药，用于肝病治疗，或利用全缘叶绿绒蒿提取物开发成藏医特色的肝病治疗药物。
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参考文献（略）