引 言
中药配方颗粒是一种新兴中药饮片形式，与传统煎剂相比，配方颗粒既能满足中医辨证论治的要求，并且质量稳定，同时又具有方便、快捷的特点，在临床实践中得到了越来越广泛的应用。中药配方颗粒市场发展迅速，持续扩容，销售量逐年增加，2009 年全国生产中药配方颗粒为2500吨，销售额达10.9 亿元人民币[1]，成为中药饮片行业发展的新助力。建立中药配方颗粒质量控制标准，解决中药配方颗粒最基本的真伪鉴别、质量优劣及安全性评价等问题是中药配方颗粒行业发展和国际化的当务之急[2-3]。
投料时除去杂质，大小分开，洗净，润透，切薄片，干燥[4]。主产于安徽、山东、四川、浙江、黑龙江、吉林、辽宁、河北、河南、山西、陕西、内蒙古等地。具有补血柔肝、平肝止痛、敛阴收汗等功效，适用于阴虚发热、月经不调、胸腹胁肋疼痛、四肢挛急，泻痢腹痛、自汗盗汗、崩漏、带下等症。白芍含有多种化学成分，如单萜类、三萜类、黄酮类和挥发油等，主要有芍药苷、芍药内酯苷、氧化芍药苷、苯甲酰芍药苷，还有挥发油、脂肪油、树脂、鞣质、糖、淀粉、粘液质、蛋白质、β-谷甾醇等[5]。现代研究表明，白芍具有补血作用，白芍水煎液可改善和促进环磷酰胺致血虚小鼠的造血功能[6]，还可升高环磷酰胺致血虚小鼠白细胞数和骨髓细胞数，可提高环磷酰胺减少的小鼠脾脏系数[7]，同时，研究证明白芍醇提液具有抗炎和镇痛的作用[8]，白芍总苷可通过调节中枢单胺类类神经递质发挥抗抑郁作用[9]。
......
第一部分白芍配方颗粒质量研究
前 言
在本部分的研究中，对白芍配方颗粒进行了薄层定性鉴别研究，最终制定了白芍配方颗粒薄层色谱鉴别方法；现代药理研究发现白芍中的主要成分芍药苷为主要活性成分，该类成分具有一定的水溶性，白芍在中药传统方剂中多以汤剂入药，故以水为溶媒对白芍有效成分进行提取，并制定了芍药苷的含量测定方法，并完成了含量测定的方法学考察。
......
材料与方法
1 材料与仪器
1.1 材料
白芍配方颗粒（批号：14070911、14081921、14101511）
由神威药业集团有限公司提供；白芍对照药材（批号：120905-201109）
购自中国食品药品检定研究院。芍药苷（批号：110736-201438）
购自中国药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯、水为屈臣氏纯化水，其他试剂均为分析纯。1.2 主要仪器
电子分析天平（Mettle ToledoAT201 1/10 万）
BS223S 电子天平（德国赛多利斯公司 1/万）
KQ-250 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，功率 250 W，频率 40 kHz）
ZF-2 型三用紫外灯（上海市安亭电子仪器厂）
电子恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）
硅胶G板（青岛海洋化工厂）
高效液相色谱仪：岛津 LC-15C 液相色谱仪，SPD-15C 型紫外检测器，SIL-10AF 自动进样器、CTO-15C 柱温箱、岛津高效液相色谱 LC 工作站。
2 方法
2.1 定性鉴别研究
2.1.1 供试品溶液的制备 取本品研细，称取 0.5 g，加甲醇 3 mL，超声处理 10 分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.1.2 对照药材溶液的制备 取白芍对照药材 0.3 g，加甲醇 3 mL，超声处理 10 分钟，滤过，作为对照药材溶液。
2.1.3 薄层色谱鉴别 照薄层色谱法（《中国药典》2010 年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述溶液各 2-5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（6:1:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5%香草醛硫酸溶液-乙醇（1:6），加热 105℃至斑点显色清晰。
......
第二部分 白芍配方颗粒体外抗 HepG2 细胞增殖活性初步研究
前言…………………………………………………………………21
材料与方法…………………………………………………………21
结果…………………………………………………………………24
附表…………………………………………………………………25
附图………………………………………………………………26
讨论…………………………………………………………………27
小结…………………………………………………………………28
参考文献……………………………………………………………28
结论………………………………………………………………………30
第二部分白芍配方颗粒体外抗 HepG2 细胞增殖活性初步研究
前 言
白芍具有补血柔肝、平肝止痛、敛阴收汗等功效，现代药理学研究表明白芍具有保肝、镇痛、镇静、抗惊厥、免疫调节、改善血液流变学/促进造血、抗炎等广泛的药理活性[1]，白芍总苷（Total glucosides of paeony,TGP）为其主要有效部位，近些年研究发现，白芍总苷可抑制肝癌 HepG2细胞、人肝癌 SMMC-7721 细胞增殖，且呈浓度依赖性[2~3]，显示了其具有较好的体外抗肿瘤活性。白芍配方颗粒是以白芍饮片为原料采用现代工艺制成的颗粒，供临床配方使用，应用普遍，为评价白芍的体外抗肿瘤作用，本部分研究以白芍配方颗粒为载体，以人肝癌 HepG2 细胞为研究对象，采用 MTT、荧光染色技术，对白芍配方颗粒的体外抗肿瘤作用进行了初步评价，以期为白芍配方颗粒的进一步开发及临床应用提供实验依据。
......
材料与方法
1 材料与仪器
1.1 材料
白芍配方颗粒：由神威药业集团有限公司提供，批号：14101511；高糖 DMEM：美国 Gibco，批号 1148777；胎牛血清：美国 Gibco，批号1420768；PBS：河北博海生物工程有限公司；Hoechst 33342：美国 ThermoFisher Scientific 公司；胰酶、青霉素、链霉素、MTT、DMSO 均来自美国Amresco 公司。
1.2 耗材与仪器
培养瓶、培养板、枪头等耗材 美国 Corning Coster 公司
0.22μm 微孔滤膜 上海兴亚净化材料厂
BSA224S-CW 分析天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司
DK-98-1 型电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器有限公司
液氮储存容器 美国 Thermo Fisher Scientific
微量移液器 德国 Eppendorf 公司
超纯水制造系统 四川优普超纯科技有限公司
KQ250E 超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司
DHG-9123A 电热恒温干燥箱 上海一恒科技有限公司
超低温保存箱 海尔集团
立式压力蒸汽灭菌器 山东新华医疗器械股份有限公司
......
讨 论
白芍配方颗粒临床应用广泛，有文献报道其有效部位白芍总苷有较好的体外抗肿瘤活性，但关于白芍配方颗粒体外抗肿瘤活性目前尚未见报道，在本研究中，采用 MTT 法观察了白芍配方颗粒对肝癌 HepG2 细胞增殖的抑制作用，发现：白芍配方颗粒可明显抑制 HepG2 细胞增殖，随着剂量的增大，抑制作用增强。从细胞凋亡角度看，肿瘤的发生是由于凋亡受阻所致，有多种不同的方法用于研究细胞凋亡，Hoechst 33342 染色常用于细胞凋亡检测，Hoechst 33342 属于细胞核染料，可以少许穿透正常细胞膜，与细胞核的 DNA 结合，经过紫外光激发后呈现淡蓝色荧光，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的 Hoechst 33342 比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，并且晚期凋亡细胞的核形态也会发生典型变化，核面积缩小，出现核固缩与破碎这一典型的凋亡形态特征，主要是由于 DNA 降解或核染色质聚集所导致，并有可能伴随有细胞数量的直接下降，染色后常用荧光显微镜进行荧光强度及核形态的观察，为了观察白芍配方颗粒对 HepG2 细胞凋亡的影响，我们采用Hoechst33342 染色进行观察，发现 0.4 g/L、1.6 g/L 白芍配方颗粒孵育细胞，可观察到细胞核浓染现象明显，核质浓缩以及细胞核破碎等细胞凋亡变化，以上研究表明白芍配方颗粒有抑制 HepG2 细胞增殖、诱导凋亡的作用，有一定的抗肿瘤活性，以上研究结果为白芍配方颗粒的临床应用提供了实验的依据，关于白芍配方颗粒对 HepG2 细胞凋亡相关作用机制的探讨，还有待进一步的研究。
......
结 论
在本研究中采用薄层色谱法对白芍配方颗粒进行了薄层色谱鉴别；采用 HPLC 法对白芍中芍药苷的含量进行测定，研究结果表明，该法准确、灵敏、省时、重复性好，能够有效控制制剂的质量。
采用体外实验的方法，以人肝癌 HepG2 细胞为对象，采用 MTT 法观察了不同浓度白芍配方颗粒对HepG2细胞增殖的影响，采用Hoechst33342染色法观察了白芍配方颗粒对 HepG2 细胞凋亡的影响，对白芍配方颗粒的体外抗肿瘤活性进行了初步评价，发现，白芍配方颗粒体外抗肿瘤活性显著，并呈现浓度依赖性。综上所述，本研究对白芍配方颗粒的质量及体外抗 HepG2 细胞增殖活性进行了初步研究，相关研究结果为白芍配方颗粒的质量控制及临床应用提供了实验依据。
......
参考文献（略）