第一章绪论
1.1选题依据
本课题来源于国家中医药管理局中医药行业科研专项（201207004-7）全国中药饮片炮制技术规范研究分项目“燀制、结晶的炮制规范及操作指南和20种饮片炮制规范”中的一部分。本课题通过查阅历代药典、古今文献资料及全国各省市地方炮制规范，发现地龙酒炙最为常见，全国对地龙进行酒炙的约有六个省市（安徽、福建、贵州、浙江、河南、河北等），牡丹皮酒炙的约有福建、广东、河南等省。可是不同地方加酒量、炮制方法都有差异，因此国家提出了统一炮制工艺，建立两种饮片全国炮制技术规范的要求。
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1.2酒制的研究现状
中药材需经炮制后方能入药[1]，而酒制法则是中药材非常重要的一种炮制方法。中药酒制是根据中医理论，以一定量炮制用酒润透净药材或者药材切片后，再经过炒制、炖制、蒸制、淬制等方式处理的炮制方法，是中药炮制中最常用的方法之一。据不完全统计，历史上曾用酒炮制入药的药材约有270种，沿用至今的约为85种左右[2]。中药酒制法历史由来已久，早在马王堆汉墓出土的帛书《五十二病方》中就有酒渍、酒制丸的记载，并首次提出酒煮的炮制方法。到汉代《金匮要略》出现酒洗、酒煮、酒浸、酒蒸的炮制方法[3]。唐代《千金翼方》出现了酒淬的炮制方法：“先取一瓷器贮二升无灰酒，烧石令赤，即投入酒中待冷”[4]。至宋代《薄济方》中则有了酒炒的记载：“菟丝子一两半，酒浸一宿后，炒黄”[5]。此后，元、明、清时代出现的中医药专著陆续对酒制的方法有了更为详尽与完善的记载。
酒制法中最为常见的是酒炙法，酒炙法是指将净药材或切制品，加酒拌匀，闷透，置锅内，用文火炒至规定的程度时，取出放凉的酒制方法。现代对于酒炙也有很多的研究与记载。据不完全统计，《全国中药炮制规范》收载的酒炙药物有39种[6]，龚千峰主编的普通高等教育“十一五”国家级规划教材《中药炮制学》中记录收载的酒炙药物有18种[7]，2005版《中华人民共和国药典》一部收载的酒炙药物有16种[8]，2010版《中华人民共和国药典》一部收载有酒炙药物21种[9]。
关于酒炙机理，历来研究较多。有研究认为[11,12]，酒具升提作用，而中医临床应用的很多都为苦寒之药，性本沉降，多用于清下焦湿热。酒炙之后，一方面能缓和其苦寒之性，以免药材的寒凉伤及脾胃阳气；另一方面，能借助酒的升提之势引药上行，以清上焦邪热，还能通达全身，驱邪外出。酒主要有效成分为乙醇，乙醇可以兴奋心脏，促进血液循环。酒的溶解性介于极性和非极性溶媒之间，易透过膜性结构，这也符合酒善行血脉的特点[10,13]。酒作为一种良好的有机溶媒，能溶解药物中的多种水溶性和脂溶性成分，如生物碱及其苷类、有机酸类、鞣质、苦味质、树脂、挥发油、糖类及部分色素等[14]。因此药物经酒制后，能改变药物组织的物理状态，有利于成分的浸润、溶解、置换、扩散等溶出过程，对某些药物还有脱吸附作用，提高有效成分的溶出率。对于当归、益母草、白芍等活血化瘀药酒炙后则能与药物起协同作用，增强药物的活血化瘀的功效；对于地龙、蕲蛇、蛇蜕等祛风通络药，经酒炙后，则可增强其祛风通络的作用；对于肉苁蓉、地黄、女贞子等温肝补肾药，酒炖或酒蒸能缓和药物的酸涩之性，使其味转甘厚，增强其温肝补肾的作用[15]。除此之外，酒还具矫味矫臭作用。一些动物类药材如蕲蛇、地龙、蜈蚣等，腥臭之气较为强烈，如果生品用药，容易引起病人的不适感，产生恶心、呕吐等不利于病情恢复的反应，经过酒炙后则能减弱或消除药材的腥臭之气，便于患者服用。再者，酒还有利于药物的保存，酒具杀菌消毒防腐作用，很多动物类药材为血肉筋骨制品，含有丰富的蛋白质、脂肪等营养成分，贮藏过程中容易腐坏，不利于药物的保存及药物的推广应用，经酒炙后则能借酒的防腐作用利于药物的保存。
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第二章酒地龙炮制工艺及饮片质量标准研究
第一节酒地龙炮制工艺研究
1.1仪器Waters2695型高效液相色谱仪，2998PDA检测器；Luna5μC18色谱柱（4.6×250mm，5μm）；KQ-500E超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；SartoriusBP211D1/10万电子天平GZX-9240MBE数显鼓风干燥箱。
1.2试剂流动相：乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、磷酸（分析纯）、屈臣氏蒸馏水；其他试剂甲醇、乙醇均为分析纯。
1.3试药次黄嘌呤对照品（中国食品药品检定研究院，批号：140661-200903）；黄酒（购于成都巨龙生物科技有限公司，生产日期：2013-01-14）；地龙购于广州市清平药材市场，经广东药学院李书渊教授鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretimaaspergillum(E.Perrier)的干燥体。
2方法与结果
2.1黄酒加水量的考察
取地龙药材100g，加入一定量比例的用水稀释过的黄酒，用玻璃棒拌匀，闷润1个小时。观察闷润后的地龙药材的性状，确定液体的最佳用量。
由以上试验结果可知，地龙酒炙药材与辅料液体的最佳比例为每100g地龙，加40ml的液体，即可彻底闷透。
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2.2正交试验
2.2.1正交试验水平和因素
本实验综合参考古代文献，历代药典和全国各省市中药材炮制规范，选择加酒量、闷润时间以及炒制温度（药温）为考察因素，以地龙有效成分次黄嘌呤和浸出物为指标，采用L9(34)正交表进行炮制工艺的优选，确定正交实验因素水平表2。
本研究以加酒量、闷润时间和炒制温度为影响因素，以次黄嘌呤和水溶性浸出物为指标，选用L9(34)正交表进行实验研究。对次黄嘌呤和水溶性浸出物二者进行加权综合评分。有文献表明，次黄嘌呤是地龙平喘镇咳的有效成分[51]，而地龙水提物成分复杂，主要含有蛋白质等成分，有较明显的抗凝活性[52,53]，因此均给予两指标50%的权重。各评价指标加权处理如下：次黄嘌呤含量评分=各样品次黄嘌呤含量×50/9个样品中次黄嘌呤最高含量；浸出物含量评分=各样品浸出物含量×50/9个样品中浸出物最高含量；综合评分=次黄嘌呤含量评分+浸出物含量评分。正交实验直观分析表见表5，方差分析表见表6。
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第二节酒地龙质量标准研究
1仪器与试药
1.1仪器Waters2695型高效液相色谱仪，2998PDA检测器；Luna5μC18色谱柱（4.6×250mm，5μm）；KQ-500E超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；SartoriusBP211D1/10万电子天平，双槽薄层层析缸（10cm×10cm），紫外灯（北京市六一仪器厂），玻璃薄层板（5cm×10cm，10cm×10cm），坩埚钳，坩埚，移液管，GZX-9240MBE数显鼓风干燥箱，SX2-4-10型高温箱形电炉。
1.2试剂流动相：甲醇（色谱纯）、屈臣氏蒸馏水；其他试剂甲醇、乙醇均为分析纯。
1.3试药次黄嘌呤对照品（中国食品药品检定研究院，批号：140661-200903）；黄酒（购于成都巨龙生物科技有限公司，生产日期：2013-01-14）；地龙购于广州市清平药材市场。
2方法与结果
2.1性状鉴别
由于3批次的地龙产地来源尚不明确，单用酒炙后3批酒地龙饮片的各指标数据来制定饮片质量标准，不符合质量标准需要收集不同产地样本的规定，难以代表不同地区地龙酒炙后的指标数据。为客观制定酒地龙的各指标限量，将炮制品与生品结合，计算出其各指标的增量的平均值，再乘以2010版《中国药典》（一部）中记载地龙生品的对应的各指标的限量值，即为增加的量，再加上对应指标的药典限量值。
取供试品2~5g，平铺于干燥至恒重的变形称量瓶中，厚度不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在100~105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷却30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。测得3批样品的含水量分别为8.27%，7.14%，7.73%。
由于水分的多少关系到饮片的保存，贮藏等问题，每批饮片都应控制在一定水分量以内，这意味着不论该饮片炮制前的水分含量是多少，炮制后都应有确定的范围，炮制后的水分变量与炮制前无关，所以计算水分的变量的意义不大。本研究采用炮制后每批饮片的水分量的平均值的120%来确定水分限量。3批炮制品水分的平均值为7.71%，平均值的120%为9.25%。因此，最终确定酒地龙的水分含量应不得超过10.0%。
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第二章 酒地龙炮制工艺及饮片质量标准研究.............8
第一节 酒地龙炮制工艺研究.........................8
1 仪器与试药...................................... 8
1.1 仪器........................................... 8
1.2 试剂........................................... 8
第三章 酒牡丹皮炮制工艺及饮片质量标准研究............23
第一节 酒牡丹皮炮制工艺研究...........................23
1 仪器与试药.......................................... 23
1.1 仪器............................................. 23
结语 .................................................62
第三章酒牡丹皮炮制工艺及饮片质量标准研究
第一节酒牡丹皮炮制工艺研究
1仪器与试药
1.1仪器LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津)；DAD检测器；LunaC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；KQ-500E超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）；SartoriusBP211D1/10万电子天平。1.2试药丹皮酚对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110708-200505）；芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110736-201337）；黄酒（购于成都巨龙生物科技有限公司，生产日期：2013-01-14）；牡丹皮购于广州市清平药材市场，经广东药学院李书渊教授鉴定为毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr．的干燥根皮；乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、磷酸（分析纯）、水为屈臣氏蒸馏水；甲醇、乙醇均为分析纯。
2方法与结果
2.1黄酒加水量的考察
取牡丹皮药材100g，加入一定量比例的用水稀释过的黄酒，用玻璃棒拌匀，闷润30min。观察闷润后的牡丹皮药材的性状，确定液体的最佳用量。
由以上试验结果可知，牡丹皮药材与液体的最佳比例为每100g牡丹皮，加25ml的液体辅料，即可彻底闷透。
2.2正交试验
2.2.1正交试验水平和因素
选择加酒量、闷润时间以及炒制温度（药温）为考察因素，以牡丹皮有效成分丹皮酚、芍药苷以及乙醇浸出物为指标，采用L9(34)正交表进行酒炙工艺优选，确定各因素水平见表12。
2.2.2炮制品的制备
取净牡丹皮9份，每份150g，按上述正交试验表加入黄酒，闷润，至炒制容器内，以红外测温仪测定药温，炒至药材近干，颜色加深，微有酒气时取出，晾凉，粉碎过筛，备用。
评价指标加权处理如下：丹皮酚质量分数评分=各样品丹皮酚质量分数×40/9个样品中丹皮酚最高质量分数；芍药苷质量评分=各样品芍药苷质量分数×20/9个样品中芍药苷最高质量分数；醇浸物质量分数评分=各样品醇浸物质量分数×40/9个样品中醇浸物最高质量分数；综合评分=丹皮酚质量分数评分+芍药苷质量分数评分+醇浸物质量分数评分。正交实验设计见表15，方差分析表见表16。
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结语
本课题是国家中医药管理局中医药管理局中医药行业科研专项（201207004-7）全国中药饮片炮制技术规范研究分项目“燀制、结晶的炮制规范及操作指南和20种饮片炮制规范”中的一部分。2009年，由国务院发布的《关于扶持和促进中医药事业发展的若干意见》，首次将中药饮片纳入了国家基本药物目录。中药饮片是指中药材通过按中医药理论、中药炮制方法，经过炮制加工后制成的，可直接应用于中医药临床的药物。中药炮制是指根据中医药理论，依照辩证施治用药的要求和药物自身的性质，以及调剂、制剂等的不同要求，所采取的一项制药技术。中药炮制技术从古至今经历了漫长的发展阶段，从古代只能闻其气味，看其颜色，观其性状等主观判断到如今通过精密仪器可以准确检查某些成分的含量，从而控制饮片的质量，中药炮制技术已经越来越成熟。
1963年，中药炮制技术被正式列入我国药典，成为中药临床应用的一大特色。但目前我国的中药炮制仍存在很多的不足之处，许多中药饮片没有统一的炮制工艺，而形成了一种各地有各法的混乱局面。本课题的研究意义在于统一不同中药饮片的炮制工艺，为中药饮片临床用药提供依据。本课题通过查阅历代中国药典、古今文献及全国不同地方炮制规范，发现地龙、牡丹皮均有多个省记载有酒炙，却无统一的具体的工艺参数。本课题以多个指标的综合加权评分，通过正交试验优选出了酒地龙、酒牡丹皮的最佳炮制工艺。并分别按照最佳工艺炮制多个批次样品，对各样品从性状鉴别、薄层鉴别、显微鉴别、水分测定、灰分测定、浸出物测定、含量测定等方面进行了全面的检测，分别制定了酒地龙、酒牡丹皮的饮片质量标准。同时还建立了酒牡丹皮高效液相指纹图谱，进一步控制了酒牡丹皮饮片的质量。
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参考文献（略）