导语：本研究观察解聚复肾宁对糖尿病大鼠肾组织肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1和血清TNF-α的影响,探讨其肾保护作用机制。由本站硕士论文中心整理。
前言
糖尿病肾病 (diabeticnephropat勿，DN)是糖尿病 (diabetesmellitus，DM)严重的微血管并发症之一，其发病机制尚未完全阐明。近年认为，DN是一种由代谢紊乱引起的炎症性疾病I’]。许多动物实验及临床资料均提示DN除了糖、脂代谢紊乱，血流动力学异常外，往往还存在细胞因子、炎症介质水平上升和炎性细胞浸润，故炎症可能单独或作为上述机制的下游环节，在DM肾损害中起一定作用。肿瘤坏死因子一a(TNF一a)和单核细胞趋化蛋白一1(MCP一l)是参与DN的两个重要炎症介质[4，5]。DM状态下，高糖、血流动力学障碍等均可损伤肾脏固有细胞，肾脏固有细胞在病理状态下可以产生TNF一a、白细胞介素一1(IL一1)、白细胞介素一6(IL一6)、一氧化氮(NO)等多种炎症因子，这些因子又通过自分泌和旁分泌方式使炎症效应不断扩大，引起炎症级联反应。
本研究旨在用临床上治疗DN疗效较好的中药复方制剂解聚复肾宁(JJFSN)干预STZ诱导的糖尿病大鼠，观察其对DM大鼠肾组织下NF一a、MCP一1表达及血清TNF一a的作用，探讨其肾保护作用的机制。
1材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1实验动物
8周龄健康雄性sD大鼠55只，体重180一2209，由重庆医科大学实验动物中心提供。LLZ主要仪器MDF一 382E型一80超低温冰箱OlymPus一BHZ光学显微镜HH一W21一600电热恒温水箱强生稳豪型血糖测定仪TL一05型离心机DFM一%型多管放射免疫计数器H一7500透射电镜日本三洋公司日本OlymPus公司上海医用恒温设备厂美国强生公司北京恒大建海科贸公司众成机电技术公司日本日立公司LL3主要试剂解聚复肾宁(J开SN)由黄茂、黄答、葛根、川芍、丹参、当归、黄连、姜黄等13味中药制备而成，原药购自重庆桐君阁药房，符合国家药典标准，经重庆医科大学中医药学院中药教研室鉴定并制备成浓缩口服液，含生药29/nil。链脉佐菌素美国Sigma公司厄贝沙坦杭州赛诺菲安万特民生制药有限公司抗TNF一a、MCP一1兔多克隆抗体武汉博士德公司免疫组化即用型SABC试剂盒(H抗)武汉博士德公司DAB显色剂北京中杉金桥有限公司TNF一a放免试剂盒北京普尔伟业生物有限公司
1.2方法主要试剂
1.2．l配制方法
(l)0.IM构椽酸一构椽酸钠缓冲液(pH4.2):l)准确称取构椽酸(C6HsO7一 HZO)21.0149，加入双蒸水至1000ml，配成 0.1mol/l溶液;构椽酸钠(Na3H5o7.HZO)29.4119，加双蒸水1000ml配成0.lmoFI溶3)取 54.onil0.lmol/l构椽酸溶液， 46.0ml0.lmol/l构椽酸钠溶液混匀即可。(2)10%水合氯醛配制109水合氯醛溶于looml的蒸馏水中即成。
(3)4%多聚甲醛溶液:40gPFA溶于装有50Oml蒸馏水容器内，持续加热至60一65℃，制备成乳白色悬液，用NaOH(IM)调PH值至7.0，溶液呈清亮状;再加入约 50OnilZxPBS，充分混匀，再次测定PH值，过滤后定容至 1ooomL，4℃保存备用。
(4)o.olM，pH7.4磷酸盐缓冲液(pBS)配制 :NaHZpO4.2HZO0.899，N处 HPO4.12H208.79， NaCI22.89，加蒸馏水300Oml，pH试纸测定PH值7.4。
(5)伊红染液:伊红1.09，蒸馏水99nil。
(6)多聚赖氨酸溶液的配制取多聚赖氨酸原液5ml，加蒸馏水40nil，配制成1:8的多聚赖氨酸溶液，即可用于处理载玻片。
(7)0.50，0高碘酸:高碘酸0.59，加蒸馏水至loonil，40e保存备用。
(8)0.5%偏重亚硫酸钠:偏重亚硫酸钠0.59，加蒸馏水至looml，40c保存备用。
(9)schiff液的配制:碱性品红lg，IN盐酸20nil，偏重亚硫酸钠lg，蒸馏水200ml。将Zooml蒸馏水煮沸，冷却至900c，加入碱性品红，摇动使之溶解，冷却后过滤，至500c时加入盐酸，至25“c时加入偏重亚硫酸钠，摇荡溶解，过夜，过滤后放冰箱40C避光保存备用。
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目录：
符号说明 5-8
中文摘要 8-11
英文摘要 11-14
论文正文:解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠TNF-α、MCP-1和PAI-1/tPA、TXB_2/6-k-PGF(1α)的作用研究 15-55
第一部分 解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠TNF-α、MCP-1的影响 15-32
前言 15
1 材料与方法 15-21
2 结果 21-23
3 讨论 23-31
4 结论 31-32
第二部分 解聚复肾宁对糖尿病肾病大鼠PAI-1/tPA、TXB_/6-k-PGF_(1α)的影响 32-41
前言 32
1 材料与方法 32-33
2 结果 33-34
3 讨论 34-40
4 结论 40-41
......
附图 48-55
文献综述:糖尿病肾病抗炎治疗研究进展 55-71
致谢 71-72
在校期间发表论文情况 72
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