第 1 章 前 言
肝脏在人体发挥着重要的代谢、解毒、吞噬功能，具有保护机体免受外来化学毒物侵害的作用。我国是一个肝脏疾病高发的国家，肝脏疾病的影响范围较广，对国民的健康与国家的经济都存在着严重的危害。目前临床上治疗化学性肝损伤常用的方法是药物治疗，以化学药物为主。但是作为药品，均不适宜长期服用，药物可以在较短的时间内能产生疗效，缓解病情，但长期应用时可能产生不良反应，也可能产生药物依赖性。随着人们对医疗知识的了解与保健意识的加强，人们逐渐认识到治病不如防病，人们从注重治疗转向注重预防。寻找一个疗效确切，副作用较小，易被人们接受的中药保健药物显得尤为重要。
保肝软胶囊是一种纯中药制剂，主要用于预防与缓解化学性肝损伤。该制剂的处方由多年的临床经验得来，由葛根、沙棘、肉豆蔻与栀子这四味中药材组成，经过长期的应用与改进，最终确定。目前市场上用于化学性肝损伤的保健品还很少，所以本文拟开发一种保健品，既可以作为化学性肝损伤的易发人群的预防，也可用于化学性肝损伤的辅助性治疗。该软胶囊功效显著，成本低廉，能够减少药物依赖性的产生，该保健药品若能够得到充分的开发利用，将使化学性肝损伤患者的生活质量得到大幅提升。
第 2 章 文献综述
2.1 课题研究背景
肝脏在人体发挥着重要的代谢、解毒、吞噬功能，具有保护机体免受外来化学毒物侵害的作用。我国是一个肝脏疾病高发的国家，肝脏疾病的影响范围较广，对国民的健康与国家的经济都存在着严重的危害。肝脏疾病主要的发病原因是感染肝炎病毒。流行病学资料表明，我国每年约有 50-100 万新发病例，在全球约有 3.5 亿的慢性乙型肝炎病毒携带者里，中国的患者大约占到 1/3，也就是说我国已经有约 1.2 亿人携带乙肝病毒，其中约有 3000 万人是慢性乙型肝炎患者。从慢性肝炎发展为肝纤维化一般只需要 2 至 6 年的时间，大约有 25%-40%的病人可能发展为肝硬化甚至肝癌，每年因肝脏疾病死亡的人数大约可达 33 万[1-2]。所以，肝脏疾病一直是医学领域里重点研究的对象。
2.2 化学性肝损伤的概念
由化学毒物、酒精与某些药物等具有化学性肝毒性物质所造成的肝脏不同程度的损伤，称为化学性肝损伤。肝脏在人体主要起到解毒的作用，它主要通过肝静脉与肝动脉进行血液供应[3]。环境中的化学性毒物经过体循环都会进入肝脏，在肝脏内进行转化，所以肝脏易受到化学性有毒物质、酒精和某些药物的损害。人们生活的环境中存在着一些对肝脏有毒性的物质，这些物质被称为“亲肝毒物”，这些毒物在人群中普遍存在，人们易受感染，并且亲肝毒物在人体内潜伏期短，可引起肝脏产生不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化与肝癌[4]。
2.3 中药对化学性肝损伤的治疗
2.3.1 中药保肝药的作用机理
2.3.1.1 保护肝细胞膜
细胞膜损伤是肝细胞受损的基本表现。细胞膜受损后可使肝脏可溶性酶的活性升高，使正常的膜流动性与电解质平衡被破坏，细胞内钙的稳态失衡，最终可导致细胞的坏死[5]。这一类药物特异性地与肝细胞膜结合，起到保护、稳定、修复细胞膜，使肝细胞再生、增强磷脂与细胞膜功能、减少脂肪浸润、加强细胞膜的防御能力[6]。马学惠[7]等通过光镜与电镜的观察，丹参模型组肝内未发现明显的增生，肝细胞形态恢复正常，说明丹参具有对已形成的胶原纤维降解与重吸收的功效，具有治疗肝细胞纤维化的作用。同时丹参也降低了肝内的胶原蛋白含量，增加尿羟脯氨酸的排泄。水飞蓟素具有缓解肝纤维化的作用[8]，具有清除活性氧，保护肝细胞膜，维持细胞膜流动性，促进肝细胞修复的作用[9]。杨祚荣[10]等的研究表明，灵芝可以清除、抑制自由基，抑制细胞膜脂质的过氧化，从而增加膜的稳定性。2.3.1.2 促进肝细胞再生
促进肝细胞再生机制为改善肝脏微循环与肝细胞的血供，加强肝细胞的营养供应，促进肝细胞再生与功能的恢复。肝细胞再生能力是改善肝脏功能的重要手段与环节[11]。研究表明，软肝冲剂（由黄茂、三七、穿山甲等组成），具有促进肝细胞再生的功效，抑制肝纤维化与肝硬变的形成，其机制与在细胞增殖周期性负调控中的作用有关[12]。
2.3.1.3 改善肝组织病理
肝组织病理可以较好的反映肝脏病变的情况。实验结果表明，慢性肝损伤与急性肝损伤，中药都具有改善病理的效果。在急性肝损伤的实验中，中药表现出了良好的药效，它可以使急性肝损伤中的细胞肿胀现象得到缓解，减少炎症细胞的浸润，防止肝细胞坏死的发生。在慢性肝损伤的实验中，中药也表现出了良好的抗损伤作用[13]。
2.3.1.4 抗氧化作用
当机体受到有害物质损伤的时候，就会产生大量的自由基，抗氧化物减少，组织细胞的脂质易发生过氧化反应，使组织细胞的正常结构遭到破坏，正常代谢和功能受到影响，组织细胞发生损伤性变化，这是肝损伤发生的重要机制。中药保肝药具有清除自由基的作用，肝细胞内线粒体中所含的巯基酶类的活性得到保护，防止脂质发生过氧化反应，保护肝组织细胞。王雨[14]等人的研究表明，马齿苋中含有多种化学成分，主要包括三萜类、黄酮类、维生素 C、维生素 E、多种氨基酸、钾盐、钙盐及不饱和脂肪酸[15-17]，是含有丰富营养性物质的抗氧化剂，其中不饱和脂肪酸也具有清除自由基与抗氧化作用，对化学性肝损伤有一定的保护作用[18]。
第 3 章 制备工艺研究............................................11
3.1 处方确定.....................................................11
3.2 提取工艺研究...................................................11
3.2.1 仪器与试剂.................................................11
第 4 章 保肝软胶囊质量标准的研究.................................22
4.1 实验仪器与试药........................................... 22
4.1.1 实验仪器.................................................22
第 5 章 稳定性考察.............................................37
5.1 考察项目................................................... 37
5.1.1 性状....................................................37
5.1.2 鉴别.....................................................37
5.1.3 含量测定...................................................37
第 6 章 功能试验
6.1 化学性肝损伤模型
化学性肝损伤模型一般是用化学药物进行造模，如酒精、四氯化碳（CCl4）、氨基半乳糖(D-gal)等。CCl4作为经典的亲肝毒物，在工业上也有十分广泛的用途，它主要经过呼吸道与消化道进入生物体内，对人和动物均可导致不同程度的肝损伤[48]。目前，国内外研究多釆用 CCl4这一经典化学物质所建立的肝损伤模型。目前关于 CCl4对肝细胞损伤机理的研究包括氧化应激、CCl4肝毒性体、细胞因子、细胞调亡的作用机制等[49-52]。但其中公认的机制是自由基的形成所引发的一系列过氧化反应，CCl4在肝脏内主要是影响微粒体细胞色素氧化酶的代谢，致使肝脏生成大量的氧活性物，使膜系统发生过氧化反应，膜上的磷脂会大量被破坏，完整的生物膜结构被破坏，最终导致肝细胞的死亡[53]。
6.2 材料
6.2.1 仪器与试药
四氯化碳(分析纯)、橄榄油（上海融氏有限公司）、蒸馏水（双蒸水）、血清天冬氨酸氨基转移酶试剂盒(南京建成生物工程研究所)、血清丙氨酸氨基转移酶试剂盒(南京建成生物工程研究所)。保肝软胶囊，成人（体重按60kg计）日服用量为6粒/日，0.5g/粒，即3.0g/60kg。
6.2.2 实验动物
健康成年 Wistar 大鼠，180-220g，60 只，雌雄各半，由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供[使用许可证号：SCXK (吉) 2013-0015]，每 4 只动物一笼群养，温度为 20℃-22℃，湿度为 55%-65%，自由摄食、饮水，适应环境 1 周后进行试验。
6.2.3 计量选择
按成人（体重按60kg计）日摄入量3.0g/60kg的20倍、10倍、5倍设定1.0g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg 为三个剂量组的剂量。
6.3 实验方法
将大鼠分为 5 组，每组 12 只，雌雄各半，分别为空白对照组、CCl4模型对照组和 3 个 CCl4保肝软胶囊实验组。空白对照组皮下注射橄榄油 2ml/kg，其它4 组注射 25%CCL4橄榄油溶液 2ml/kg，每周 2 次，连续注射 8 周。实验自第 3周开始，3 个不同剂量的 CCl4保肝软胶囊实验组分别规定 1.0g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg 的保肝软胶囊作为动物实验剂量，软胶囊用橄榄油稀释至所需要的浓度，用灌胃的方式，给予实验大鼠(2ml/kg 体重)，空白对照组与模型对照组的大鼠则给予等体积蒸馏水，每日 1 次，每周称大鼠体重 1 次，调整灌胃量。于实验第 8 周末，于末次给 CCl4后，将各组动物隔夜禁食 12 小时，股动脉进行取血，分离血清测定 AST、ALT 值。
第 7 章 结 论
7.1 制备工艺研究
7.1.2 制剂成型工艺
最终确定保肝软胶囊制剂的成型工艺为：将处方量的葛根、栀子、肉豆蔻这三味药材进行乙醇提取，将处方量的沙棘进行超临界萃取，将这四味药材的提取物混合后，加入处方量的尼泊金乙酯、橄榄油与蜂蜡，升温后进行搅拌，均匀后作为软胶囊的内容物。将胶囊内容物与蒸馏水、甘油、明胶按照比例制成的胶片在软胶囊制备机上进行制备，得到成品保肝软胶囊。
7.2 保肝软胶囊质量标准的研究
7.2.1 薄层色谱法鉴别
对保肝软胶囊中栀子药材进行薄层色谱法鉴别试验，结果显示色斑特征性良好，阴性无干扰。
7.2.2.含量测定与方法学考察
采用 HPLC 法对保肝软胶囊中的葛根素和尼泊金乙酯的含量进行了测定，并且制定了二者的含量限度。规定软胶囊中葛根素的含量不得低于 12mg/粒，尼泊金乙酯的含量不得超过 53ug/粒。采用高效液相色谱法分别对保肝软胶囊制剂中的葛根素和尼泊金乙酯的线性关系、重现性、精密度、稳定性与加样回收率进行考察，试验结果良好。
结论：本研究中将保肝软胶囊的剂量设定为 1.0g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg 体重，结果表明保肝软胶囊的三个剂量组对 CCl4肝损伤模型显示出了一定的预防与保护作用，可以不同程度的降低血清 AST 的值与 ALT 的值，有效减轻肝脏损伤的程度，说明保肝软胶囊具有辅助改善化学性肝损伤的功效。
参考文献（略）