试验分析Runx2如何标示于口腔鳞状细胞癌组织

第 1 章 绪 论

口腔鳞状细胞癌（Oral squamous cell carcinoma ，OSCC)因为其高发病率和逝世亡率，对人们的性命形成极大要挟。口腔鳞状细胞癌轻易发作晚期转移，而且通过手术等医治方式无法明显进步生涯率，同时形成患者颜面部器官和功用的损失，重大影响患者的生涯质量。随着分子生物学开展，特殊是肿瘤分子生物学的开展极大的匆匆进了肿瘤的诊断和医治。其在肿瘤诊治方面具备伟大潜能，因而理解口腔鳞状细胞癌发作、开展的分子机制关于口腔癌的诊治具备主要意义。癌基因和抑癌基因在机体发育和分化历程中起主要调理作用，这些基因的失调会招致肿瘤的发作。三种 RUNT-相干家族基因，Runx1，Runx2 和 Runx3 在人类发育和肿瘤形成中具备主要作用。
多瘤病毒增强子结合蛋白 2/核心结合因子（polyomavirusenhancer-binding protein 2 (PEBP2)/core-binding factor，PEBP2/CBF）是一种异二聚体转录因子，由两个亚单位 α、β 构成。其中 α 亚单位有三种即 Runx1，Runx2 和 Runx3[1]。这三种转录因子具有一个相同的进化保守的 DNA-结合结构域，即 RUNT。哺乳动物只有一种基因编码 β 亚单位，PEBP2β/CBFβ。当 PEBP2β 与 Runx 蛋白异二聚化后，会增加 Runx 蛋白与 DNA 的亲和力。另外，异二聚化可能通过阻止 RUNT 结构域泛素化而稳定 Runx2。PEBP2β 对于 Runx 白行驶正常功能是必须的，PEBP2β 的失活能够消除 Runx 的功能。PEBP2/CBF 调节的靶基因中包括许多与肿瘤发生和细胞命运相关的基因。PEBP2/CBF 复合体对基因的调节呈现时间和空间特异性，它能够调节细胞分化、细胞周期进展和细胞增殖活性等多种功能[2]。Runx2 是成骨细胞分化成熟的关键调节因子，Runx2 可以促进特异性成骨细胞因子骨钙素、碱性磷酸酶以及基质金属蛋白酶-13 等表达。通常肿瘤细胞中的基质金属蛋白酶异常表达与肿瘤的浸润强弱呈正相关[3]；另外，Runx2 可诱导与血管形成密切相关骨髓内皮细胞的迁移；而肿瘤可诱导自身血管形成，这种缺陷的血管与肿瘤营养和细胞浸润及转移密切相关，Runx2 可能与肿瘤血管形成相关[4]。研究显示前列腺癌细胞表达成骨相关蛋白，包括 Runx2（是骨发育的关键转录调节因子）及其下游靶点如骨钙素，骨桥蛋白和骨涎蛋白等。Runx2 也能够直接诱导与增殖、侵袭和转移能力相关因子如基质金属蛋白酶-9 和血管内皮生长因子的表达，并促进原发灶肿瘤上皮间充质转变[3]。而目前国内尚未见有关 Runx2 在人口腔癌组织中表达情况研究的报道。
本研究旨在通过运用免疫组织化学技术检测 Runx2 在口腔癌组织中表达情况，比较不同分化程度的 OSCC 的 Runx2 表达差异。结合有关临床资料，了解 Runx2 在口腔癌组织的发生发展中的作用机制，分析其表达与人口腔癌恶性程度及转移的相关性，寻找预测和治疗口腔癌发生及转移的新分子靶点。探讨 Runx2 与口腔癌预后的关系及在口腔癌的诊断和治疗中可能的作用，为进一步深入研究提供基础。

第 2 章 文献综述Runx蛋白家族同恶性肿瘤发生的关系

2.1 Runx 蛋白结构
Runx（runt 结构域转录因子）家族基因，又称核心结合因子α家族、多瘤增强子结合蛋白家族和 AML 家族。编码异二聚体多瘤病毒增强子结合蛋白 。

2.2 核心结合因子（polyomavirus enhancer-binding protein 2 (PEBP2)/core-binding factor，PEBP2/CBF）的α亚单位。哺乳动物含有 3 种 Runx 蛋白，包括 Runx1，Runx2 和 Runx3，它们共用一个 β 亚基。Runx 蛋白与 β 亚基异二聚化后，会显著增加 Runx 蛋白与 DNA 的亲和力。更为重要的是，异二聚化能通过阻止 Runt 结构域泛素化而稳定 Runx2。β 亚基对于 Runx蛋白行使正常功能是必须的[5]。Runx 蛋白的氨基酸序列内含有高度保守 Runt 结构域[1]和 VWRPY 模序，VWRPY 模序一般位于 C 末端。另外，进化保守的 PY 模序（PPxY）也较常见。另外还包含转录激活域、转录抑制域、核定位信号等结构域。研究显示在其三维拓补结构中，Runt结构域具有S-型免疫球蛋白折叠，并且发现它与STAT-（3Signaltransducer and activator of transcription-3）密切相关[6]，它负责 Runx 蛋白的核定位。Runx基因对于个体发育至关重要，Runx 基因敲出后会导致严重的发育缺陷。Runx 蛋白可调节许多与肿瘤中发生及细胞命运相关基因。

2.3 Runx 与人类恶性肿瘤
2.3.1 RUNX1 缺陷与白血病密切相关Runx1在造血系统中具有重要的作用，其功能缺陷常导致白血病。Jim Downing 等人[7]通过靶向干扰Runx1的功能首次在小鼠中发现了其在造血系统中的作用。Runx1是人类白血病患者染色体异位的最常见位置。Runx1位于21.q22.3基因位点上，其编码的cDNA有12种变异剪切体[8]。t(8;21)(q22;q22)是急性髓性白血病最常见的染色体转位，常导致Runx1与MTG8（Runx1类似物）形成嵌合基因，Runx1-MTG8融合蛋白是核定位蛋白，能与DNA模序及CBFβ结合，但是由于Runx1-MTG8融合蛋白缺少Runx1蛋白C末端的反式激活序列，因此无法与共激活因子CBP、p300等结合，因此Runx1-MTG8融合蛋白缺乏Runx1的反式转录激活作用[9]。儿童急性淋巴细胞白血病中，t(12;21)(p13;q22)染色体转位的导致Runx1与TEL形成大量融和蛋白；另外，慢性髓细胞白血病急性转化或骨髓增生异常综合征中的t(3;21)(q26;q22)和t(16;21)(q24;q22)染色体转位，也形成大量融合蛋白。TEL-Runx1融合蛋白可竞争性结合Runx1的靶结合位点，抑制Runx1调节基因T细胞受体和白细胞介素-3的转录[10,11]。经统计，26%人类急性白血病中都存在Runx1基因的断裂。
研究表明Runx1造血干细胞及淋巴细胞的发育和分化是必需的。Runx1功能缺陷与多种血液系统疾病相关，是造血系统重要的调节因子[12]。大多数情况下嵌合基因参与Runx1定位会抑制Runx1功能，只有少数情况下其表现出增强Runx1的功能。研究表明，Runx1功能缺陷阻碍粒细胞的分化，突变的Runx1 似乎对细胞周期起着负性调节作用。条件敲出Runx1 小鼠在这方面提供重要的线索[13]。如果Runx1-嵌合基因导致Runx1基因失活从而导致白血病，那么Runx1突变导致功能丧失也可能导致白血病。事实上散发和家族性杂合和纯合Runx1突变常发生于白血病患者，这种突变使他们易患急性髓性白血病。另外，基因突变导致的Runx1功能增强，也可能具有至白血病性。如唐氏综合征相关的急性巨核细胞白血病可能是由于Runx1 额外的复制体导致，因为唐氏综合征是由21号染色体三体性所致，这提示Runx1的超剂量可能会导致白血病。因此，Runx1表达水平的精确调控对于机体的正常生理功能非常重要。
2.3.2 RUNX2 促进人类恶性肿瘤进展的可能机制Runx2蛋白内含有1个Runt结构域、一个核定位信号、3个转录激活区(AD)、1个转录抑制区，其他结构域功能尚不清楚。Runx2通过与CBFβ形成异二聚体而增加Runt与DNA的亲和力，并保护其不被快速降解。Runx2有3种变异体，具有不同的N末端序列。Ⅰ型N末端起始序列为MRIPVD，Ⅱ型为MASNSL，Ⅲ型为MLHSPH。分别由两种不同的转录启动子Pl、PZ调控。另外这两个启动子序列中还有多种其他转录因子结合位点，如Ap-1（activator protein 1）、NF-KB (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activatedB cells)、HLH(Hemophagocytic lymphohistiocytosis)和c-Myb(myeloblastosis)等[18]。
2.3.2.1 Runx2影响肿瘤细胞的迁移和浸润Runx2 是成骨细胞分化成熟的关键调节因子。Runx2 可以促进特异性成骨细胞因子骨钙素、碱性磷酸酶以及基质金属蛋白酶等的表达。通常肿瘤细胞中的基质金属蛋白酶异常表达与肿瘤的浸润强弱呈正相关[3]；另外，Runx2 可诱导与血管形成密切相关骨髓内皮细胞的迁移；而肿瘤可诱导自身血管形成，这种缺陷的血管与肿瘤营养和细胞浸润及转移密切相关，因此 Runx2 可能与肿瘤血管形成相关[4]。研究显示前列腺癌细胞表达成骨相关蛋白，包括 Runx2 及其下游靶点如骨钙素，骨桥蛋白和骨涎蛋白等。越来越多的证据表明，前列腺癌转移能力受到 Runx2 的调控。

目录
第 3 章 实验研究................................... 9
3.1 材料和方法 ............................. 9
3.1.1 主要试剂 ................................ 9
3.1.2 仪器 .................................. 9
第 4 章 讨论 ................................. 16
第 5 章 结 论................................... 19

结 论
1.Runx2的高表达与上皮组织病变的良恶性及口腔鳞状细胞癌的进展有关。Runx2可能作为口腔鳞状细胞癌早期诊断的一个辅助指标。
2.Runx2在组织分化程度越低的口腔鳞状细胞癌组织中的表达越高，提示Runx2有望成为检测口腔鳞状细胞癌恶性程度的标记物。

参考文献
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