导语：本研究以CO_2激光切除狗的双侧声带,每组分别立即于术后局部涂布丝裂霉素,几丁糖和生理盐水(对照组)各5分钟。术后一周于各组中随机抽取3只,检测声带中的碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1的表达,并以透射电镜观察声带中成纤维细胞的超微结构。进而比较CO2激光狗声带切除术后局部涂布丝裂霉素和几丁糖预防声带粘连的效果。 方法由本站硕士论文中心整理。
1 前言
医用几丁糖能抑制成纤维细胞，促进上皮细胞的生成从而起到抑制瘫痕组织生长的作用，临床上已经用于预防术后腹腔、盆腔的粘连，取得了良好的效果，同时也鲜有不良反应的报道。鉴于几丁糖预防粘连的良好效果以及较少的不良反应，在本实验中我们首先建立一个CO:激光狗声带切除的模型，然后用该模型来比较丝裂霉素C和几丁糖预防声带粘连的效果。
2材料与方法
2.1材料
2.1.1实验动物
实验动物及分组:雄性狗25只，sPF级，1‘/2一2年龄，体重10一12公斤，购买并饲养于安徽医科大学动物实验中心。采用随机数字表法将其中24只狗分为几丁糖组和对照组，每组8只。留取1只作为空白组。
2.1.2试剂
2.1.2.1丝裂霉素C旧本协和发酵工业株式会社)，医用几丁糖(上海其胜生物制剂公司)。
2.1.2.2超薄染色试剂:
l)2%戊二醛(Glutaraldehyde，CSHSOZ)固定液(作前固定用)
0.lmol/L二甲砷酸钠缓冲液(pH7.4)92ml
25%戊二醛原液8ml
存放于4℃冰箱保存。
2)2%饿酸 (OsmiumTetroxide，0504)水溶液(母液)
饿酸19
双蒸水SOml
配制于棕色磨口玻璃瓶内。存放于4℃冰箱保存。
3)1%的饿酸固定液(作后固定用)
0.lmol/L二甲砷酸钠缓冲液1份
2%的饿酸水溶液母液1份
存放于4℃冰箱保存。
4)0.Zmol/L二甲砷酸钠缓冲液(母液):
二甲砷酸钠42.89
氯化钙1.09
双蒸水加至1000ml
0.lmol/L二甲砷酸钠缓冲液
0.2m01/L二甲砷酸钠缓冲液(母液)250ml
双蒸水250ml
最后用 1NHCI将pH调至7.4，存放于4℃冰箱内保存。
5)洗涤液
6)脱水剂:
(0.lmol/L二甲砷酸钠缓冲液)
30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%乙醇，环氧丙烷
7)70%的乙醇醋酸铀饱和液
8)包埋剂
618环氧树脂(国产)4.59
十二碳烯基丁二酸配 (DDSA)3.59
邻苯二甲酸二丁酷 (DBP)0.359
2，4，6一三(二甲氨基甲基)苯酚(DMP一 30)0.075ml(在上三药品充分拌匀后，缓慢点滴加入)。
9)0.5%聚乙烯醇缩甲醛(Formvar)液(氯仿配制)
10)铀染色液:700k乙醇醋酸铀饱和液(醋酸铀或醋酸双氧铀一定量溶于70%乙醇中，以出现不能溶解，发生沉淀为度)。
11)铅染色液:柠檬酸铅(或叫构椽酸铅)染色液
硝酸铅[Pb(NO3)2〕 1.339
柠檬酸钠〔Na3(C6HSO7)•ZHZO」1.769
双蒸水30ml，将以上悬液盛于有刻度的SOml容量瓶中，激烈地不断地摇动30分钟后，加入8ml新鲜配制的州的Na0H，此时乳白色的混浊液立即变为无色透明溶液，再用双蒸水加至SOml后备用。
2.1.2.3ELISA试剂:狗碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒pBS液:o.ZMPB5oml，加入Naels.7一9.09，加双蒸水至l000ml，调PH至7.25一7.35。 (o.ZMPB:ls.6gN川ZPo;•ZHZo加双蒸水至500ml;71.6329N处 HPO4.12H2O加双蒸水至1000ml，将两溶液以19:81体积充分混合，调 PH7.4一 7.5)。
2.1.2.3Masson染色试剂:
1.丽春红酸性品红液:丽春红0.79酸性品红0.39蒸馏水99ml冰醋酸 1ml
2.苯胺蓝液:苯胺蓝29蒸馏水gsml醋酸2ml
3.亮绿液:亮绿0.29蒸馏水 100ml冰醋酸 0.2ml
4.苦味酸酒精液:苦味酸在95%酒精中的饱和液20ml，加95%酒精10ml
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目录：
略词表 5-6
丝裂霉素和几丁糖预防CO_2激光声带切除术后声带粘连的比较 6-27
中文摘要 6-8
英文摘要 8
前言 9
......
附录 27-29
致谢 29-30
综述 30-35
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