引言
烧烫伤是人们在日常生活中常见的一种意外伤害，可以由高温、电、化学药品等对皮肤或肉体造成的伤害。烧烫伤按深度一般分为三度。本实验主要研究的二度烫伤。二度烫伤可分为浅二度和深二度。浅二度仅伤及皮肤真皮浅层，部分生发层健存。因渗出液较多，其水泡也较饱满，水泡破裂后创面渗出液明显。创底肿胀发红；感觉剧烈疼痛；皮肤温度增高，若无感染等并发症，一般 2 周可恢复。愈合后不留疤痕，短期内可能有色素沉着，可恢复皮肤功能。深二度伤及真皮深层，有残留皮肤附件。因变质的表层组织变厚，水泡较小或扁薄，皮肤感觉稍迟钝，皮肤温度也可能稍低。去除表皮后创面呈浅红，可能有网状栓塞血管生成；皮肤表面渗出液少，但底部肿胀明显。若无感染等并发症，一般 3～4 周可恢复。因修复过程中间有部分肉芽组织生成，故留有疤痕，但保存了基本皮肤功能。皮肤除红肿热痛等感觉还会出现水泡。烧烫伤不仅给患者身心带来创伤，同时也给生活带来不便。
创面愈合过程包括炎症反应期、细胞增殖期和结构重塑期[1]。创面损伤后，中性粒细胞和单核巨噬细胞等炎症细胞聚集到创面，创面内的单核巨噬细胞和内皮细胞转移至创面，并不断增殖。增殖过程后，内皮细胞和成纤维细胞合成多种生长因子，进一步促进创面愈合。EGF（表皮细胞生长因子）和 bFGF（成纤维细胞生长因子）是生长因子中重要组成部分。EGF 是多肽类物质，可刺激表皮角质细胞及纤维细胞增殖，促进新血管的形成和核酸蛋白质的合成。bFGF 促进成纤维细胞和内皮细胞增殖，促进肉芽组织形成和新生毛细血管化[2-4]。
烧烫伤可能发生在全身各个部位，局部用药优于全身用药[5]，因此在烧烫伤治疗中外用药物占重要地位[6]。常用于治疗烧烫伤的外用药有中药及中药复方制剂，天然药物，抗菌类药物，糖胺聚糖（glycosaminoglycan,GAGs）类药物，生物因子类药物，酶制剂及局部止痛药物。其中中药及其复方制剂主要以清热解毒、活血止痛、消肿、敛疮生肌、为主，常用药有紫草、地榆、黄芩、黄连、黄柏、石膏、冰片等[7]。中药治疗的优势是在中、小面积Ⅱ度以下烧烫伤。天然药物主要是将植物中提取物用于治疗烧烫伤。抗菌类药物主要是用于防止全身感染，减少细菌在创面的生长繁殖，外用抗菌药物主要有磺胺类、抗生素类、碘胺类、喹诺酮类、金属盐类等。磺胺类抗菌药治疗烧烫伤主要是磺胺嘧啶银和磺胺米隆。磺胺嘧啶银可抑制绿脓杆菌生成，能促进创面愈合，适用于Ⅱ度或Ⅲ度烧烫伤。磺胺米隆主要作用于绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和破伤风杆菌，可以快速渗入创面及结痂中，促进创面皮肤生长愈合提高植皮成活率，适用于大面积创伤后的感染。糖胺聚糖类药物主要包括肝素、硫酸肝素、硫酸软骨素、硫酸角质素、透明质酸和壳聚糖等。糖胺聚糖具有抗凝血抗炎功效，能增强炎症细胞作用，促进肉芽组织的生成。生长因子类药物包括碱性成纤维生长因子和表皮生长因子。碱性成纤维生长因子是对细胞生长分化有调节作用的活性多肽，对创面细胞有促进增殖分裂的作用，加快创面愈合，作用范围广。表皮细胞生长因子主要刺激上皮细胞和成纤维细胞的生成，加快创面愈合。酶制剂中使用最广的是胶原酶，其可分解创面的失活组织而达到酶学清创的作用，可促进肉芽组织及上皮细胞组织的形成，促进创面愈合。局部止痛药用于烧烫伤产生的剧烈疼痛，但副作用大且有成瘾性。
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第一部分龙血竭-β-环糊精包合物凝胶的制备
1 实验材料
龙血竭原粉（昆明市延安医院提供）
β-环糊精（曲阜天利制药有限公司，生产批号：20130310）；
卡波姆-934（上海人民制药厂，批号 000406）；
乙醇（天津市风船化学试剂科技有限公司，生产批号：20130903，分析纯）；
三乙醇胺(天津市恒兴化学试剂制造有限公司，生产批号：20120610)；
甘油（昆明振华制药厂）；
UV-2401PC 紫外分光光度计（日本岛津公司)；
电热恒温水浴锅（北京永光明医疗仪器厂）；
FA2004 电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司）；
IKAC-MAGHS4 加热磁力搅拌器（艾卡仪器设备有限公司）
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2 实验方法及结果
2.1 龙血竭的成分与性质
龙血竭的主要化学成分为黄酮类、酚类、甾醇类、甾体皂苷类等[13]。黄酮类化合物主要有黄酮、二轻黄酮、二氢查耳酮、查尔酮、黄烷等。二氢查耳酮类化合物是龙血竭中十分丰富的化合物，分为龙血素 A（4＇-羟基-2，4-二甲氧基二氢查耳酮），龙血素 B（4＇-羟基-2,4,6-三甲氧基二氢查耳酮），龙血素 C（4，4＇-二羟基-2-甲氧基二氢查耳酮）和龙血素 D（6-甲氧基-2,4-二甲氧基二氢查耳酮）。龙血竭性温、平，味甘、咸，无毒，入血分，归心、肝、肾三经，有活血化瘀、消肿止痛、收敛止血、软坚散结、生肌敛疮等功效，主要用于外伤出血，跌打损伤，溃疡不敛，瘀滞作痛等症状。2.2 龙血竭-β-环糊精包合物的制备
2.2.1 正交试验设计
选择包合物中收率和包合率作为筛选包合物最佳工艺条件的指标，其计算公式如下：
收率%=包合物实际质量（g）/β-CD 加入量（g）+加药量（g） ×100%
包合率%=包合物中含药量（g）/投药量（g）×100%
权重系数为 0.3:0.7。
根据参考文献[14-16]选择包合搅拌时间，包合温度，龙血竭和β-环糊精物料比作为考察因素，选用 L9（33）进行正交试验，因素水平见表 1。
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第二部分 龙血竭-β-环糊精包合物凝胶的药效学研究
1 实验材料………………………………………………………………………………………26
2 实验方法及结果
2.1 统计学方法…………………………………………………………………………………26
2.2 对Ⅱ度烫伤的小鼠皮肤愈合作用…………………………………………………………26
2.3 对小鼠皮肤刺激性试验……………………………………………………………………30
2.4 对冰醋酸致小鼠扭体的止痛作用…………………………………………………………30
第二部分龙血竭-β-环糊精包合物凝胶药效学研究
1 实验材料
重组人表皮生长因子凝胶（中国·桂林华诺威基因药业有限公司，20g:200μg，批号：201405023A）；京万红软膏（天津达仁堂京万红药业有限公司，20g，批号：211975）；龙血竭-β-环糊精包合物凝胶剂高、中、低剂量（龙血竭含量分别为 5%、2.5%、1%）；
昆明种小鼠（清洁级，雌雄各半，体重 20～30g，昆明医科大学提供，合格证号 SCXK(滇)2011-0008）。ICR 小鼠{清洁级雄性，体重 20±2g，长沙市天勤生物技术有限公司提供，许可证号 SCXK(湘)2014-001。实验动物环境及设施符合《中华人民共和国实验动物规范》。
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2 实验方法及结果
2.1 统计学数据处理方法
将昆明种小鼠 50 只，雌雄各半，雌雄分别按照随机区组法随机分组，分为5 组，每组 10 只，即阳性组、模型组、龙血竭-β-环糊精包合物凝胶高、中、低剂量组。将小鼠背部脱毛，腹腔麻醉，用 10N 硫酸浸泡的滤纸片（2cm×2cm）贴在小鼠背部 15s，2 小时后，小鼠背部出现水泡，对烫伤面进行病理组织学鉴定，造成Ⅱ度烫伤模型[26]。
模型组不用药。按照创面大小 0.05g/cm2给药[27]，阳性组背部涂抹重组人表皮生长因子凝胶，龙血竭-β-环糊精包合物凝胶高、中、低剂量组分别涂抹龙血竭含量为 5%、2.5%、1%的龙血竭-β-环糊精包合物凝胶，每天 2 次，连续用药10 天。
观察皮肤创面结痂、脱痂、水肿和感染情况。记录愈合时间。烧伤后 0、6、8、10 d 用透明硫酸纸描记创面，以此为模板，将质地均匀的硬纸板剪成同样大小，然后用电子天平称定质量，以质量代替面积，依据创面愈合率=(原始烫伤面积一未愈合面积)／原始烫伤面积，计算创伤愈合率。
与模型组相比，龙血竭-β-环糊精包合物凝胶高、中、低剂量组在第 6 天-10天小鼠创面愈合率均有不同程度升高。龙血竭-β-环糊精包合物凝胶高剂量组在第 6 天-10 天小鼠创面愈合率升高有显著性差异（P＜0.01），龙血竭-β-环糊精包合物凝胶中剂量组在第 8 天-10 天小鼠创面愈合率升高有显著性差异（P＜0.01），龙血竭-β-环糊精包合物凝胶低剂量组在第 10 天小鼠创面愈合率升高有显著性差异（P＜0.01）。结果表明：龙血竭-β-环糊精包合物凝胶具有提高烫伤小鼠皮肤创面愈合率的作用。见表 10。
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3 讨论
1.小鼠烫伤模型一般是将小鼠背部脱毛麻醉后，固定于带孔木板上，使脱毛皮肤裸露于木板孔内，再将木板置电热恒温水浴锅上或恒温电热仪[37]，使裸露的背部皮肤浸泡于沸水浴内，15-18s 取出，用干净的纱布擦干，及造成Ⅱ度烫伤模型。本实验预实验时采取改良的此装置进行试验，将沸水注入试管中，再将试管置于小鼠皮肤上 15s，其致小鼠烫伤程度不一，差异性较大，故没有用此方法。任秀奇在中国烧伤创疡杂志中发表的《硫酸、氢氧化钠、黄磷等化学物质烧伤对免疫功能的影响》提到硫酸、氢氧化钠、黄磷等化学物质也可致Ⅱ度烫伤，且较易控制，所以本实验采用硫酸致小鼠Ⅱ度烫伤模型。
申海艳等人在时珍国医国药中《海南血竭的抗菌活性成分研究》中对海南血竭的乙醇提取物乙酸乙酯部分的化学成分及其抗菌活性进行深入研究，共分离鉴定了 8 个化合物。活性测试结果表明有 7 个化合物对金黄色葡萄球菌的生长有抑制作用。我们直接用不同浓度的凝胶剂进行了抑菌试验，结果未发现抑菌作用。这表明龙血竭在该浓度下无抑菌作用，需要提纯到单体后才可能显示抑菌作用。经试验证实龙血竭-β-环糊精包合物凝胶 3 个剂量组的烫伤小鼠的皮肤愈合时间均有不同程度的缩短，龙血竭-β-环糊精包合物凝胶 3 个剂量组在第 6天-10 天小鼠创面愈合率均有不同程度升高且对皮肤无刺激性作用，有显著延长小鼠的疼痛反应潜伏期，减少小鼠扭体次数的作用，显著延长小鼠的痛阈值，对二甲苯所致的小鼠耳肿胀有明显的抑制作用。说明龙血竭-β-环糊精包合物凝胶剂具有促进皮肤创面愈合，镇痛抗炎的作用，为进一步研发制剂的提供了药理学依据。本实验说明了为龙血竭-β-环糊精包合物凝胶可以作为烫伤药，为之后烫伤的临床研究提供了依据。由于条件限制，所做内容比较基础，在之后的研究中可以注重皮肤给药的长期毒性实验，考察临床用药的安全性。
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参考文献（略）